太平洋牡蛎酶解产物分离及对小鼠睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌的影响

发布时间：2021-02-26 11:55

　　牡蛎肉味道鲜美,营养价值极高,素有“根之源”、“海中牛奶”的美称,据典籍记载牡蛎肉具有增强男性性功能的潜在药用价值。牡蛎多肽也具备良好的生物活性,对应用于改善性功能食品的开发有着巨大的潜能。随着社会人口老龄化趋势加剧、生活压力增大、环境污染加剧、民众运动意识薄弱等问题的出现,睾酮缺乏性疾病的发病率逐年增高。睾酮作为最主要的雄激素,对维持肌肉质量和强度、性欲及勃起次数等起着关键作用,睾酮缺乏会对男性各器官系统的发育造成严重的影响。本文运用酶解法制备太平洋牡蛎活性肽,对其进行分离纯化,并评价了其促进小鼠体外睾酮分泌活性。主要研究结果如下:（1）采用16s rRNA基因检测方法对原料牡蛎进行物种鉴定,利用BLAST（Basic Local Alignment Search Tool）方法,将最后得到的基因序列在NCBI数据库中进行比对,和太平洋牡蛎16s rRNA基因序列的吻合度达到100%,通过实验证实所采用的原料为太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）。（2）通过单因素实验,以多肽得率为指标,考察不同加酶量、pH值、酶解温度、酶解时间对多肽得率的影响,根据单因素实验结果进行正交... 

【文章来源】：广东海洋大学广东省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 太平洋牡蛎的研究概述
    1.2 牡蛎肉及其酶解产物的生物活性研究
    1.3 改善男性性功能活性研究
    1.4 生物活性肽的制备方法研究
        1.4.1 酶解法
        1.4.2 微生物发酵法
        1.4.3 化学合成法
    1.5 生物活性肽的分离纯化方法研究
        1.5.1 膜分离技术
        1.5.2 凝胶色谱法
        1.5.3 离子交换色谱
        1.5.4 反相高效液相色谱
    1.6 本课题研究的目的意义和主要内容
        1.6.1 本课题研究的立项背景和意义
        1.6.2 本文研究的主要内容
2 太平洋牡蛎的物种鉴定和酶解工艺优化
    2.1 引言
    2.2 实验材料与设备
        2.2.1 原料与试剂
        2.2.2 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 应用16s rRNA技术对太平洋牡蛎进行物种鉴定
        2.3.2 木瓜蛋白酶酶解牡蛎单因素条件选择
        2.3.3 正交实验因素水平
        2.3.4 多肽含量的测定
        2.3.5 统计分析
    2.4 实验结果与讨论
        2.4.1 基于16s rRNA技术对太平洋牡蛎进行物种鉴定结果
        2.4.2 木瓜蛋白酶酶解牡蛎单因素条件对酶解效果的影响
        2.4.3 正交试验结果与分析
    2.5 本章小结
3 牡蛎酶解产物的初步分离及对小鼠睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌的影响..
    3.1 引言
    3.2 实验材料与设备
        3.2.1 原料与试剂
        3.2.2 仪器与设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 牡蛎酶解产物的制备流程
        3.3.2 超滤分级
        3.3.3 蛋白质回收率测定
        3.3.4 牡蛎酶解产物及其超滤组分分子量分布测定
        3.3.5 MTT法对TM3 细胞体外增殖活性评价
        3.3.6 酶联免疫吸附实验（ELISA）检测睾酮含量
        3.3.7 统计分析
    3.4 实验结果与讨论
        3.4.1 膜超滤后的分离组分蛋白质回收率比较
        3.4.2 牡蛎酶解产物及其超滤组分分子量分布
        3.4.3 牡蛎酶解产物及其超滤组分对TM3 细胞增殖的影响
        3.4.4 牡蛎酶解产物及其超滤组分对TM3 细胞睾酮分泌的影响
    3.5 本章小结
4 OP-I 组分的进一步分离及对小鼠睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌的影响
    4.1 引言
    4.2 实验材料与设备
        4.2.1 原料与试剂
        4.2.2 仪器与设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 OP-I 组分的制备
        4.3.2 Sephadex G-25 凝胶层析分离纯化
        4.3.3 Sephadex G-15 凝胶层析分离纯化
        4.3.4 凝胶层析分离纯化组分分子量分布测定
        4.3.5 MTT法对TM3 细胞体外增殖活性评价
        4.3.6 酶联免疫吸附实验（ELISA）检测睾酮含量
        4.3.7 统计分析
    4.4 实验结果与讨论
        4.4.1 Sephadex G-25 凝胶层析分离纯化
        4.4.2 Sephadex G-25 凝胶层析分离组分的分子量分布
        4.4.3 Sephadex G-25 分离组分促进小鼠体外睾酮分泌活性评价
        4.4.4 Sephadex G-15 凝胶层析分离纯化
        4.4.5 Sephadex G-15 分离组分促进小鼠体外睾酮分泌活性评价
    4.5 本章小结
5 结论与展望
    5.1 研究结论
    5.2 研究展望
参考文献
致谢
作者简介
导师简介


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3052552