甲醇盐析萃取测定动物源性产品中的兽药残留

发布时间：2020-05-26 20:16

【摘要】：随着生活水平的提高,人民群众对食品安全问题也越来越重视。目前,存在样品前处理技术水平明显落后于仪器发展水平的现象,平衡样品前处理技术的发展是分析检测的关键。论文总结了目前常用的样品前处理技术和检测手段,并结合荧光猝灭技术和平衡透析法研究了蛋白质与不同药物分子的结合情况。在此基础上,本文采用甲醇盐析萃取法对动物源性食品中4种四环素(TCs)、6种磺胺类化合物(SAs)、及牛肉样品中甲砜霉素(FF)和氟苯尼考(TAP)进行了快速提取检测,以有机溶剂的水溶液作为提取剂结合高效液相色谱技术,建立了水产品中硝基苯类药物分子的快速检测。论文分为五个部分:第一部分:对当下食品安全问题进行了简单综述,总结了复杂基质样品的前处理方法,并阐明了本文的选题意义和研究内容。第二部分:建立了甲醇盐析萃取体系,就牛肉中4种四环素类检测问题进行了讨论。实验研究了甲醇盐析萃取体系的形成条件及其稳定性。利用瑞利散射法研究了蛋白质分子在提取液中的真实存在状态,证实了高浓度甲醇提取液对蛋白质分子结构的破坏作用。蛋白质分子与四环素之间存在较强疏水作用力,70%(V/V)的甲醇提取液可以充分破坏这种作用力,释放出药物分子。由于甲醇极性较大,萃取液中脂溶性蛋白等杂质较少,加入少量PSA(N-丙基乙二胺修饰的硅胶颗粒)与C18(碳十八修饰的硅胶颗粒)固体吸附剂,离心(5000 r/min)即可达到良好净化效果。该方法操作简单,绿色高效,回收率为76.8%~98.2%,检出限为0.039~0.084μg/g。第三部分:采用1%甲酸酸化的甲醇盐析萃取体系对牛肉中喹诺酮类(Quinolones,QNs)残留提取,结合高效液相色谱法考察了不同净化剂、萃取温度和甲醇浓度对萃取体系的影响。由于甲醇极性较大,使得脂溶性杂质不容易进入到萃取液中,少量的PSA和C18即可完成对样品中喹诺酮类药物的提取,从而简化了净化步骤。提取液选择1%甲酸酸化处理,溶液质子化程度高,使喹诺酮药物更容易进入。该方法可应用于牛肉样品中五种喹诺酮(诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、加替沙星和盐酸洛美沙星)检测,回收率均在79.1%~103.8%之间,检出限为36.8~86.5 ng/g。第四部分:应用分子荧光光谱法研究了氟苯尼考和甲砜霉素与牛血清白蛋白的结合能力,并运用平衡透析技术考察了它们与实际牛肉样品的结合效率,证实了蛋白质与氟苯尼考和甲砜霉素之间存在紧密联系。采用70%(V/V)的甲醇提取液可以促使蛋白质分子理化性质发生改变,破坏分子氢键作用力,释放出目标分子。提取液中脂溶性杂质较少,加入少量C18和NH2(氨基修饰的硅胶颗粒)作为净化剂,净化效果明显。该方法回收效率为79.8%~101.9%,日内相对标准偏差为0.9%~2.7%,日间精密度为1.5%~3.7%,符合检测要求。第五部分:采用乙腈水溶液一步提取鱼肉样品中五种硝基苯类物质,结合高效液相色谱技术快速检测。优化提取条件,探讨了提取剂种类、有机试剂体积分数和净化剂选择对硝基苯类化合物提取率的影响。最终,选择使用80%(V/V)的乙腈水溶液作为提取剂,加入少量C18、PSA净化吸附剂对鱼肉样品中硝基苯进行快速提取。该方法提取条件温和,试剂消耗较少,环境友好。结果显示,该方法准确度和精密度良好,检出限(LOD)在18.3~46.4 ng/g之间,能满足日常检测要求。
【图文】：

兽药残留,分析方法,仪器分析法

社会不断进步带来的飞速科技发展使得现在的农兽药残留检测技术日趋完善，检测的准确度和精密度越来越高，定量和定性更加方便快速。其检测的手段大致分为仪器分析法和生化分析两大部分，按功能和原理的不同可以进行二级分类如图1-1所示[6]。图1-1农兽药残留分析方法概述图Fig.1-1 Thefigofagriculturalandveterinarydrugsdetectionmethodssummmarized

结构示意图,超声波

烟台大学硕士学位论文5图1-2 SPE结构示意图Fig.1-2 ThestructuralsketchofSPE(3)超声波辅助提取（SAE）超声波辅助提取[37,38]主要用于强化其他萃取手段。在动物源性样品中兽药残留萃取过程中，，使用LLE、SPME等经典萃取方法时，引入超声波，可以破坏细胞壁结构，增加细胞通透性，使药物分子更容易透过细胞膜进入提取液。除此之外，超声波的能量可以加快萃取液的浸入速度，并能增加农兽药残留组分与实际样品的离解速度，从而提高提取效率。汪建红等人[39]利用超声波辅助提取技术提取荸荠皮中的多糖组分，采用大量正交实验，优化了超声波的功率、温度和处理时间。该处理方法是一种辅助手段，让样品前处理过程更加快捷，提取效率明显提升。(4)QuEChERS前处理技术QuEChERS法[40,41]是由“quick”、“easy”、“cheap”、“effective”、“rugged”和“safe”六个英文缩写构成，是一种新型的样品前处理手段。该技术主要应用于蔬菜水果等植物样品中的农药残留提取检测
【学位授予单位】：烟台大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：O657.72;TS207.5

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