山梨酸钾和糖精钠联合对小鼠小肠细胞生长发育的影响

发布时间：2021-10-13 18:36

　　食品添加剂安全评估标准建立在单一的食品添加剂的毒性效应基础上,然而在食品工业中,一种食品常常包含几种食品添加剂。多种食品添加剂一同在人体内则可能产生相加、协同、拮抗等联合作用,这对传统食品毒理学及食品添加剂的毒性评估提出了新的挑战。本论文采用了Caco-2细胞模型和mini-gut肠道类器官模型,对食品工业常见的食品添加剂联合应用的毒性进行了评价,主要研究内容及结果如下:（1）首先以Caco-2细胞模型,分别研究评价了山梨酸钾、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、苯甲酸钠和脱氢乙酸钠这五种食品防腐剂以及糖精钠、三氯蔗糖、安赛蜜、甜蜜素和阿斯巴甜这五种人工甜味剂对细胞增殖活力的影响。结果表明,它们的细胞增殖抑制毒性,都表现出剂量正相关性。毒性作用顺序分别为:焦亚硫酸钠>亚硫酸钠>山梨酸钾>脱氢乙酸钠>苯钾酸钠,糖精钠>安赛蜜>阿斯巴甜>甜蜜素>三氯蔗糖。选择了食品工业中较常用的山梨酸钾和糖精钠这两种食品添加剂进行联合实验,利用MTT法及2×2析因分析法发现对细胞增殖活力的毒性是协同联合作用,并利用高内涵分析系统及qPCR技术,发现山梨酸钾和糖精钠联合组能... 

【文章来源】：浙江工商大学浙江省

【文章页数】：112 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 食品添加剂的使用及研究现状
        1.1.1 常用的食品防腐剂的使用及研究现状
        1.1.2 常用人工甜味剂的使用及研究现状
    1.2 食品添加剂的安全性评价方法和研究现状
        1.2.1 传统的食品添加剂安全性评价方法
        1.2.2 细胞学安全性评价研究现状
        1.2.3 食品添加剂联合作用的类型和评价方法
    1.3 Mini-gut细胞模型研究现状
    1.4 研究目的及内容
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 实验技术路线
        1.4.3 研究内容
2 不同防腐剂和人工甜味剂单独及联合作用对Caco-2 细胞生长的影响
    2.1 引言
    2.2 材料及仪器
        2.2.1 主要实验材料与试剂
        2.2.2 实验仪器与设备
        2.2.3 实验试剂的配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养常规操作
        2.3.2 实验设计
        2.3.3 MTT法检测细胞增殖活力
        2.3.4 食品添加剂单独及联合作用的HCA多参数分析
        2.3.5 食品添加剂单独及联合作用致细胞凋亡的通路探究
        2.3.6 统计处理
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 5 种防腐剂和5种人工甜味剂对细胞活力的影响
        2.4.2 山梨酸钾和糖精钠单独及联合作用的多指标评价
        2.4.3 亚硫酸钠和甜蜜素单独及联合作用的多指标评价
    2.5 小结
3 不同防腐剂和人工甜味剂单独及联合作用对mini-gut生长的影响
    3.1 引言
    3.2 材料及仪器
        3.2.1 主要实验材料与试剂
        3.2.2 实验试剂的配制
        3.2.3 实验仪器与设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 小肠隐窝的分离与培养
        3.3.2 小肠类器官的传代
        3.3.3 小肠类器官的冻存
        3.3.4 实验设计
        3.3.5 MTT法对mini-gut细胞活力的测定
        3.3.6 不同防腐剂及人工甜味剂对mini-gut生长的影响
        3.3.7 不同防腐剂联合人工甜味剂对mini-gut生长的影响
        3.3.8 统计处理
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 五种常见的防腐剂对Mini-gut生长的影响
        3.4.2 五种常见的人工甜味剂对Mini-gut生长的影响
        3.4.3 防腐剂和人工甜味剂联合作用对Mini-gut生长发育的影响
    3.5 小结
4 山梨酸钾和糖精钠单独及联合作用对肠道细胞增殖分化的影响
    4.1 引言
    4.2 材料及仪器
        4.2.1 主要实验材料与试剂
        4.2.2 实验试剂的配制
        4.2.3 仪器与设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 小肠隐窝的分离与培养
        4.3.2 小肠类器官的传代
        4.3.3 实验设计
        4.3.4 Ed U细胞增殖检测
        4.3.5 细胞总蛋白提取及蛋白含量检测
        4.3.6 总SOD活性检测
        4.3.7 总谷胱甘肽过氧化物酶检测
        4.3.8 实时荧光PCR检测
        4.3.9 统计处理
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 山梨酸钾和糖精钠对Mini-gut生长的影响
        4.4.2 山梨酸钾和糖精钠对Mini-gut细胞分化的影响
        4.4.3 山梨酸钾和糖精钠对mini-gut的氧化应激分析
        4.4.4 亚硫酸钠和甜蜜素对mini-gut生长的影响
        4.4.5 亚硫酸钠和甜蜜素对mini-gut细胞分化的影响
        4.4.6 亚硫酸钠和甜蜜素对mini-gut的氧化应激分析
        4.4.7 食品添加剂促进mini-gut损伤和凋亡的相关通路探究
    4.5 小结
5 总结与展望
    5.1 总结
    5.2 创新点
    5.3 展望
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[2]肿瘤3D细胞模型在体外药敏实验中的应用[J]. 刘艳红,李静,余孝其,王娜,刘媛,张骥.  实验室研究与探索. 2019(03)
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[8]细胞自噬与活性氧的关系[J]. 路会侠,李绍波.  海南医学. 2017(13)
[9]匹美克莫司使线粒体受损并激活AMPK信号通路与线粒体自噬[J]. 吴艳阳,胡涌泉,周海燕,张博,李梢.  中国细胞生物学学报. 2017(07)
[10]高内涵筛选技术应用于药物毒理方面的研究进展[J]. 李毅.  医疗装备. 2015(16)



本文编号：3435201