基于酶联纳米金复合探针的莱克多巴胺快速检测方法研究

发布时间：2020-06-23 10:16

【摘要】：食品中毒事件这些年来越来越频繁的发生在我们身边,目前,保证食品的质量与安全越来越迫切,它已经成为世界各媒体和公众重点关注的问题。在20世纪80年代末,各个地方不断发生了引起世界人民慌恐的“瘦肉精”事件,其事件的直接原因是动物食品中残留有“瘦肉精”,人们食用后出现了急性中毒症状,因此对我们平时生活中的各种肉类产品,迫切需要进行“瘦肉精”快速检测。该论文建立了一种新型的纳米金复合探针,该探针通过生物素链霉亲和素作用将辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)修饰在复合探针表面,形成酶标纳米金复合探针,并且将该探针在免疫技术方面进一步发展与延伸,使其可以更好地应用于检测第二代瘦肉精莱克多巴胺。该方法是把抗体用生物素进行标记后,组合在纳米金表面,链霉亲和素 生物素可以特异识别HRP,因此HRP能够与纳米金相结合,从而合成酶联纳米金复合探针。使用这种方法,单个纳米金复合探针携带约15个HRP分子。再和磁珠技术应用在一起,可以把这种纳米金复合探针用在莱克多巴胺的检测。莱克多巴胺作为目标物,该方法通过抗原抗体的识别作用,将磁性探针,莱克多巴胺,酶标纳米金复合探针三者竞争作用,形成磁性复合物,辣根过氧化酶对底物进行催化反应,使其发生颜色变化从而发出光学信号。与传统酶联免疫方法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)进行比较后,我们发现这种新型复合探针的免疫方法灵敏度提高了10倍,而且检测限达1.42 ng·L~(-1),它不仅具有灵敏度高的特点,而且特异性好。利用酶标纳米金探针法和ELISA法对牛肉,猪肉和羊肉样品进行莱克多巴胺的添加回收实验,添加水平为1ng·g~(-1),5 ng·g~(-1)和10 ng·g~(-1),我们得到添加回收率介于78.5%～93.4%,RSD的范围是11.6%～19.3%之间,这一结果说明了该方法具有比较好的精密度和较高的准确度。和传统的ELISA检测方法进行相关性对比后,能够发现酶标纳米金探针法和传统ELISA的线性关系比较好。证实了基于酶标纳米金复合探针的免疫分析方法的可靠性。
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：O657.3;TS207.3

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本文编号：2727177