来源于Pseudomonas saccharophila的麦芽四糖生成酶的分泌表达及其结构与性质研究
发布时间：2021-08-04 21:10
麦芽低聚糖是一种功能性糖源,由210个葡萄糖单元以α-1,4-糖苷键连接而成,具有良好的理化性质和特殊的生理功效,在食品及医药领域中有着越来越广泛的应用。麦芽低聚糖生成酶（Maltooligosaccharide-forming amylase,MFA酶）是工业制备麦芽低聚糖的主要酶制剂。目前已有多种不同来源的MFA酶实现了异源表达,但分泌量普遍较低,限制了该酶的工业应用。同时,对MFA酶结构与功能的研究尚且有限,因此,研究其催化机制及构效关系对酶的深入研究和分子改造具有重要意义。本课题以来源于Pseudomonas saccharophila STB07的MFA酶(MFAps酶)为研究对象,首先,分别构建了MFAps酶的大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和毕赤酵母表达系统,实现了酶的胞外过表达。研究发现,Bacillus subtilis WB600是表达MFAps酶的最佳体系,摇瓶培养72 h后发酵液酶活达144.60 U/mL,比文献报道水平提高了13.7倍,比酶活为980.49 U/mg;MFA
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MFA酶的水解模式
江南大学硕士学位论文FA 酶晶体结构的研究现状 蛋白质的结晶与结构解析蛋白质的结晶对蛋白浓度和纯度有极高的要求，必须建立在蛋白质实现高础上。结晶是指蛋白质分子从过饱和溶液中析出，由随机分布状态转变为晶体的过程，包括了晶核形成和晶体生长两个过程[45]。通常，结晶方法可晶法、透析法、液相扩散法和气相扩散法。结晶时最常用到的悬滴法(图 1-相扩散法，将高浓度蛋白质溶液(10~200mg/mL)悬于沉淀剂溶液上方，在，通过密闭体系中蛋白质溶液蒸汽与沉淀剂溶液蒸汽的相互扩散而使蛋白接近过饱和状态，当达到较高的饱和度时，蛋白质自发沉淀，堆栈形成晶体
图 3-1 表达载体 mfaps/pET-20b(+)的构建Fig. 3-1 Construction of mfaps/pET-20b(+)图 3-2 表达载体 mfaps/pET-20b(+)的酶切电泳验证M：DNA 相对分子质量标准；1：Nde I 和 Xho I 双酶切表达载体 mfaps/pET-20b(+)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]芽孢杆菌表达系统的特点及研究进展[J]. 苗苗,黄昆仑,梁志宏. 食品工业科技. 2017(18)
[2]枯草芽孢杆菌表达系统及其启动子研究进展[J]. 余小霞,田健,刘晓青,伍宁丰. 生物技术通报. 2015(02)
[3]温度对β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响[J]. 周洪波,林福来,郑甲,郭宁,吴俊子,吴丽双,邱冠周. 当代化工. 2013(04)
[4]毕赤酵母表达系统[J]. 韩雪清,刘湘涛,尹双辉. 微生物学杂志. 2003(04)
[5]麦芽四糖的性质及在食品中的应用[J]. 朱明,吴嘉根. 冷饮与速冻食品工业. 1999(04)
博士论文
[1]静电相互作用对淀粉分支酶热稳定性影响的研究[D]. 班宵逢.江南大学 2017
[2]β-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草杆菌中的分泌表达及其热稳定性研究[D]. 李才明.江南大学 2014
[3]软化类芽孢杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶在大肠杆菌中的表达及其产物特异性分析[D]. 李兆丰.江南大学 2009
硕士论文
[1]软化芽孢杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶在毕赤酵母和枯草杆菌中的表达[D]. 张佳瑜.江南大学 2010
本文编号：3322413
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MFA酶的水解模式
江南大学硕士学位论文FA 酶晶体结构的研究现状 蛋白质的结晶与结构解析蛋白质的结晶对蛋白浓度和纯度有极高的要求，必须建立在蛋白质实现高础上。结晶是指蛋白质分子从过饱和溶液中析出，由随机分布状态转变为晶体的过程，包括了晶核形成和晶体生长两个过程[45]。通常，结晶方法可晶法、透析法、液相扩散法和气相扩散法。结晶时最常用到的悬滴法(图 1-相扩散法，将高浓度蛋白质溶液(10~200mg/mL)悬于沉淀剂溶液上方，在，通过密闭体系中蛋白质溶液蒸汽与沉淀剂溶液蒸汽的相互扩散而使蛋白接近过饱和状态，当达到较高的饱和度时，蛋白质自发沉淀，堆栈形成晶体
图 3-1 表达载体 mfaps/pET-20b(+)的构建Fig. 3-1 Construction of mfaps/pET-20b(+)图 3-2 表达载体 mfaps/pET-20b(+)的酶切电泳验证M：DNA 相对分子质量标准；1：Nde I 和 Xho I 双酶切表达载体 mfaps/pET-20b(+)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]芽孢杆菌表达系统的特点及研究进展[J]. 苗苗,黄昆仑,梁志宏. 食品工业科技. 2017(18)
[2]枯草芽孢杆菌表达系统及其启动子研究进展[J]. 余小霞,田健,刘晓青,伍宁丰. 生物技术通报. 2015(02)
[3]温度对β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响[J]. 周洪波,林福来,郑甲,郭宁,吴俊子,吴丽双,邱冠周. 当代化工. 2013(04)
[4]毕赤酵母表达系统[J]. 韩雪清,刘湘涛,尹双辉. 微生物学杂志. 2003(04)
[5]麦芽四糖的性质及在食品中的应用[J]. 朱明,吴嘉根. 冷饮与速冻食品工业. 1999(04)
博士论文
[1]静电相互作用对淀粉分支酶热稳定性影响的研究[D]. 班宵逢.江南大学 2017
[2]β-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草杆菌中的分泌表达及其热稳定性研究[D]. 李才明.江南大学 2014
[3]软化类芽孢杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶在大肠杆菌中的表达及其产物特异性分析[D]. 李兆丰.江南大学 2009
硕士论文
[1]软化芽孢杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶在毕赤酵母和枯草杆菌中的表达[D]. 张佳瑜.江南大学 2010
本文编号：3322413
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