副溶血性弧菌拮抗菌的筛选鉴定、抗菌肽的分离纯化及生物信息学分析
发布时间：2021-03-02 21:21
副溶血性弧菌既是水产养殖动物细菌性疾病的主要致病菌,又是引起细菌性食物中毒的首要食源性致病菌。因此,有效的防控副溶血性弧菌是亟须解决的问题。水产养殖业中副溶血性弧菌病的防治主要是利用抗生素,但抗生素的滥用不仅产生耐药菌株,破坏水产养殖环境生态平衡,而且抗生素类的药物在水产品中的残留也给人类健康带来威胁。因而寻求抗生素的理想替代品迫在眉睫。利用益生菌所产抗菌肽来控制副溶血性弧菌病害的发生,投放益生菌所产抗菌肽既可以维持水产动物肠道菌群平衡,提高水产养殖动物免疫力,又可改善养殖水体环境。因此,抗菌肽将对对促进水产品的食用安全和水产养殖业的发展具有重要意义,是抗生素的理想替代品。目前,无论是实验室阶段还是产业阶段,关于抗菌肽在防治副溶血性弧菌病方面的报道还比较少,抑菌活性还不够强,并且利用第三代高通量测序技术进行益生菌菌株的生物信息学分析的尚不多见。鉴此,本研究将从水生环境中探寻对副溶血性弧菌有抑制作用的益生菌,并再应用于水生环境,以减少因益生菌生长环境改变而造成的抑菌活性的减退或消失问题。从东海海水中筛选出一株抑菌活性强、广谱抑菌活性的枯草芽孢杆菌,并对其进行鉴定及确定其分类地位;探究了其...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
菌株H19在营养琼脂平板上的菌落形态和营养肉汤液体培养基
L2000；1：菌株 H19R 扩增产物的琼脂糖electrophoresis of PC基因序列构建的枯草Bacillus subtilis H19 csequenceH19 (MG383451)is subsp. KCTC 13429( Aus haynesii NRRL B-4132us licheniformis ATCC 14Bacillus pumBacillus austBacillus aqu100
透析袋处理的蛋白粗提液中使各酶的终质量浓度为 2 mg/mL，调节 pH 值至各酶最适作用 pH 值，以不加酶的 3.5 kDa 透析袋处理所得蛋白粗提液作为空白对照37 ℃温浴保存 2 h，再调节各酶解液 pH 值至 7.0。以副溶血性弧菌(Vibriparahaemolyticus，ATCC17802)为指示菌，采用打孔扩散法测定各酶解液抑菌活性试验重复 3 次。3.4 结果与分析3.4.1 菌株 H19 产抑菌物质的产量与枯草芽孢杆菌生长的关系由图 3-1 可知，抑菌活性在 24 h 之前保持增加趋势，在 24 60 h 保持平衡为640AU/mL，之后一直下降。每一百毫升菌体干在 0-24 h 干重量急剧增加，在 24-6h 缓慢增长至平衡，干重量为 0.29 g/100 mL，在整个发酵过程中，pH 基本呈上升趋势，说明发挥抑菌作用的不是酸而是其他非酸类物质。因此在 0-24 h 为 H19 生长对数期，在 24-60 h 为生长稳定期，在 60 h 之后为衰退期。Antimicrobial activityOD600
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草芽孢杆菌M364高产抗菌肽Bacillomycin D工业培养基优化[J]. 李伟,孙静,林福兴,刘今,吕凤霞,别小妹,陆兆新. 食品工业科技. 2018(22)
[2]枯草芽孢杆菌产脂肽的发酵条件优化[J]. 张楠楠,徐丹,尹婷,徐学明. 安徽农业科学. 2017(15)
[3]一株凝结芽孢杆菌的分离鉴定及益生性研究[J]. 汪攀,易敢峰,孙自博,王蕊,陈丽仙,夏冬梅. 中国畜牧兽医. 2017(04)
[4]传统发酵牦牛酸乳中细菌素产生菌的筛选与鉴定[J]. 张梅梅,索化夷,赵欣,骞宇,李键,丁阳平,张玉. 食品与机械. 2017(03)
[5]海洋抑菌放线菌Y15的筛选、鉴定及其代谢产物理化性质[J]. 张孟,王艳婷,汪立平,邬若鸣,常帅帅. 微生物学通报. 2017(03)
[6]东方伊萨酵母高密度培养的研究[J]. 郑苗,邓泽元,任志青,李红艳. 中国食品学报. 2016(04)
[7]用Box-Behnken设计优化纳豆菌NT-6菌株固态发酵生产抗菌脂肽条件（英文）[J]. 孙东方,汪文静,邓旗,王雅玲,孙力军. Agricultural Science & Technology. 2016(04)
[8]蒙古干酪中产细菌素戊糖片球菌的筛选及其细菌素理化特性研究[J]. 王艳婷,汪立平,唐潮,孙晓红. 食品与发酵工业. 2015(10)
[9]NT-6抗菌脂肽对凡纳滨对虾生长性能及养殖源头弧菌数的影响[J]. 石广举,孙力军,王雅玲,刘唤明,徐德峰,聂芳红,刘颖,叶日英. 广东农业科学. 2014(12)
[10]弧菌颉颃菌的筛选及其在对虾养殖中的初步应用[J]. 王娇,曲朋,孙飞,田相利,梁晶晶,蔡玉勇. 中国畜牧兽医. 2014(06)
博士论文
[1]解淀粉芽孢杆菌抗菌脂肽bacillomycin L的纯化鉴定及抑菌机理研究[D]. 张宝.中国农业大学 2014
硕士论文
[1]对虾中副溶血性弧菌产毒株的分离识别及抗菌肽的控制效应[D]. 胡连花.广东海洋大学 2012
[2]产海洋生物活性物质的微生物筛选及鉴定[D]. 阮乾坤.大连工业大学 2012
[3]枯草芽孢杆菌R21-4抗菌蛋白的分离提取与应用[D]. 贾洁.中国农业大学 2005
本文编号：3059972
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：96 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
菌株H19在营养琼脂平板上的菌落形态和营养肉汤液体培养基
L2000；1：菌株 H19R 扩增产物的琼脂糖electrophoresis of PC基因序列构建的枯草Bacillus subtilis H19 csequenceH19 (MG383451)is subsp. KCTC 13429( Aus haynesii NRRL B-4132us licheniformis ATCC 14Bacillus pumBacillus austBacillus aqu100
透析袋处理的蛋白粗提液中使各酶的终质量浓度为 2 mg/mL，调节 pH 值至各酶最适作用 pH 值，以不加酶的 3.5 kDa 透析袋处理所得蛋白粗提液作为空白对照37 ℃温浴保存 2 h，再调节各酶解液 pH 值至 7.0。以副溶血性弧菌(Vibriparahaemolyticus，ATCC17802)为指示菌，采用打孔扩散法测定各酶解液抑菌活性试验重复 3 次。3.4 结果与分析3.4.1 菌株 H19 产抑菌物质的产量与枯草芽孢杆菌生长的关系由图 3-1 可知，抑菌活性在 24 h 之前保持增加趋势，在 24 60 h 保持平衡为640AU/mL，之后一直下降。每一百毫升菌体干在 0-24 h 干重量急剧增加，在 24-6h 缓慢增长至平衡，干重量为 0.29 g/100 mL，在整个发酵过程中，pH 基本呈上升趋势，说明发挥抑菌作用的不是酸而是其他非酸类物质。因此在 0-24 h 为 H19 生长对数期，在 24-60 h 为生长稳定期，在 60 h 之后为衰退期。Antimicrobial activityOD600
【参考文献】：
期刊论文
[1]枯草芽孢杆菌M364高产抗菌肽Bacillomycin D工业培养基优化[J]. 李伟,孙静,林福兴,刘今,吕凤霞,别小妹,陆兆新. 食品工业科技. 2018(22)
[2]枯草芽孢杆菌产脂肽的发酵条件优化[J]. 张楠楠,徐丹,尹婷,徐学明. 安徽农业科学. 2017(15)
[3]一株凝结芽孢杆菌的分离鉴定及益生性研究[J]. 汪攀,易敢峰,孙自博,王蕊,陈丽仙,夏冬梅. 中国畜牧兽医. 2017(04)
[4]传统发酵牦牛酸乳中细菌素产生菌的筛选与鉴定[J]. 张梅梅,索化夷,赵欣,骞宇,李键,丁阳平,张玉. 食品与机械. 2017(03)
[5]海洋抑菌放线菌Y15的筛选、鉴定及其代谢产物理化性质[J]. 张孟,王艳婷,汪立平,邬若鸣,常帅帅. 微生物学通报. 2017(03)
[6]东方伊萨酵母高密度培养的研究[J]. 郑苗,邓泽元,任志青,李红艳. 中国食品学报. 2016(04)
[7]用Box-Behnken设计优化纳豆菌NT-6菌株固态发酵生产抗菌脂肽条件（英文）[J]. 孙东方,汪文静,邓旗,王雅玲,孙力军. Agricultural Science & Technology. 2016(04)
[8]蒙古干酪中产细菌素戊糖片球菌的筛选及其细菌素理化特性研究[J]. 王艳婷,汪立平,唐潮,孙晓红. 食品与发酵工业. 2015(10)
[9]NT-6抗菌脂肽对凡纳滨对虾生长性能及养殖源头弧菌数的影响[J]. 石广举,孙力军,王雅玲,刘唤明,徐德峰,聂芳红,刘颖,叶日英. 广东农业科学. 2014(12)
[10]弧菌颉颃菌的筛选及其在对虾养殖中的初步应用[J]. 王娇,曲朋,孙飞,田相利,梁晶晶,蔡玉勇. 中国畜牧兽医. 2014(06)
博士论文
[1]解淀粉芽孢杆菌抗菌脂肽bacillomycin L的纯化鉴定及抑菌机理研究[D]. 张宝.中国农业大学 2014
硕士论文
[1]对虾中副溶血性弧菌产毒株的分离识别及抗菌肽的控制效应[D]. 胡连花.广东海洋大学 2012
[2]产海洋生物活性物质的微生物筛选及鉴定[D]. 阮乾坤.大连工业大学 2012
[3]枯草芽孢杆菌R21-4抗菌蛋白的分离提取与应用[D]. 贾洁.中国农业大学 2005
本文编号：3059972
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