鳗鱼中氯霉素荧光免疫层析检测方法研究

发布时间：2020-08-08 03:05

【摘要】：作为水产品养殖加工及消费大国,我国水产品安全急需重视,禁止或限制用于水产品中的渔药均对人体危害较大。氯霉素(CAP)作为禁用渔药,对人体造血系统具有一定程度危害。需建立一种灵敏、准确且快速的检测方法对水产品安全具有重要应用价值,铕掺杂聚苯乙烯荧光微球荧光性能优异,毒性较低,具有较热的研究趋势。本文以乳液聚合法制备羧基化聚苯乙烯微球(PS),采用低温溶胀方式将铕荧光素掺杂入羧基化聚苯乙烯微球,通过对红外光谱、扫描电子显微镜、透射电镜、不同条件下的荧光性能、水溶液悬浮分散性及表面羧基含量表征。结果表明,所制备铕掺杂羧基化聚苯乙烯荧光微球(EuPS)直径约为100 nm,呈均匀球形,表面成功带有羧基,羧基含量为37.5 nmol/mg,在pH=4.0-9.0,低盐离子浓度条件下,荧光特性及悬浮分散性较好。以制备的羧基化聚苯乙烯荧光微球为载体,通过与氯霉素抗体的氨基催化偶联形成偶联物,使用粒径测定、荧光分析等对偶联结果表征,证明了抗体偶联成功。制备氯霉素荧光免疫层析试纸条,实验得到抗体偶联的最佳条件为偶联时间为3 h,最佳偶联比例为1.0mg微球:50μg抗体;CN 140及Millipore 135荧光较为明显,选取CN 140为本实验所用NC膜,CF-50硝酸纤维素膜为本实验所用样本垫;当C/T线浓度达到1.0 mg/mL,微球抗体偶联物添加量为6.0μL,PBST+Tris-HCl为释放液,37℃孵育20 min时,试纸条C/T线呈现较好的荧光特性。以最优呈色条件,测定氯霉素的灵敏度、特异性,加样后15 min测定结果,得到氯霉素的检出限为100 ng/mL,与洛美沙星、诺氟沙星、氟罗沙星、加替沙星、左氧氟沙星无交叉反应。通过对鳗鱼样品实际检测,结果中实际样品的检出限为600 ng/g,9周的存放时间内,检出限无较大影响,满足快速检测的需求。
【学位授予单位】：渤海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：O658.1;TS254.7

【参考文献】