黑果腺肋花楸花色苷对肝纤维化的防治作用及机制研究

发布时间：2021-05-20 15:53

　　黑果腺肋花楸（Aornia mealnocarpa Elliot）,又名不老莓。其果实富含大量的多酚类、黄酮类、芳香类等功能成分,其中花色苷含量高达1%。本课题组前期实验发现黑果腺肋花楸花色苷（Anthocyanin in Aornia mealnocarpa Elliot,AMA）具有很强的抗氧化、抗癌、抗衰老、降糖降脂等功能。肝纤维化（HF）被认为是最常见的慢性疾病之一。主要效应细胞是肝星状细胞（HSC）。当肝细胞出现纤维化时,转化生长因子β1（TGF-β1）的表达量随之增高,同时它也是星状细胞增殖和胶原生成的有效诱导剂。此外,TGF-β1的表达还与肝细胞中的形态改变有关,例如上皮间充质转化（EMT）。因此,探索EMT的机制对于开发新的有效的肝病治疗方法非常重要。此外,旨在破坏TGF-β1产生或用特定小分子阻断信号转导的策略对产生有效的肝病治疗方法具有重要的理论和实践意义。鉴于目前研究报道多酚类与肝疾病具有密切的关系,所以我们推测AMA在抗肝纤维化领域有着重要的意义。但是,AMA在TGF-β1诱导的肝细胞EMT中的细胞作用机制尚未探索。基于TGF-β/Smad信号通路、氧化应激以及... 

【文章来源】：辽宁大学辽宁省 211工程院校

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
    0.1 肝纤维化研究概述
    0.2 黑果腺肋花楸花色苷的结构和功能
    0.3 肝纤维化的机制研究
    0.4 本课题研究的意义
    0.5 本课题的研究内容及目标
第1章 AMA对 TGF-β1 诱导的HSC-T6 细胞肝纤维化的作用及机制研究
    1.1 实验目的
    1.2 实验方案
    1.3 实验材料、试剂与仪器设备
        1.3.1 细胞株
        1.3.2 主要试剂及耗材
        1.3.3 主要仪器设备
        1.3.4 试剂的配制
    1.4 实验方法
        1.4.1 细胞培养
        1.4.2 模型建立以及实验分组
        1.4.3 肝功能指标检测
        1.4.4 RT-PCR检测HSC-T6 细胞炎症因子的mRNA表达水平
        1.4.5 HSC-T6细胞总蛋白提取
        1.4.6 HSC-T6 细胞总蛋白浓度测定(BCA法)
        1.4.7 蛋白质免疫印迹(Western Blotting)
    1.5 数据分析
    1.6 实验结果
        1.6.1 AMA对 TGF-β1 诱导的HSC-T6 细胞存活率的影响
        1.6.2 AMA对 TGF-β1 诱导的HSC-T6 细胞肝功能指标的影响
        1.6.3 AMA对 TGF-β1 诱导的HSC-T6 细胞炎症因子IL-1,IL-6,TNF-α,COX-2mRNA水平的影响
        1.6.4 AMA对 TGF-β1 诱导的HSC-T6 细胞中TGF-β/Smad信号通路蛋白以及α-SMA和 CollagenⅠ蛋白表达的影响
    1.7 小结
第2章 AMA对肝纤维化的干预作用
    2.1 实验目的
    2.2 实验方案
    2.3 实验材料、试剂与仪器设备
        2.3.1 实验动物
        2.3.2 主要试药及材料试剂
        2.3.3 主要仪器设备
    2.4 实验动物模型建立及试验分组
        2.4.1 实验分组
        2.4.2 造模与给药
        2.4.3 取材
        2.4.4 测定指标
    2.5 实验方法与步骤
        2.5.1 小鼠体重变化以及脏器指数
        2.5.2 小鼠病理切片制作与观察
        2.5.3 小鼠血清中肝功能指标检测
        2.5.4 小鼠肝组织中肝功能指标检测
        2.5.5 小鼠肝组织中氧化应激参数检测
    2.6 数据分析
    2.7 实验结果
        2.7.1 AMA对肝纤维化小鼠体重及肝系数的影响
        2.7.2 AMA对肝纤维化小鼠肝组织形态的影响
        2.7.3 AMA对肝纤维化小鼠血清肝功能指数的影响
        2.7.4 AMA对肝纤维化小鼠肝组织中肝功能指数的影响
        2.7.5 AMA对肝纤维化小鼠肝组织氧化应激参数的影响
    2.8 小结
第3章 AMA抗肝纤维化机制研究
    3.1 实验目的
    3.2 实验方案
    3.3 实验材料、试剂与仪器设备
        3.3.1 实验动物
        3.3.2 试验试剂及材料
        3.3.3 主要仪器设备
    3.4 实验方法
        3.4.1 RT-PCR检测小鼠肝组织炎症因子的mRNA表达
        3.4.2 肝组织总蛋白提取
        3.4.3 肝组织总蛋白浓度测定(BCA法)
        3.4.4 蛋白质免疫印迹(Western Blotting)
    3.5 数据分析
    3.6 实验结果
        3.6.1 .AMA对 CCl_4诱导的小鼠肝组织炎症因子IL-1,IL-6,TNF-α,COX-2 m RNA水平的影响
        3.6.2 AMA对 CCl_4诱导小鼠肝组织中TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达的影响
        3.6.3 AMA对 CCl_4诱导小鼠肝组织中α-SMA和 CollagenⅠ蛋白表达的影响
    3.7 小结
第4章 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间发表学术论文及参加科研情况



本文编号：3198028