基于纳米酶标记仿生免疫分析检测磺胺嘧啶的方法研究
发布时间：2021-09-24 18:33
磺胺类药物是一种抗菌效果好且价格低廉的广谱类抗生素,在畜牧生产养殖中应用十分广泛。由于磺胺药物的滥用以及在人体、动物和环境中的残留,对人体健康造成了严重的威胁。为了防止药物残留对人类带来危害,迫切需要一种快速、灵敏的磺胺药物分析检测方法。仿生酶联免疫分析方法是近几年国内外研究的热点,该方法是以仿生抗体为基础,并结合了酶的催化放大作用,但由于天然酶的分子量大且稳定性差,制约了其在仿生免疫分析中的应用。近年来,纳米材料模拟酶由于具有天然酶的催化活性,且性质稳定,在免疫分析检测中代替天然酶作为标记物,具有较好的应用前景。本研究以分子印迹聚合物作为识别的仿生抗体,用纳米酶代替辣根过氧化物酶（HRP）作为标记物,建立了两种检测磺胺嘧啶残留的新型方法。主要研究结果如下:（1）基于Au@SiO2纳米酶标记仿生免疫分析检测磺胺嘧啶方法。以磺胺嘧啶为模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,采用本体聚合法在96孔酶标板上制备了分子印迹膜作为仿生抗体,以制备的Au@SiO2纳米模拟酶作为标记物,建立了一种快速检测磺胺嘧啶的纳米酶标记仿生免疫分析方法。在最佳条件下,该方法的...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
磺胺类药物分子结构
山东农业大学硕士论文19乙腈和4mL二甲基亚砜的混合液中，室温下磁力搅拌30min，加入20mmol（3.770mL）二甲基丙烯酸乙二醇酯（EGDMA）和20mg偶氮二异丁腈（AIBN），超声15min，氮吹15min，然后在氮气环境下60℃反应18h。聚合反应结束后将获得的固体研磨过筛，用300mL甲醇/冰乙酸混合液（9:1，v/v）进行索氏提取，直到检测萃取溶剂中无模板分子检出，再用300mL甲醇索氏洗脱至中性。最后，60℃真空干燥12h得到磺胺嘧啶MIP。作为对照，除不加模板分子外，非印迹聚合物（Non-ImprintedPolymer,NIP）按照上述相同的流程制备。2.5.4纳米酶标记物的制备将0.011g磺胺嘧啶抗原（0.045mM）溶于10mL甲醇中，室温下超声5min，然后加入10μL戊二醛（25%）水溶液，室温下避光搅拌60min，再加入5mL氨基化的纳米酶溶液，混匀后室温下避光反应60min。反应结束后，离心洗涤，将得到的标记物4℃下保存。2.5.5直接竞争仿生免疫分析流程2.5.5.1基于Au@SiO2纳米酶标记仿生免疫分析检测磺胺嘧啶方法图2仿生酶联免疫吸附试验的示意图。Fig.2.Schematicrepresentationofthebiomimeticenzyme-linkedimmunosorbentassay.用PBS/T溶液洗板3次，在酶标板上每孔加入100μL磺胺嘧啶标准溶液或样品提取液，将不加入磺胺嘧啶标准溶液和样品提取液的孔作为对照孔（对照孔加入100μL的稀释溶剂），之后立即在每个孔加入100μL酶标溶液，在室温下震荡孵育60min。反
基于纳米酶标记仿生免疫分析检测磺胺嘧啶的方法研究223结果与分析3.1基于Au@SiO2纳米酶标记仿生免疫分析检测磺胺嘧啶方法3.1.1纳米金棒的紫外全波长扫描对合成的纳米金棒（AuNRs）进行紫外全波长扫描分析。结果如图3所示，在810nm处出现了最大吸收峰，这是AuNRs的特征峰，表明AuNRs已成功合成。图3AuNRs紫外全波长扫描Fig.3UltravioletabsorptionspectrumofAunanorods3.1.2磺胺嘧啶分子印迹膜的电镜扫描图4印迹膜扫描电镜图Fig.4SEMimagesoftheimprintedfilm为了更直观的了解所制备印迹膜的结构，对其进行了扫描电镜分析。如图4所示，印迹膜表面形成孔穴结构，具有识别位点，表明对目标分子具有特异性识别作用。此外，
【参考文献】：
期刊论文
[1]水产品中磺胺类药物残留危害及常用检测方法[J]. 张梦雪,赵义良,苏青,李云. 今日畜牧兽医. 2019(07)
[2]超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法测定克氏螯虾中39种兽药残留[J]. 宋伟,赵暮雨,韩芳,吕亚宁,丁磊,周典兵,邓晓军,胡艳云,郑平,盛旋. 色谱. 2018(12)
[3]QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中125种兽药残留[J]. 方从容,高洁,王雨昕,周爽,赵云峰,陈达炜,郭启雷. 色谱. 2018(11)
[4]液相色谱-串联质谱法检测猪肉中5种磺胺类药物残留[J]. 舒顺顺,米倩,李佳丽,王朝阳,牛军,周辉. 食品安全质量检测学报. 2018(11)
[5]戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂盒在生鲜乳抗生素残留检测中的应用[J]. 崔晨光. 中国乳业. 2018(05)
[6]鸡肉鸡肝中20种磺胺类兽药残留的测定——QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法[J]. 赵颖,李晓东,姜玲玲,刘瑜,金雁,徐宜宏,吴渺渺. 当代畜牧. 2016(33)
[7]纳米酶在葡萄糖分析检测中的应用研究进展[J]. 罗成,李艳,龙启文,龙建纲. 中国生物医学工程学报. 2016(01)
[8]分子印迹技术在环境科学领域中的应用分析[J]. 鹿利燕. 资源节约与环保. 2015(11)
[9]动物源性食品中磺胺类药物残留检测技术研究进展[J]. 蔡文金,张航俊,陈晓林,林仙军. 畜禽业. 2015(05)
[10]磺胺母核单克隆抗体的制备及其免疫学特性研究[J]. 杜玉玲,常迪,吴国英,陆彦,王晶,吴国娟. 中国食品学报. 2013(12)
博士论文
[1]新型过氧化物模拟酶纳米材料在可视化检测葡萄糖中的应用[D]. 苏莉.兰州大学 2013
硕士论文
[1]基于量子点标记仿生免疫分析检测有机磷农药的方法研究[D]. 刘秋蕊.山东农业大学 2018
[2]17β-雌二醇分子印迹仿生免疫快速检测方法研究[D]. 肖蕾.山东师范大学 2016
[3]基于仿生酶联免疫分析技术快速检测有机磷农药多残留研究[D]. 时辰.山东农业大学 2015
[4]桔霉素分子印迹仿生酶联免疫检测方法研究[D]. 李鸿英.天津科技大学 2015
[5]展青霉素分子印迹聚合物的制备及应用研究[D]. 李倩倩.天津科技大学 2014
[6]磺胺类药物多残留ELISA快速检测试剂盒与胶体金免疫层析试纸条的初探[D]. 杜玉玲.新疆农业大学 2013
[7]甲基膦酸二甲酯分子印迹聚合物微球的研究[D]. 齐卉.重庆大学 2012
[8]莱克多巴胺分子印迹仿生酶联免疫方法的建立[D]. 路晋萍.天津科技大学 2011
[9]水产品中恩诺沙星残留一步式酶联免疫快速检测方法的研究[D]. 李宗妍.中国海洋大学 2009
[10]恩诺沙星分子印迹聚合物的制备及应用[D]. 潘明飞.天津科技大学 2009
本文编号：3408239
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
磺胺类药物分子结构
山东农业大学硕士论文19乙腈和4mL二甲基亚砜的混合液中，室温下磁力搅拌30min，加入20mmol（3.770mL）二甲基丙烯酸乙二醇酯（EGDMA）和20mg偶氮二异丁腈（AIBN），超声15min，氮吹15min，然后在氮气环境下60℃反应18h。聚合反应结束后将获得的固体研磨过筛，用300mL甲醇/冰乙酸混合液（9:1，v/v）进行索氏提取，直到检测萃取溶剂中无模板分子检出，再用300mL甲醇索氏洗脱至中性。最后，60℃真空干燥12h得到磺胺嘧啶MIP。作为对照，除不加模板分子外，非印迹聚合物（Non-ImprintedPolymer,NIP）按照上述相同的流程制备。2.5.4纳米酶标记物的制备将0.011g磺胺嘧啶抗原（0.045mM）溶于10mL甲醇中，室温下超声5min，然后加入10μL戊二醛（25%）水溶液，室温下避光搅拌60min，再加入5mL氨基化的纳米酶溶液，混匀后室温下避光反应60min。反应结束后，离心洗涤，将得到的标记物4℃下保存。2.5.5直接竞争仿生免疫分析流程2.5.5.1基于Au@SiO2纳米酶标记仿生免疫分析检测磺胺嘧啶方法图2仿生酶联免疫吸附试验的示意图。Fig.2.Schematicrepresentationofthebiomimeticenzyme-linkedimmunosorbentassay.用PBS/T溶液洗板3次，在酶标板上每孔加入100μL磺胺嘧啶标准溶液或样品提取液，将不加入磺胺嘧啶标准溶液和样品提取液的孔作为对照孔（对照孔加入100μL的稀释溶剂），之后立即在每个孔加入100μL酶标溶液，在室温下震荡孵育60min。反
基于纳米酶标记仿生免疫分析检测磺胺嘧啶的方法研究223结果与分析3.1基于Au@SiO2纳米酶标记仿生免疫分析检测磺胺嘧啶方法3.1.1纳米金棒的紫外全波长扫描对合成的纳米金棒（AuNRs）进行紫外全波长扫描分析。结果如图3所示，在810nm处出现了最大吸收峰，这是AuNRs的特征峰，表明AuNRs已成功合成。图3AuNRs紫外全波长扫描Fig.3UltravioletabsorptionspectrumofAunanorods3.1.2磺胺嘧啶分子印迹膜的电镜扫描图4印迹膜扫描电镜图Fig.4SEMimagesoftheimprintedfilm为了更直观的了解所制备印迹膜的结构，对其进行了扫描电镜分析。如图4所示，印迹膜表面形成孔穴结构，具有识别位点，表明对目标分子具有特异性识别作用。此外，
【参考文献】：
期刊论文
[1]水产品中磺胺类药物残留危害及常用检测方法[J]. 张梦雪,赵义良,苏青,李云. 今日畜牧兽医. 2019(07)
[2]超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法测定克氏螯虾中39种兽药残留[J]. 宋伟,赵暮雨,韩芳,吕亚宁,丁磊,周典兵,邓晓军,胡艳云,郑平,盛旋. 色谱. 2018(12)
[3]QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡蛋中125种兽药残留[J]. 方从容,高洁,王雨昕,周爽,赵云峰,陈达炜,郭启雷. 色谱. 2018(11)
[4]液相色谱-串联质谱法检测猪肉中5种磺胺类药物残留[J]. 舒顺顺,米倩,李佳丽,王朝阳,牛军,周辉. 食品安全质量检测学报. 2018(11)
[5]戴尔沃牛奶广谱抗生素检测试剂盒在生鲜乳抗生素残留检测中的应用[J]. 崔晨光. 中国乳业. 2018(05)
[6]鸡肉鸡肝中20种磺胺类兽药残留的测定——QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法[J]. 赵颖,李晓东,姜玲玲,刘瑜,金雁,徐宜宏,吴渺渺. 当代畜牧. 2016(33)
[7]纳米酶在葡萄糖分析检测中的应用研究进展[J]. 罗成,李艳,龙启文,龙建纲. 中国生物医学工程学报. 2016(01)
[8]分子印迹技术在环境科学领域中的应用分析[J]. 鹿利燕. 资源节约与环保. 2015(11)
[9]动物源性食品中磺胺类药物残留检测技术研究进展[J]. 蔡文金,张航俊,陈晓林,林仙军. 畜禽业. 2015(05)
[10]磺胺母核单克隆抗体的制备及其免疫学特性研究[J]. 杜玉玲,常迪,吴国英,陆彦,王晶,吴国娟. 中国食品学报. 2013(12)
博士论文
[1]新型过氧化物模拟酶纳米材料在可视化检测葡萄糖中的应用[D]. 苏莉.兰州大学 2013
硕士论文
[1]基于量子点标记仿生免疫分析检测有机磷农药的方法研究[D]. 刘秋蕊.山东农业大学 2018
[2]17β-雌二醇分子印迹仿生免疫快速检测方法研究[D]. 肖蕾.山东师范大学 2016
[3]基于仿生酶联免疫分析技术快速检测有机磷农药多残留研究[D]. 时辰.山东农业大学 2015
[4]桔霉素分子印迹仿生酶联免疫检测方法研究[D]. 李鸿英.天津科技大学 2015
[5]展青霉素分子印迹聚合物的制备及应用研究[D]. 李倩倩.天津科技大学 2014
[6]磺胺类药物多残留ELISA快速检测试剂盒与胶体金免疫层析试纸条的初探[D]. 杜玉玲.新疆农业大学 2013
[7]甲基膦酸二甲酯分子印迹聚合物微球的研究[D]. 齐卉.重庆大学 2012
[8]莱克多巴胺分子印迹仿生酶联免疫方法的建立[D]. 路晋萍.天津科技大学 2011
[9]水产品中恩诺沙星残留一步式酶联免疫快速检测方法的研究[D]. 李宗妍.中国海洋大学 2009
[10]恩诺沙星分子印迹聚合物的制备及应用[D]. 潘明飞.天津科技大学 2009
本文编号：3408239
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