三种多功能纳米探针的构建及对两种食品致病因子快速检测方法的改进研究
发布时间：2021-08-12 00:26
大肠埃希氏菌 0157:H7（Escherichia coli 0157:H7,E.coli 0157:H7）是最重要的食品致病菌之一,抗生素残留也是危害食品安全的重要因素,因此开发简便快速、适用范围广、检测准确率高的快速检测方法,能够有效防控食源性疾病的发生。同时结合多种传感器及新型多功能纳米标记探针的检测方法也是科研人员的研究热点,并逐渐成为检验领域的发展趋势。研究首先设计了一种结合葡萄糖传感器和双功能纳米探针的酶联免疫层析技术,又开发了一种结合拟过氧化物酶纳米探针的免疫比色技术实现了大肠埃希氏菌O157:H7的定量检测,最后针对牛原奶中常见的氯霉素残留设计了一种基于背景荧光猝灭探针的定量免疫层析技术。得到了一系列操作简单、检测成本低、检测结果准确且具有一定创新性的快速检测方法,具体的工作内容如下:1、基于葡萄糖传感器和双功能化纳米探针的定量免疫层析法快速检测大肠埃希氏菌O157:H7随着检测需求的提升和检测技术的革新,定量检测已成为重要的研究和开发方向之一。免疫层析技术因具有多种优点而被广泛采用,但现有定量免疫层析方法均需昂贵仪器;便携式葡萄糖传感器是一种开发和应用非常成功的定量...
【文章来源】：浙江工商大学浙江省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１?（Ａ）试纸条的结构；（Ｂ）双功能化磁珠标记过程及其与￡．?ｃｏ／／０１５７：Ｈ７的结??合过程；（Ｃ）该方法对［ｃｏ／／?０１５７：Ｈ７的检测过程??
?的规则球形，且表现出良好的分散性，这使得双功能化磁珠可以轻易地在试纸条??上移动。图２－２Ｂ显示磁珠在用磁铁吸附几秒后就可以完全从溶液中分离出来，??说明磁珠可以被用来分离富集菌液，且有助于简化磁珠的洗涤步骤。观察未经修??饰的磁珠红外图（图３－２Ｃ），认为在１６００?ｃｍ＿１和１３５０?ｃｍ—１处出现的两个峰均为??ＣＣＸＪ特征峰［７３］。这些结果说明磁珠在合成过程中表面修饰上了羧基基团，在后??续的研宄中可以在不进行其他修饰的情况下直接与抗体连接。??ｃ?Ｉ?ｒｉ??ｉ?．＾／Ｖ?ｉ??ｒ?，?ａ??｜?／＇，（〇〇??１?Ｖ；?ＣＯＯ?１３５０?ｃｍ１??｜?１６００?ｃｍ１??？?／??４０００?３０００?２０００?１０００??Ｗａｖｅ?ｎｕｍｂｅｒｓ?（ｃｍ?）??图２－２?（Ａ）磁珠的透射电镜图；（Ｂ）磁珠被磁性分离的照片；（Ｃ）磁珠的红外光??谱图??Ｆｉｇ．?２－２?（Ａ）?Ｔｈｅ?ＴＥＭ?ｉｍａｇｅ?ｏｆ?ＭＮＰｓ，?（Ｂ）?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｓｈｏｗｉｎｇ?ｔｈｅ?ｍａｇｎｅｔｉｃ??ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＭＮＰｓ?ｕｓｉｎｇ?ａ?ｐｅｒｍａｎｅｎｔ?ｍａｇｎｅｔ，?ａｎｄ?（Ｃ）?ｔｈｅ?ＦＴＩＲ?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ＭＮＰｓ．??１７??
标记量有助于提高该方法的灵敏度。当一个磁珠随样液移动到吸收垫，数十个负??载其上的蔗糖分子可以参与水解反应，从而起到了放大信号的作用。本研究发现，??磁珠标记蔗糖酶时，所用的ＭＥＳ缓冲液的ｐＨ能够直接影响标记效率。如图２－３Ａ??所示，葡萄糖传感器测得的信号随ｐＨ的降低而升高，且当ｐＨ为４．２时信号最??大。分析认为，蔗糖酶在低于或接近自身等电点时表现为正电荷，与磁珠表面的??负电荷羧基相互吸引，能够促进化学键的形成，因此选择ＰＨ?４．２作为连接蔗糖??酶时的孵育ｐＨ。??该方法的灵敏度取决于磁珠表面连接蛋白的量，蛋白与磁珠的孵育时间会影??响蛋白的结合效率。本研究使用ＢＣＡ试剂盒测定偶联过程中的蛋白结合率，结??果如图２－３Ｂ所示，磁珠单独与蔗糖酶和抗体连接时，仅需１?ｈ即可达到最大结??合率；连接过蔗糖酶的磁珠继续连接抗体时，经过３?ｈ结合率可以达到７０％并不??再升高。因此在制备双功能化磁珠时
【参考文献】：
期刊论文
[1]生物传感器检测食源性大肠杆菌O157:H7研究新进展[J]. 刘慧玲,吕敬章,朱智壕,范放,张恒. 食品安全质量检测学报. 2013(06)
[2]聚苯胺分子印迹膜电化学传感器检测氯霉素[J]. 李欢欢,常志显,周文辉. 化学研究. 2013(06)
[3]不同粒径大小胶体金的制备[J]. 顾菲菲,高海岗,陆建荣. 中国畜牧兽医文摘. 2013(10)
[4]氯霉素的毒性作用和检测方法研究进展[J]. 曹巧玲,杨凯,武泽新. 职业与健康. 2013(16)
[5]Pt-Au二元双金属/氧化石墨烯电化学传感器同时检测尿酸及多巴胺的应用研究[J]. 张银烽,华梅,赵晓慧,杨丽君,冯亚娟,杨云慧. 化学传感器. 2012(03)
[6]氯霉素及其在畜水产品中残留检测技术研究进展[J]. 黄强,张海松. 农业灾害研究. 2012(06)
[7]应用基因芯片技术检测肉及肉制品中5种致病菌[J]. 祝儒刚,李拖平,宋立峰. 食品科学. 2012(14)
[8]水产品中氯霉素残留检测技术的研究进展[J]. 高林,陆怡,史贤明. 现代农业科技. 2009(20)
[9]3种ELISA试剂盒检测动物产品中氯霉素残留的应用[J]. 高茂根,杨瑞章,王太全,李平,徐艳华,王玉梅. 中国兽医杂志. 2009(09)
[10]大肠杆菌O157:H7快速培养的初步研究[J]. 赖卫华,冯贻泽,白熙安·克罗泽道森. 食品科学. 2009(07)
硕士论文
[1]金黄色葡萄球菌胶体金免疫层析试纸条的研制[D]. 牛帅.天津科技大学 2016
[2]阪崎肠杆菌胶体金免疫层析试纸条的制备及研究[D]. 欧静堃.华中农业大学 2013
本文编号：3337198
【文章来源】：浙江工商大学浙江省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１?（Ａ）试纸条的结构；（Ｂ）双功能化磁珠标记过程及其与￡．?ｃｏ／／０１５７：Ｈ７的结??合过程；（Ｃ）该方法对［ｃｏ／／?０１５７：Ｈ７的检测过程??
?的规则球形，且表现出良好的分散性，这使得双功能化磁珠可以轻易地在试纸条??上移动。图２－２Ｂ显示磁珠在用磁铁吸附几秒后就可以完全从溶液中分离出来，??说明磁珠可以被用来分离富集菌液，且有助于简化磁珠的洗涤步骤。观察未经修??饰的磁珠红外图（图３－２Ｃ），认为在１６００?ｃｍ＿１和１３５０?ｃｍ—１处出现的两个峰均为??ＣＣＸＪ特征峰［７３］。这些结果说明磁珠在合成过程中表面修饰上了羧基基团，在后??续的研宄中可以在不进行其他修饰的情况下直接与抗体连接。??ｃ?Ｉ?ｒｉ??ｉ?．＾／Ｖ?ｉ??ｒ?，?ａ??｜?／＇，（〇〇??１?Ｖ；?ＣＯＯ?１３５０?ｃｍ１??｜?１６００?ｃｍ１??？?／??４０００?３０００?２０００?１０００??Ｗａｖｅ?ｎｕｍｂｅｒｓ?（ｃｍ?）??图２－２?（Ａ）磁珠的透射电镜图；（Ｂ）磁珠被磁性分离的照片；（Ｃ）磁珠的红外光??谱图??Ｆｉｇ．?２－２?（Ａ）?Ｔｈｅ?ＴＥＭ?ｉｍａｇｅ?ｏｆ?ＭＮＰｓ，?（Ｂ）?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｓｈｏｗｉｎｇ?ｔｈｅ?ｍａｇｎｅｔｉｃ??ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＭＮＰｓ?ｕｓｉｎｇ?ａ?ｐｅｒｍａｎｅｎｔ?ｍａｇｎｅｔ，?ａｎｄ?（Ｃ）?ｔｈｅ?ＦＴＩＲ?ｓｐｅｃｔｒａ?ｏｆ?ＭＮＰｓ．??１７??
标记量有助于提高该方法的灵敏度。当一个磁珠随样液移动到吸收垫，数十个负??载其上的蔗糖分子可以参与水解反应，从而起到了放大信号的作用。本研究发现，??磁珠标记蔗糖酶时，所用的ＭＥＳ缓冲液的ｐＨ能够直接影响标记效率。如图２－３Ａ??所示，葡萄糖传感器测得的信号随ｐＨ的降低而升高，且当ｐＨ为４．２时信号最??大。分析认为，蔗糖酶在低于或接近自身等电点时表现为正电荷，与磁珠表面的??负电荷羧基相互吸引，能够促进化学键的形成，因此选择ＰＨ?４．２作为连接蔗糖??酶时的孵育ｐＨ。??该方法的灵敏度取决于磁珠表面连接蛋白的量，蛋白与磁珠的孵育时间会影??响蛋白的结合效率。本研究使用ＢＣＡ试剂盒测定偶联过程中的蛋白结合率，结??果如图２－３Ｂ所示，磁珠单独与蔗糖酶和抗体连接时，仅需１?ｈ即可达到最大结??合率；连接过蔗糖酶的磁珠继续连接抗体时，经过３?ｈ结合率可以达到７０％并不??再升高。因此在制备双功能化磁珠时
【参考文献】：
期刊论文
[1]生物传感器检测食源性大肠杆菌O157:H7研究新进展[J]. 刘慧玲,吕敬章,朱智壕,范放,张恒. 食品安全质量检测学报. 2013(06)
[2]聚苯胺分子印迹膜电化学传感器检测氯霉素[J]. 李欢欢,常志显,周文辉. 化学研究. 2013(06)
[3]不同粒径大小胶体金的制备[J]. 顾菲菲,高海岗,陆建荣. 中国畜牧兽医文摘. 2013(10)
[4]氯霉素的毒性作用和检测方法研究进展[J]. 曹巧玲,杨凯,武泽新. 职业与健康. 2013(16)
[5]Pt-Au二元双金属/氧化石墨烯电化学传感器同时检测尿酸及多巴胺的应用研究[J]. 张银烽,华梅,赵晓慧,杨丽君,冯亚娟,杨云慧. 化学传感器. 2012(03)
[6]氯霉素及其在畜水产品中残留检测技术研究进展[J]. 黄强,张海松. 农业灾害研究. 2012(06)
[7]应用基因芯片技术检测肉及肉制品中5种致病菌[J]. 祝儒刚,李拖平,宋立峰. 食品科学. 2012(14)
[8]水产品中氯霉素残留检测技术的研究进展[J]. 高林,陆怡,史贤明. 现代农业科技. 2009(20)
[9]3种ELISA试剂盒检测动物产品中氯霉素残留的应用[J]. 高茂根,杨瑞章,王太全,李平,徐艳华,王玉梅. 中国兽医杂志. 2009(09)
[10]大肠杆菌O157:H7快速培养的初步研究[J]. 赖卫华,冯贻泽,白熙安·克罗泽道森. 食品科学. 2009(07)
硕士论文
[1]金黄色葡萄球菌胶体金免疫层析试纸条的研制[D]. 牛帅.天津科技大学 2016
[2]阪崎肠杆菌胶体金免疫层析试纸条的制备及研究[D]. 欧静堃.华中农业大学 2013
本文编号：3337198
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