牛樟芝三萜的分离纯化与抗肿瘤活性研究

发布时间：2023-05-14 21:38

　　牛樟芝是一种生长于台湾的珍稀药用真菌,包含多糖、黄酮、三萜等多种活性成分,具有抗肿瘤、抗炎症、增强免疫、保肝和护肝等多种功效。其中,三萜类化合物含量丰富,赋予牛樟芝子实体以苦味,是最重要的药用资源研发对象之一。目前,对牛樟芝三萜的研究主要集中在培养基优化、生产工艺优化和子实体成分研究等方面。对于三萜类单一化合物的分离纯化及构效关系的研究则较少,限制了该资源的应用。针对这一问题,本课题在前期固态发酵优化的基础上,对牛樟芝菌丝体三萜类化合物进行分离纯化,并对其体外抗肿瘤活性与作用机制进行研究。主要的研究结果如下:1.在80℃条件下,以80%乙醇溶液对固态发酵菌丝体进行提取,固液体积比为1:60。再经石油醚萃取,除去脂类物质,获得的提取物即是牛樟芝粗三萜(Antrodia cinnamomea triterpenoids,ACTs)。以香草醛-冰醋酸法进行检测,计算得三萜含量为15.90±0.90 mg/g。2.采用硅胶柱层析对ACTs进行分离。经优化,确定洗脱剂为异丙醇/石油醚混合液(体积比1:4)和蒸馏水,最优径高比为1:8。洗脱过程中,先以两倍柱体积的异丙醇/石油醚混合液进行洗脱,再以...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语表
1 前言
    1.1 概述
    1.2 牛樟芝三萜分离纯化研究进展
        1.2.1 牛樟芝三萜分离
        1.2.2 牛樟芝三萜的进一步纯化
    1.3 牛樟芝三萜体外抗肿瘤作用机理
        1.3.1 经典凋亡通路诱导细胞凋亡
        1.3.2 DNA损伤诱导凋亡
        1.3.3 抑制肿瘤细胞转移
    1.4 研究目的与研究内容
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 主要内容
2 材料方法
    2.1 菌种和细胞
    2.2 主要试剂
    2.3 主要实验仪器
    2.4 方法
        2.4.1 牛樟芝三萜粗提物(ACTs)的获取及含量检测
        2.4.2 牛樟芝三萜分离条件优化
        2.4.3 牛樟芝三萜高效液相色谱(HPLC)检测条件的建立
        2.4.4 ACTs-c的 LC-MS检测及非靶向代谢组分析
        2.4.5 肿瘤细胞的体外培养
        2.4.6 体外抗肿瘤活性的检测
        2.4.7 牛樟芝三萜对凋亡通路蛋白的作用
        2.4.8 肿瘤细胞凋亡和周期阻滞分析
        2.4.9 细胞线粒体分离
    2.5 数据统计与分析
3 结果与分析
    3.1 牛樟芝三萜粗提物ACTs含量的检测
    3.2 硅胶柱层析条件的优化
        3.2.1 流动相的确定
        3.2.2 层析柱径高比的确定
    3.3 ACTs的高效液相色谱分析
        3.3.1 各组分的HPLC检测结果
        3.3.2 ACTs-a的 HPLC检测与纯化
    3.4 ACTs-c组分LC-MS检测及非靶向代谢组学分析
    3.5 牛樟芝三萜(ACTs)的抗肿瘤活性
        3.5.1 ACTs对He La细胞的影响
        3.5.2 ACTs对 He La细胞周期阻滞的影响
        3.5.3 ACTs对 He La细胞凋亡通路蛋白与周期通路蛋白的影响
    3.6 ACTs-a的抗肿瘤活性
        3.6.1 ACTs-a对 He La细胞的影响
        3.6.2 ACTs-a对S180 细胞的影响
    3.7 ACTs-b的抗肿瘤活性
    3.8 ACTs-c的抗肿瘤活性
        3.8.1 ACT-c对He La细胞的影响
        3.8.2 ACT-c对S180细胞的影响
    3.9 ACTs-c对 He La细胞凋亡通路蛋白与周期通路蛋白的影响
4 小结与讨论
    4.1 小结
    4.2 讨论
    4.3 展望
参考文献
致谢
硕士期间论文发表情况



本文编号：3817815