定位重塑型纳米凝胶介导的药物共递送系统的研究

发布时间：2022-02-21 08:54

　　肿瘤是引起人类死亡率持续攀升的元凶之一,肿瘤的增殖与转移主要凭借肿瘤血管来供应必要的氧气与营养,血管缺乏的肿瘤具有自限性生长的特点。如今,众多的抗血管药物已被开发出来用于阻断外界营养供给实现肿瘤饥饿治疗,但此药物发挥效用后,肿瘤细胞会通过自噬增强效应为自身增殖提供内源性营养物质,从而进行自我保护导致抗肿瘤效果严重下降。破坏肿瘤血管系统的同时抑制增强的自噬,对肿瘤的外源性与内源性营养来源进行双重阻断,将会是一种有前途的抗肿瘤方法。因此,本课题以海藻酸钠（Sodium alginate,Alg）为基质材料,Fe3+为交联剂与门控开关,康普瑞汀（Combretastatin A4,CA4）及硫酸羟基氯喹（Hydroxychloroquine,HCQ）为治疗药物,构建了一种具有定位重塑功能的智能纳米凝胶CA4-FeAlg/HCQ,用于共递送血管阻断剂CA4与自噬抑制剂HCQ,实现CA4在肿瘤血管和HCQ在肿瘤细胞中的贯序释放,以及对A549非小细胞肺癌的协同治疗。本课题首先将血管阻断剂CA4接枝到Alg上,合成接枝率为14%的Alg-CA4偶联物,提高CA4的生物利用度与稳定性。然后与Fe3+... 

【文章来源】：郑州大学河南省211工程院校

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
中英文缩略词
第一章 前言
第二章 CA4-FeAlg/HCQ纳米凝胶的合成及表征
    1 仪器与试剂
        1.1 仪器
        1.2 试剂
    2 实验内容
        2.1 Alg-CA4偶联物的合成
        2.2 Alg-CA4偶联物的表征
            2.2.1 紫外-可见光(UV-Vis )全波长扫描
            2.2.2 傅立叶变换红外光谱(FT IR)表征
            2.2.3 核磁共振氢谱(~1H NMR)检测
            2.2.4 Zeta电位的考察
        2.3 Alg-CA4接枝率的考察
            2.3.1 CA4标准曲线的建立
            2.3.2 接枝率的测定
        2.4 CA4-FeAlg的制备与表征
            2.4.1 CA4-FeAlg的制备
            2.4.2 透射电镜(TEM)表征
            2.4.3 CA4-FeAlg在模拟TME下的粒径转化研究
        2.5 HCQ含量测定方法的建立
            2.5.1 HCQ的紫外-可见光(UV-Vis)全波长扫描
            2.5.2 HCQ标准曲线的建立
        2.6 CA4-FeAlg/HCQ的制备与表征
            2.6.1 CA4-FeAlg载药能力的考察
            2.6.2 CA4-FeAlg/HCQ的制备
            2.6.3 粒径分布及电位的考察
            2.6.4 分散性考察
        2.7 CA4-FeAlg/HCQ的体外释药实验
    3 结果与讨论
        3.1 Alg-CA4偶联物的表征
            3.1.1 UV-Vis全波长扫描分析
            3.1.2 FT-IR表征结果
            3.1.3 ~1H NMR检测
            3.1.4 Zeta电位的考察
        3.2 Alg-CA4接枝率的确定
        3.3 CA4-FeAlg的制备与表征
            3.3.1 TEM表征
            3.3.2 CA4-FeAlg在模拟TME下的粒径转化研究
        3.4 HCQ含量测定方法的建立
            3.4.1 HCQ的紫外-可见光全波长扫描
            3.4.2 HCQ标准曲线的建立
        3.5 CA4-FeAlg/HCQ的制备与表征
            3.5.1 CA4-FeAlg载药能力的考察
            3.5.2 粒径分布及电位的考察
            3.5.3 分散性考察
        3.6 体外释药实验
    4 本章小结
第三章 CA4-FeAlg/HCQ纳米凝胶的体外抗肿瘤活性评价
    1 仪器与试剂
        1.1 仪器与设备
        1.2 试剂
        1.3 主要试剂的配制
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
            2.1.1 细胞的复苏
            2.1.2 细胞的培养
            2.1.3 细胞的冻存
        2.2 A549细胞对纳米凝胶的摄取行为考察
        2.3 溶酶体共定位的研究
        2.4 体外·OH的测定
        2.5 A549细胞内H_2O_2水平的检测
        2.6 A549细胞内pH值的检测
        2.7 溶酶体的损伤研究
        2.8 CA4-FeAlg/HCQ的自噬抑制考察
            2.8.1 免疫组化方法
            2.8.2 ELISA试剂盒考察自噬水平变化
        2.9 体外三维多细胞球检测肿瘤深部渗透
            2.9.1 体外三维多细胞球模型的建立
            2.9.2 肿瘤深部渗透实验
        2.10 SRB法测定CA4-FeAlg/HCQ对A549细胞的毒性行为
            2.10.1 SRB法
            2.10.2 A549细胞的抑制率实验
        2.11 Calcein-AM/PI双染色法检测细胞活性
    3 结果与讨论
        3.1 A549细胞对纳米凝胶的摄取行为考察
        3.2 溶酶体共定位的研究
        3.3 体外·OH的测定
        3.4 A549细胞内H_2O_2水平的检测
        3.5 A549细胞内pH值的检测
        3.6 溶酶体的损伤研究
        3.7 CA4-FeAlg/HCQ的自噬抑制考察
            3.7.1 免疫组化方法
            3.7.2 ELISA试剂盒考察自噬水平变化
        3.8 体外三维多细胞球检测肿瘤深部渗透
        3.9 SRB法测定CA4-FeAlg/HCQ对A549细胞的毒性行为
        3.10 Calcein-AM/PI双染色法检测细胞活性
    4 本章小结
第四章 CA4-FeAlg/HCQ纳米凝胶的体内活性研究
    1 仪器与试剂
        1.1 仪器
        1.2 试剂
    2 实验方法
        2.1 动物模型
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 A549荷瘤裸鼠模型的建立
        2.2 体内分布实验
        2.3 免疫荧光染色观察体内肿瘤深部渗透性能
        2.4 CA4-FeAlg/HCQ在A549荷瘤裸鼠体内的药效学评价
            2.4.1 实验分组与操作步骤
            2.4.2 H&E染色法检测组织病理变化
        2.5 肿瘤血管密度的考察
        2.6 冰冻切片检测肿瘤部位的ROS水平
        2.7 肿瘤部位的自噬水平研究
    3 结果与讨论
        3.1 体内分布结果
        3.2 体内肿瘤深部渗透性能的分析
        3.3 CA4-FeAlg/HCQ在A549荷瘤裸鼠体内的药效学评价
            3.3.1 治疗期间裸鼠肿瘤体积与体重的变化
            3.3.2 H&E染色法检测组织病理变化
        3.4 肿瘤血管密度的考察
        3.5 肿瘤部位的ROS水平
        3.6 肿瘤部位的自噬水平研究
    4 本章小结
第五章 全文总结
参考文献
个人简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]卵巢恶性肿瘤化疗研究进展[J]. 牛星燕,张冬萍,李飞霞,彭芸花.  国际妇产科学杂志. 2020(02)
[2]常规苏木精-伊红HE染色与环保试剂HE染色的效果对比[J]. 郑建华,金玉兰,邹泽阳.  中国医学装备. 2019(04)
[3]4种细胞毒活性方法评价紫草素体外肿瘤细胞抑制作用效果[J]. 柴冰阳,陈泽慧,张闪闪,应雪,张波.  中草药. 2019(01)
[4]病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果观察[J]. 和月生.  中国现代药物应用. 2018(07)
[5]基于肿瘤微环境响应的纳米凝胶载药系统研究进展[J]. 尚星星,叶孟原,彭晏,蔡萌,祝红达.  医药导报. 2016(11)
[6]Earle’s盐平衡液饥饿诱导DLD-1,HCT-116,A2780,CHO,Hep G2和SMMC7721肿瘤细胞系自噬发生的时间优化（英文）[J]. 张文亮,张明明,刘斌,石宏顺,王海河.  中山大学学报(自然科学版). 2016(04)
[7]海藻酸钠的特性及其在食品中的应用[J]. 詹现璞,吴广辉.  食品工程. 2011(01)

博士论文
[1]葡萄糖转运体介导及肿瘤微环境响应新型靶向递药系统的研究[D]. 马鹏凯.北京中医药大学 2018
[2]狗枣猕猴桃多酚的抗氧化与抗肿瘤效应研究[D]. 左丽丽.哈尔滨工业大学 2013
[3]小分子药物与牛血清白蛋白相互作用研究[D]. 徐洪亮.吉林大学 2013
[4]聚磷酸酯纳米凝胶作为抗癌药物输送载体的研究[D]. 吴卷.中国科学技术大学 2010

硕士论文
[1]共附生微生物抗肿瘤活性菌的筛选、鉴定及活性产物的研究[D]. 马君千.扬州大学 2012
[2]抑制自噬与抗血管联合治疗肝癌的实验研究[D]. 李丁.第二军医大学 2011



本文编号：3636921