环柄菇属蘑菇中肽类毒素的检测与鉴定

发布时间：2020-07-31 17:42

【摘要】：近年来,在我国因误食毒蘑菇导致中毒的案例频频发生,常年不减,导致中毒死亡的主要原因是由含鹅膏肽类毒素的鹅膏菌属Amanita的种类所引起的。含鹅膏肽类毒素的毒蘑菇除主要为鹅膏菌属外,环柄菇属Lepiota、盔孢伞属Galerina的部分种类也含有。近几年,误食环柄菇属中毒事件不断增加,国际上关于环柄菇属毒蘑菇的肽类毒素研究较少,而在国内关于环柄菇属的研究主要着重于物种的资源调查和分类,对于环柄菇属蘑菇的环肽类毒素的研究从未报道过。近2年我们对环柄菇属蘑菇引起的3例急性肝损害性中毒病例进行了调查,证实其中2例是由肉褐鳞环柄菇Lepiota brunneoincarnata引起的,1例是由毒环柄菇L.venenata引起的。本文对肉褐鳞环柄菇Lepiota brunneoincarnata与毒环柄菇L.venenata的形态和分子物种鉴定、环肽毒素的检测与鉴定2个方面进行研究,现研究结果如下:1、形态和分子物种鉴定:肉褐鳞环柄菇Lepiota brunneoincarnata和毒环柄菇L.venenata宏观形态上存在一定差异,肉褐鳞环柄菇菌盖上的鳞片颜色呈现灰褐色至深棕色,鳞片多聚集在菌盖中间凸起部位,菌柄顶端呈半浅棕色至粉红棕色,且光滑,菌柄下端具有鳞片,菌环易脱落。而毒环柄菇菌盖上的鳞片呈现褐色至棕褐色,鳞片较小,顶端细胞呈针披状至近椭圆形,菌柄下端带有棕色至红棕色的鳞片,有菌环残余。肉褐鳞环柄菇的担孢子要比毒环柄菇的担孢子大,肉褐鳞环柄菇的担孢子形状呈椭圆形到卵圆形,略带杏仁状。毒环柄菇的担孢子呈椭圆形或圆柱形。2、基于ITS序列的分子鉴定:基于ITS序列的系统发育树分析表明肉褐鳞环柄菇与毒环柄菇不在同一分支上,毒环柄菇是一个新种。3、肉褐鳞环柄菇和毒环柄菇中的环肽类毒素检测:通过超高压液相色谱-质谱联用技术检测分析两种环柄菇中的化学成分,表明肉褐鳞环柄菇中鉴定出了β-鹅膏毒肽(β-amanitin、β-AMA)、α-鹅膏毒肽(α-amanitin、α-AMA),三羟鹅膏毒肽(Amanin)、三羟鹅膏毒肽酰胺(Amaninamide),毒环柄菇中鉴定出了α-鹅膏毒肽、Amanin II和一个未知化合物,并未检测等到β-鹅膏毒肽。肉褐鳞环柄菇和毒环柄菇中均未检测出鬼笔毒肽和毒伞素。4、肉褐鳞环柄菇和毒环柄菇中两种主要鹅膏毒肽的定量分析:通过建立两种标样毒素(α-AMA、β-AMA)HPLC峰面积和进样量质量的线性回归方程,根据样品中峰面积计算出肉褐鳞环柄菇和毒环柄菇中的α-鹅膏毒肽(α-AMA)和β-鹅膏毒肽(β-AMA)的含量,结果表明肉褐鳞环柄菇中总毒素的含量在1.300-2.661 mg/g干重,其中α-AMA浓度为0.732-1.728 mg/g干重,β-AMA浓度为0.568-0.933mg/g干重。在毒环柄菇中只检测到α-AMA,且含量是1.969 mg/g干重。
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：TS207.5
【图文】：

验材料中毒地点收集 4 个环柄菇样品（肉褐鳞环柄菇 MHHNU 31026 MHHNU 31026 和毒环柄菇 MHHNU 31031）。样本保存在湖南本馆（MHHNU）。表 1 和图 1 给出了样品采集信息。表 2-1 本研究中分析的样品列表物种编号 地理来源 ncarnata MHHNU 31026 Guangrao, Shandong ncarnata MHHNU 31030 Dalian, Liaoning ncarnata MHHNU 31032 Chendu, Sichuan MHHNU 31031 Jingzhou, Hubei

担子呈棍棒状，4 个孢子，很少 2 个孢子，由基部往上渐宽，无色。担孢子6-8μm×4-5μm，椭圆形到卵圆形，略带杏仁状，表面光滑，无色。肉褐鳞环柄菇常生长在树下，路边等地。多生于夏季。毒环柄菇（L. venenata MHHNU 31031）：菌盖中间部分凸起，四周扁平，凸起部分范围较宽，菌盖表面干燥时，呈现白色到奶白色，菌盖中间凸起部分，密被褐色至棕褐色反卷的细小鳞片。菌盖边缘发白具小齿。菌褶附着在菌盖下面，呈层状，白色或奶油色，离生，密，不等长。菌柄呈圆柱状，颜色呈现脏白色，菌柄下端覆盖棕色至红棕色鳞片，具有不完整的菌环，菌柄呈现空管。味道和气味未知。担子形状呈棍棒状，棍棒状，4 个孢子，很少 2 个孢子，透明。担孢子6-7μm×3-4μm，呈椭圆形或圆柱形，无色，透明，稍厚壁，光滑。毒环柄菇栖息地和分布：生长在阔叶树林的土壤上，一般生长在夏季和秋季。

图 3-1 基于 ITS 序列的最大似然分析产生的系统发育树。在分支上报告最0％并且贝叶斯后验概率超过 0.90。本论文中的序列以粗体表示。从 图 中 可 以 看 出 ， L. venenata MHHNU 31031 （ MK09518nneoincarnata MHHNU 31026（MK095187）、MHHNU 31030（MKHNU 31032（MK095190）的支持率为 95%，足以证明 L. venena31（MK095189）是独立于这三个样品的，由此可以看出是个新enata MHHNU 31031（MK095189）与 L. sp. MFLU 09-0152（JN2率同样为 95%，这两个样品也不属于同一种。L. brunneoincarna26（MK095187）、MHHNU 31030（MK095188）、MHHNU 31032（MBrunneoincarnata xsd 08106（FJ481017、）L. brunneoincarnata HMU416302）、L. brunneoincarnata MCVE 1402（FJ998395）这六个样 100%，足以证明这六个样品是同一物种，都是属于肉褐鳞环柄菇

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本文编号：2776792