日本黄姑鱼皮活性肽的制备及其免疫作用研究

发布时间：2020-05-08 22:46

【摘要】：近年来,海洋生物活性肽以其安全无毒优良特点在食品保健品领域崭露头角,日本黄姑鱼(Nibea japonica)营养丰富,味道鲜美,在其食品生产及精制过程中产生的鱼皮、鱼鳞等副产品具有高附加利用价值;本课题以日本黄姑鱼皮为原料,优化日本黄姑鱼皮活性肽的酶解制备工艺,研究其体内外免疫活性,以期为进一步研究其应用提供基础。本课题采用蛋白酶水解法,以酶解产物对RAW 264.7细胞相对增殖率的影响为指标,通过筛选蛋白酶实验、单因素实验、响应面实验优化日本黄姑鱼皮活性肽的酶解制备工艺,并对酶解产物进行超滤分离,采用MTT细胞增殖实验筛选活性最高的分子量区间肽命名为日本黄姑鱼皮活性肽(Nibea japonica skin active peptides,NJSAP);通过MTT细胞增殖实验、观察细胞形态变化、中性红吞噬实验、一氧化氮(NO)分泌量的测定、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-12(IL-12)分泌量的测定来考察NJSAP在体外作用于RAW 264.7细胞的免疫活性;通过腹腔注射建立环磷酰胺诱导小鼠免疫抑制模型,模型建立成功后,灌胃100、200、400 mg/kg的NJSAP连续25天,通过记录小鼠体重变化、计算脏器指数变化、ConA诱导脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应实验、测定半数溶血值(HC _(50))、测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力、测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)含量、测定血清中总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力、过氧化氢酶(CAT)活力以及HE染色小鼠脾脏来考察NJSAP在体内免疫活性。结果显示:酶解日本黄姑鱼皮最适蛋白酶为中性蛋白酶,最佳酶解条件是pH为7,温度45.5℃,时间5.5 h,加酶量1500 U/g,液料比10:1(mL/g),在此酶解工艺下所得酶解产物作用于RAW 264.7的相对增殖率为57.47%,并且经超滤分离得到3kDa的组分活性最高;12.5~500μg/mL浓度范围内的NJSAP能使RAW 264.7细胞的相对增殖率增高,NJSAP还能使RAW 264.7细胞伸出伪足出现分化,并且促进RAW264.7细胞吞噬能力以及分泌NO、TNF-α、IL-6、IL-12的能力;不同剂量的NJSAP能使免疫低下的小鼠体重、脏器指数明显上升;小鼠足跖厚度差值及脾淋巴细胞显著增强,说明NJSAP可促进小鼠细胞免疫;半数溶血值显著性增加,说明NJSAP可促进小鼠体液免疫;腹腔巨噬细胞吞噬能力明显增加,说明NJSAP能促进小鼠的特异性免疫;血清中TNF-α、IgG、IgA、IgM含量、T-AOC、含量及SOD、CAT活力明显增加,血清中MDA含量降低,HE染色显示小鼠脾脏有所恢复。综上所述,NJSAP具有一定的免疫活性,并能提高小鼠的免疫力,这为进一步研究NJSAP提供了理论基础。
【图文】：

图1-1日本黄姑鱼Fig.1-1Nibeajaponica

技术路线
【学位授予单位】：浙江海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS254.9

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本文编号：2655162