基于显色作用和淬灭作用的胶体金在黄曲霉毒素M1和大肠杆菌O157：H7检测中的初步应用
发布时间：2021-03-29 16:09
胶体金是具有一定尺寸大小,并且可以保持稳定胶体状态的贵金属纳米粒子。由于颜色醒目,所以胶体金作为示踪物广泛应用于免疫学检测。同时,胶体金具有较高的摩尔消光系数和可调的可见光吸收峰,因此也可以作为淬灭剂应用于检测。黄曲霉毒素M1（Aflatoxin,AFM1）是黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的次级代谢产物。在潮湿的环境下,AFB1会污染谷物,奶牛吃了AFB1污染的谷物后会产生含AFM1的牛奶,因此AFM1也被称为“牛奶毒素”。大肠杆菌O157:H7对于人类健康而言是一种严重的威胁,因此,有必要设计一种快速且灵敏的方法来检测它们。本论文利用胶体金的显色作用和淬灭作用实现对AFM1和大肠杆菌O157:H7的检测。真菌毒素和致病菌可能存在于同一食品样本中,因此有必要在样本中将其同时检出。本文第二章以胶体金为显色标记物将竞争法和双抗夹心法集成在同一个试纸条上,从而实现了对小分子物质（AFM1）和大分子物质（大肠杆菌O157:H7）的同时检测。结果表明,AFM1检测时,线性范围为100 pg/mL-1000 pg/mL,在牛奶中的检测灵敏度为50 pg/mL。大肠杆菌O157...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
黄曲霉毒素结构通式
2.3.5 T 线位置的探究如图2.1所示，将T1线检测AFM1，T2线检测大肠杆菌O157:H7这种模式命名为LFI set-up I；将T1线检测大肠杆菌O157:H7，T2线检测AFM1这种模式命名为LFI set-up II。在LFI set-up I和LFI set-up II这两种模式中，当AFM1浓度为0 pg/mL时，每隔一分钟对检测大肠杆菌O157:H7（3.3×105CFU/mL）的T线信号值进行读取，直到35 min。比较这两种模式下检测大肠杆菌O157:H7（3.3×105CFU/mL）的T线信号值。当AFM1浓度为500 pg/mL时，每隔一分钟对检测大肠杆菌O157:H7（3.3×105CFU/mL）的T线信号值进行读取，直到35 min。比较这两种模式下检测大肠杆菌O157:H7（3.3×105CFU/mL）的T线信号值。当大肠杆菌浓度为0CFU/mL时，每隔一分钟对检测AFM1（0和500 pg/mL）的T线信号值进行读取，直到35 min。比较两种模式下检测AFM1（0和500 pg/mL）的T线信号值。当大肠杆菌为3.3×105CFU/mL时，每隔一分钟对检测AFM1（0和500 pg/mL）的T线信号值进行读取，直到35 min。比较两种模式下检测AFM1（0和500 pg/mL）的T线信号值。综合以上数据探究检测线的位置对竞争法和双抗夹心法的影响
第二章 集成双路胶体金免疫层析法同时检测黄曲霉毒素 M1 和大肠杆菌 O157:H7并与上述方法对比。2.4 结果与讨论2.4.1 实验设计原理检测原理如图 2.2 所示，若样本存在一定浓度的大肠杆菌 O157:H7，则 anti-Ecoli O157:H7 mAb-GNP 与大肠杆菌 O157:H7 形成复合物，接着复合物被 T1 线上的 anti-E. coli O157:H7 pAb 捕获，最终在 T1 线上显色，T1 线的检测信号值与大肠杆菌 O157:H7 的量成正比。若样本存在一定浓度的 AFM1，anti-AFM1 mAb-GNP 与 AFM1 结合形成复合物，则 T2 线上的 AFM1-BSA 不能或少量被 anti-AFM1 mAb-GNP 捕获，T线不显色或显色很浅。T2 线的检测信号值与 AFM1 的浓度成反比。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大肠杆菌致病因子研究进展[J]. 王帅帅,杜悦凝,吴报春,唐小倩,刘云,陈小军. 中兽医医药杂志. 2018(05)
[2]食源性致病菌快速检测技术研究进展[J]. 尹琬婷,严志明. 食品安全导刊. 2018(24)
[3]赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮-二联胶体金免疫层析试纸条的制备及应用[J]. 章先,付子贤,周一钊,方维焕,宋厚辉. 微生物学通报. 2019(05)
[4]食品中真菌毒素的污染与检测研究进展[J]. 税丕容. 现代食品. 2018(13)
[5]胶体金免疫层析法在畜禽产品兽药残留检测中的应用[J]. 高素敏. 当代畜牧. 2017(35)
[6]分子印迹聚合物在真菌毒素检测中的应用[J]. 柴银皎,李响敏,熊勇华,马尉,蔡小霞,苑静,郭亮. 食品与发酵工业. 2018(01)
[7]胶体金免疫层析技术快速检测谷物中3种真菌毒素的研究[J]. 曹德康,苏建忠,张瑛,秦璐,苗银萍,吴智坚,张杰,赵林萍. 中国食品卫生杂志. 2017(03)
[8]PCR法检测水牛乳中致病性大肠杆菌O157:H7的研究[J]. 黄丽,李玲,杨攀,冯玲,农皓如,曾庆坤. 中国乳品工业. 2016(04)
[9]基于纳米材料构建免疫传感器快速测定粮油食品中的黄曲霉毒素B1[J]. 王瑞鑫,张微,李书国. 粮食与油脂. 2016(01)
[10]畜产品中瘦肉精、氯霉素等残留的胶体金检测技术[J]. 姜在清,陈明生. 中国畜牧兽医文摘. 2015(10)
博士论文
[1]DNA探针在检测生物分子与离子方面的应用[D]. 庞淑.吉林大学 2015
硕士论文
[1]免疫层析法快速检测氟苯尼考和大肠杆菌O157:H7的研究[D]. 韩姣姣.南昌大学 2018
[2]基于HCR及生物素—链霉亲和素信号放大系统检测大肠杆菌O157:H7的研究[D]. 郭琦.南昌大学 2017
[3]黄曲霉毒素M1免疫层析检测方法的研究[D]. 吴成辉.南昌大学 2017
本文编号：3107811
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
黄曲霉毒素结构通式
2.3.5 T 线位置的探究如图2.1所示，将T1线检测AFM1，T2线检测大肠杆菌O157:H7这种模式命名为LFI set-up I；将T1线检测大肠杆菌O157:H7，T2线检测AFM1这种模式命名为LFI set-up II。在LFI set-up I和LFI set-up II这两种模式中，当AFM1浓度为0 pg/mL时，每隔一分钟对检测大肠杆菌O157:H7（3.3×105CFU/mL）的T线信号值进行读取，直到35 min。比较这两种模式下检测大肠杆菌O157:H7（3.3×105CFU/mL）的T线信号值。当AFM1浓度为500 pg/mL时，每隔一分钟对检测大肠杆菌O157:H7（3.3×105CFU/mL）的T线信号值进行读取，直到35 min。比较这两种模式下检测大肠杆菌O157:H7（3.3×105CFU/mL）的T线信号值。当大肠杆菌浓度为0CFU/mL时，每隔一分钟对检测AFM1（0和500 pg/mL）的T线信号值进行读取，直到35 min。比较两种模式下检测AFM1（0和500 pg/mL）的T线信号值。当大肠杆菌为3.3×105CFU/mL时，每隔一分钟对检测AFM1（0和500 pg/mL）的T线信号值进行读取，直到35 min。比较两种模式下检测AFM1（0和500 pg/mL）的T线信号值。综合以上数据探究检测线的位置对竞争法和双抗夹心法的影响
第二章 集成双路胶体金免疫层析法同时检测黄曲霉毒素 M1 和大肠杆菌 O157:H7并与上述方法对比。2.4 结果与讨论2.4.1 实验设计原理检测原理如图 2.2 所示，若样本存在一定浓度的大肠杆菌 O157:H7，则 anti-Ecoli O157:H7 mAb-GNP 与大肠杆菌 O157:H7 形成复合物，接着复合物被 T1 线上的 anti-E. coli O157:H7 pAb 捕获，最终在 T1 线上显色，T1 线的检测信号值与大肠杆菌 O157:H7 的量成正比。若样本存在一定浓度的 AFM1，anti-AFM1 mAb-GNP 与 AFM1 结合形成复合物，则 T2 线上的 AFM1-BSA 不能或少量被 anti-AFM1 mAb-GNP 捕获，T线不显色或显色很浅。T2 线的检测信号值与 AFM1 的浓度成反比。
【参考文献】：
期刊论文
[1]大肠杆菌致病因子研究进展[J]. 王帅帅,杜悦凝,吴报春,唐小倩,刘云,陈小军. 中兽医医药杂志. 2018(05)
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[3]赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮-二联胶体金免疫层析试纸条的制备及应用[J]. 章先,付子贤,周一钊,方维焕,宋厚辉. 微生物学通报. 2019(05)
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[5]胶体金免疫层析法在畜禽产品兽药残留检测中的应用[J]. 高素敏. 当代畜牧. 2017(35)
[6]分子印迹聚合物在真菌毒素检测中的应用[J]. 柴银皎,李响敏,熊勇华,马尉,蔡小霞,苑静,郭亮. 食品与发酵工业. 2018(01)
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[8]PCR法检测水牛乳中致病性大肠杆菌O157:H7的研究[J]. 黄丽,李玲,杨攀,冯玲,农皓如,曾庆坤. 中国乳品工业. 2016(04)
[9]基于纳米材料构建免疫传感器快速测定粮油食品中的黄曲霉毒素B1[J]. 王瑞鑫,张微,李书国. 粮食与油脂. 2016(01)
[10]畜产品中瘦肉精、氯霉素等残留的胶体金检测技术[J]. 姜在清,陈明生. 中国畜牧兽医文摘. 2015(10)
博士论文
[1]DNA探针在检测生物分子与离子方面的应用[D]. 庞淑.吉林大学 2015
硕士论文
[1]免疫层析法快速检测氟苯尼考和大肠杆菌O157:H7的研究[D]. 韩姣姣.南昌大学 2018
[2]基于HCR及生物素—链霉亲和素信号放大系统检测大肠杆菌O157:H7的研究[D]. 郭琦.南昌大学 2017
[3]黄曲霉毒素M1免疫层析检测方法的研究[D]. 吴成辉.南昌大学 2017
本文编号：3107811
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