松花粉壁对脂肪肝和血脂异常小鼠肠道菌群及生物标志物的影响
发布时间：2021-03-27 22:02
本实验室近年来对于云南松（Pinus yunnanensis）花粉生理功能的研究主要集中于松花粉的多糖和营养成分丰富的内容物,并发现其对多种疾病和癌症的发生具有预防和抑制作用。而松花粉壁在花粉中占比近40%,主要成分为纤维素和孢粉素。目前已有大量对于膳食纤维通过肠道菌群改善机体代谢的研究,但对于松花粉壁改善机体代谢的探究还尚未见报道。本实验利用提纯的松花粉壁喂养小鼠,探究它对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝和血脂异常的有益作用。一、通过对于提取试剂和条件的优化,最终利用α-淀粉酶、β-淀粉酶和蛋白酶处理,并用乙醇、水分别洗涤三次,获得了不含蛋白质、糖类、脂肪等营养成分的纯度较高的松花粉壁,得率约为43.75%,主要成分为纤维素和孢粉素,其中纤维素约占41.80%,用于后续的实验。二、利用C57BL/6雄性小鼠建立高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝和血脂异常模型（MC）,同时设置对照组（HC）、含2.5%松花粉壁的实验组（PW）和含2.5%大豆膳食纤维的阳性对照组（FC）,喂养小鼠42天后取其肝脏、血清、肾周和附睾脂肪,测定其体脂比、肝指数、血脂水平、炎性细胞因子TNF-α和IL-6,观察肝脏病理...
【文章来源】：山东师范大学山东省
【文章页数】：103 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Pinusrigida孢粉素的化学结构单元[5]
山东师范大学硕士学位论文23图2-1松花粉壁处理前后的电镜图（左侧为破壁松花粉，右侧为提取获得的松花粉壁）Figure2-1SEMmicrographofpinepollenwallbeforeandaftertreatment(TheleftisthePinePollenDisruptionPowder,andtherightisthepinepollenwallobtainedfromextraction)2.4.2松花粉壁的得率为了获得更为干净的松花粉壁，我们对松花粉壁的提取过程进行了不断的优化，并将松花粉壁的得率作为其纯度的判断依据之一。在用常温蒸馏水、乙醇分别洗涤三次后，计算其得率为53.5%；将蒸馏水加热后用于洗涤，使松花粉壁的得率降低至52.6%；在洗涤之前依次加入α-淀粉酶、β-淀粉酶和蛋白酶处理，再用热蒸馏水和乙醇洗涤，使松花粉壁的得率降至了43.75%。这也说明简单的洗涤并不能完全除去松花粉内和嵌在花粉壁中的内容物，而经过淀粉酶和蛋白酶的降解可将更多残留的内容物洗出。2.4.3松花粉壁的营养成分为了了解松花粉壁在提取方法的优化过程中，其中营养成分的变化，并验证最终的提取方法是否将松花粉的内容物去除干净，我们对蛋白质、还原糖和脂肪的含量进行了测定。结果发现，经过水提内容物和简单的洗涤对蛋白质的含量基本没有影响，当经过蛋白酶的降解后，蛋白质的含量大幅降低。还原糖在水提内容物的过程中已被大部分除去，在经过洗涤和酶处理后，松花粉中的还原糖基本上已被去除干净。脂肪在经过乙醇洗涤后含量大幅度降低，基本也被去除干净。从表2-1中我们可以看出，经过洗涤和酶处理的松花
山东师范大学硕士学位论文283.3.6肝脏组织切片和形态学分析取小鼠新鲜肝脏后立即放入固定液中固定，经包埋、制片、HE染色后，在光学显微镜下观察，并拍摄对应主要描述中不同种类的病变部位。取小鼠新鲜肝脏，修剪成小块，经包埋、冰冻后用冰冻切片机切片，粘附与载玻片上，-20℃冷冻保存。对切片进行油红O染色，取出切片干燥，于油红O染液中浸染脂肪，苏木素复染细胞核，封片，在光学显微镜下观察并拍摄。3.3.7数据处理数据表示为平均值±标准差（SD）。通过t检验和单向方差分析（ANOVA）进行了组间差异分析。P值<0.05的差异被认为具有统计学意义。3.4实验结果3.4.1松花粉壁对小鼠体重体脂和肝指数的影响每两天对小鼠进行一次称重，各组小鼠的平均体重变化如图3-1所示：图3-1小鼠体重变化图Figure3-1MousebodyweightchangediagramHC组的小鼠体重在前两周上升较快，在两周后趋于平稳，终体重为23.591g。MC组、PW组和FC组小鼠的体重在喂养开始的第二天出现了轻微的下降，并在之后的六周缓慢的上升，趋势接近，终体重如表3-1所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]高脂饲料中添加丙硫氧嘧啶对大鼠血脂、体质量及体脂的影响[J]. 郝维佳,杨秋实,李静宜,马毅,陆莉,熊杰,李宇航,徐平湘,陈怡,薛明,李晓蓉. 首都医科大学学报. 2018(03)
[2]纤维素酶降解纤维素机理的研究进展[J]. 于跃,张剑. 化学通报. 2016(02)
[3]牛磺酸研究进展[J]. 顾庆南,李吕木,许翔,张民扬. 饲料博览. 2015(05)
[4]大豆膳食纤维提取工艺研究进展[J]. 郭丽娟. 大豆科技. 2014(03)
[5]植物半纤维素结构研究进展[J]. 余紫苹,彭红,林妲,阮榕生,王娜,胡铮,刘玉环,张锦胜. 高分子通报. 2011(06)
[6]代谢组学及其分析技术[J]. 王斯婷,李晓娜,王皎,凌笑梅. 药物分析杂志. 2010(09)
[7]大豆可溶性膳食纤维降血糖功效的研究[J]. 涂宗财,李志,陈钢,林德荣,姜颖,朱秀梅. 食品科学. 2009(17)
[8]花粉中的膳食纤维[J]. 王开发,陆明. 蜜蜂杂志. 2008(10)
[9]Anti-inflammatory properties of the short-chain fatty acids acetate and propionate:A study with relevance to inflammatory bowel disease[J]. Sofia Tedelind,Fredrik Westberg,Martin Kjerrulf,Alexander Vidal. World Journal of Gastroenterology. 2007(20)
[10]饮食性肥胖大鼠血清TNF-α水平探讨[J]. 施万英,姚兴家,董丹娜,刘莉,白英龙,徐甲芬,欧凤荣. 中国公共卫生. 2002(05)
硕士论文
[1]基于代谢组学技术寻找蜂蜜标志性代谢物并探究其应用[D]. 江瑶.山东师范大学 2017
本文编号：3104308
【文章来源】：山东师范大学山东省
【文章页数】：103 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Pinusrigida孢粉素的化学结构单元[5]
山东师范大学硕士学位论文23图2-1松花粉壁处理前后的电镜图（左侧为破壁松花粉，右侧为提取获得的松花粉壁）Figure2-1SEMmicrographofpinepollenwallbeforeandaftertreatment(TheleftisthePinePollenDisruptionPowder,andtherightisthepinepollenwallobtainedfromextraction)2.4.2松花粉壁的得率为了获得更为干净的松花粉壁，我们对松花粉壁的提取过程进行了不断的优化，并将松花粉壁的得率作为其纯度的判断依据之一。在用常温蒸馏水、乙醇分别洗涤三次后，计算其得率为53.5%；将蒸馏水加热后用于洗涤，使松花粉壁的得率降低至52.6%；在洗涤之前依次加入α-淀粉酶、β-淀粉酶和蛋白酶处理，再用热蒸馏水和乙醇洗涤，使松花粉壁的得率降至了43.75%。这也说明简单的洗涤并不能完全除去松花粉内和嵌在花粉壁中的内容物，而经过淀粉酶和蛋白酶的降解可将更多残留的内容物洗出。2.4.3松花粉壁的营养成分为了了解松花粉壁在提取方法的优化过程中，其中营养成分的变化，并验证最终的提取方法是否将松花粉的内容物去除干净，我们对蛋白质、还原糖和脂肪的含量进行了测定。结果发现，经过水提内容物和简单的洗涤对蛋白质的含量基本没有影响，当经过蛋白酶的降解后，蛋白质的含量大幅降低。还原糖在水提内容物的过程中已被大部分除去，在经过洗涤和酶处理后，松花粉中的还原糖基本上已被去除干净。脂肪在经过乙醇洗涤后含量大幅度降低，基本也被去除干净。从表2-1中我们可以看出，经过洗涤和酶处理的松花
山东师范大学硕士学位论文283.3.6肝脏组织切片和形态学分析取小鼠新鲜肝脏后立即放入固定液中固定，经包埋、制片、HE染色后，在光学显微镜下观察，并拍摄对应主要描述中不同种类的病变部位。取小鼠新鲜肝脏，修剪成小块，经包埋、冰冻后用冰冻切片机切片，粘附与载玻片上，-20℃冷冻保存。对切片进行油红O染色，取出切片干燥，于油红O染液中浸染脂肪，苏木素复染细胞核，封片，在光学显微镜下观察并拍摄。3.3.7数据处理数据表示为平均值±标准差（SD）。通过t检验和单向方差分析（ANOVA）进行了组间差异分析。P值<0.05的差异被认为具有统计学意义。3.4实验结果3.4.1松花粉壁对小鼠体重体脂和肝指数的影响每两天对小鼠进行一次称重，各组小鼠的平均体重变化如图3-1所示：图3-1小鼠体重变化图Figure3-1MousebodyweightchangediagramHC组的小鼠体重在前两周上升较快，在两周后趋于平稳，终体重为23.591g。MC组、PW组和FC组小鼠的体重在喂养开始的第二天出现了轻微的下降，并在之后的六周缓慢的上升，趋势接近，终体重如表3-1所示。
【参考文献】：
期刊论文
[1]高脂饲料中添加丙硫氧嘧啶对大鼠血脂、体质量及体脂的影响[J]. 郝维佳,杨秋实,李静宜,马毅,陆莉,熊杰,李宇航,徐平湘,陈怡,薛明,李晓蓉. 首都医科大学学报. 2018(03)
[2]纤维素酶降解纤维素机理的研究进展[J]. 于跃,张剑. 化学通报. 2016(02)
[3]牛磺酸研究进展[J]. 顾庆南,李吕木,许翔,张民扬. 饲料博览. 2015(05)
[4]大豆膳食纤维提取工艺研究进展[J]. 郭丽娟. 大豆科技. 2014(03)
[5]植物半纤维素结构研究进展[J]. 余紫苹,彭红,林妲,阮榕生,王娜,胡铮,刘玉环,张锦胜. 高分子通报. 2011(06)
[6]代谢组学及其分析技术[J]. 王斯婷,李晓娜,王皎,凌笑梅. 药物分析杂志. 2010(09)
[7]大豆可溶性膳食纤维降血糖功效的研究[J]. 涂宗财,李志,陈钢,林德荣,姜颖,朱秀梅. 食品科学. 2009(17)
[8]花粉中的膳食纤维[J]. 王开发,陆明. 蜜蜂杂志. 2008(10)
[9]Anti-inflammatory properties of the short-chain fatty acids acetate and propionate:A study with relevance to inflammatory bowel disease[J]. Sofia Tedelind,Fredrik Westberg,Martin Kjerrulf,Alexander Vidal. World Journal of Gastroenterology. 2007(20)
[10]饮食性肥胖大鼠血清TNF-α水平探讨[J]. 施万英,姚兴家,董丹娜,刘莉,白英龙,徐甲芬,欧凤荣. 中国公共卫生. 2002(05)
硕士论文
[1]基于代谢组学技术寻找蜂蜜标志性代谢物并探究其应用[D]. 江瑶.山东师范大学 2017
本文编号：3104308
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/qgylw/3104308.html
