高活力酯化菌株的筛选与优化研究
发布时间：2021-11-14 12:49
本课题主要通过不同菌种联合发酵的方式提高浓香型大曲的酯化力,酯化力高低主要取决于浓香型酒液中己酸乙酯的含量,己酸乙酯含量越高,酒香越浓。论文主要内容如下:（1）浓香型大曲中高酯化力菌株的筛选与鉴定。利用酯化酶吸收分解三丁酸甘油酯的特性从浓香型中温大曲中筛选出一株酯化力高的菌株,并对该菌株进行了形态学鉴定、生理生化鉴定以及分子生物学鉴定,结合菌种鉴定手册得出该菌株是一株丛毛红曲霉。（2）探究了丛毛红曲霉与华根霉联合发酵制作浓香型大曲的制曲方式。通过实验证明了丛毛红曲霉与华根霉联合发酵方式为分别接种于最适发酵培养基后将丛毛红曲霉与华根霉曲料以2:1的比例混合,得出酯化力为45.68mg/g·100h。（3）探究丛毛红曲霉与华根霉联合发酵制作浓香型大曲制曲工艺优化。通过单因素实验考察了培养基条件与培养条件分别对丛毛红曲霉与华根霉酯化力的影响,并确定了最适条件。使用了Plackett-Burman方法对显著因素进行筛选,确定了影响丛毛红曲霉酯化力的显著因素为初始含水量、大米粒度、接种量与反应时间;影响华根霉酯化力的显著因素为初始含水量、橄榄油添加量、反应时间。接着运用了design exper...
【文章来源】：齐鲁工业大学山东省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
酒曲制备流程图
齐鲁工业大学硕士学位论文19图2.1菌种初筛透明圈结果Fig.2.1resultsofprimaryscreeningtransparentcircleofbacteria表2.5高酯化力菌株初筛结果Table2.5Preliminaryscreeningresultsofstrainwithhighesterificationpower菌株D/mmd/mmD/d值X119.92312.8101.555X234.18816.0622.128X335.01618.7391.869J119.3578.9482.163Z122.7488.4702.686Z222.3168.8362.526Z321.3638.9542.386Z420.7488.6702.393Z519.3168.8362.186Z622.3638.9542.498由表2.5可知，10株菌株的D/d值为1.555～2.686，均具有水解三丁酸甘油酯的能力，其中，霉菌的D/d值最大，选取其中D/d值较大的5株霉菌（Z1、Z2、Z3、Z4、Z6）进行复筛。2.4.3大曲中高产酯化酶菌株的复筛结果菌株Z1、Z2、Z3、Z4、Z6的酯化力测定结果见表2.6表2.6高酯化力菌株复筛结果Table2.6Secondaryscreeningresultsofstrainwithhighesterificationpower菌株Z1Z2Z3Z4Z6酯化力/(mg·g-1·100h)36.94±1.6732.00±2.2729.32±1.2930.65±1.2925.86±3.30由表2.6可知，菌株Z1的酯化力最高为36.94mg/g·100h，且高于企标QB/T5188-2017酿造红曲规定的30mg/g·100h。因此，选定该菌株为目标菌株进行菌种鉴定，并定义为YL-1。2.4.4形态学鉴定结果菌株YL-1在CYA培养基、G25N培养基和PDA培养基上的菌落形态见图2.2及表2.7、显微形态见图2.3。
第二章高酯化力菌株的筛选与鉴定16图2.2菌株YL-1在PDA培养基、CYA培养基及G25N培养基上的菌落形态Fig.2.2ColonymorphologyofstrainYL-1onPDAmedium,CYAmeidiumandG25Nmedium表2.7菌株YL-1的菌落形态特征Table2.7ColonymorphologicalcharacteristicsofstrainYL-1形态PDA培养基CYA培养基G25N培养基菌落颜色橙黄色，边缘白色橙红色，边缘白色白色菌落形状平坦，圆形平坦，圆形平坦，圆形菌丝形态菌丝浓密菌丝较密菌丝稀疏菌丝高度低低低生长速度快中等慢根据赫氏与皮特关于红曲菌的形态和分类学，在PDA培养基上生长旺盛，在G25N培养基上呈现白色，菌落在CYA最初是白色，成熟后呈现红色的只有红曲霉。注：A图为10·4倍数的菌丝结构；B图为10·10倍数的孢子结构；C为10·40倍数下闭囊壳结构；D为10·100倍数下子囊结构图2.3菌株YL-1的显微形态Fig.2.3MicroscopicmorphologyofstrainYL-1由图2.2、表2.7及图2.3可知，菌株YL-1菌丝浓密，且生长旺盛。菌株菌丝非常短小，菌株菌落直径很大，最大可至5cm，菌落生长初期时菌丝是呈现为白色的，当其成熟后由于粉笔一些色素会导致菌落培养基表面和背面呈现出橘黄色。置于显微镜下观察到菌丝内部有横隔，有分枝，菌丝内均含有多核，菌株孢子主要生长在菌丝的顶端，且还观察到闭囊壳呈球形，闭囊壳内还包含有许多的子囊，且子囊也呈现为球形。结合《菌种鉴定手册》[72]初步判断该菌株为红曲霉（Monascus）。2.4.5生理生化鉴定
【参考文献】：
期刊论文
[1]响应面法优化大豆豆荚甾醇提取工艺的研究[J]. 诸爱士,金志强,潘明纬,黄鑫磊,李嘉雄,石嫣雯. 中国粮油学报. 2020(04)
[2]响应面法优化醇法提取黑豆种皮中花色苷工艺[J]. 霍岩,赵梓伊,张一鸣,宋香宠,尚宏丽. 饲料研究. 2020(03)
[3]合成己酸乙酯酯化酶产生菌的鉴定及产酶条件优化[J]. 许春艳,孙宝国,徐友强,范光森,李秀婷. 中国食品学报. 2020(05)
[4]响应面法优化三七渣固态发酵产红色素工艺[J]. 卢上飞,谭显东,黄凡,时金栋,羊依金,郭旭晶. 食品工业科技. 2020(16)
[5]西蓝花废弃茎叶固态发酵饲料的营养成分及活性代谢产物的分析研究[J]. 孙宏,姚晓红,汤江武,吴逸飞,王新,李园成,沈琦. 中国畜牧杂志. 2020(09)
[6]三七渣固态发酵生产灵芝菌质的工艺优化[J]. 谭显东,卢上飞,胡伟,魏琨,羊依金. 食品工业科技. 2020(18)
[7]红酵母固态发酵农林废弃物接种量对菌体生长及营养成分的影响[J]. 苗欣宇,牛红红,李达,郑丽,迟燕平,苏颖,刘佳彤,王景会. 农产品加工. 2019(24)
[8]灵芝固态发酵豆渣的抗氧化特性变化研究[J]. 申春莉,沙见宇,李曼,张锦丽. 食品研究与开发. 2019(24)
[9]酒曲的研究进展[J]. 陈孝,温承坤,巩园园,方尚玲,陈茂彬. 中国酿造. 2019(10)
[10]复合麸曲在白酒生产中的应用[J]. 丁鹏飞,张杰,李文达,岳腾飞,谢国排. 酿酒科技. 2019(12)
硕士论文
[1]红曲酿造发酵剂的研发与应用研究[D]. 邢丽.齐鲁工业大学 2019
[2]功能红曲研发与红曲色素分离技术研究[D]. 李同乐.齐鲁工业大学 2019
[3]重组华根霉脂肪酶非水相酯合成活性的激活研究[D]. 杨一涵.江南大学 2018
[4]高产淀粉酶红曲霉菌株的筛选鉴定、条件优化及酶学性质的研究[D]. 吴巧玉.浙江师范大学 2016
[5]中高温大曲中产酯化酶细菌的选育[D]. 刘阳.安徽工程大学 2013
[6]浓香型大曲中高产酯化酶菌株的筛选及产酶条件优化[D]. 杜春迎.黑龙江大学 2012
[7]清香型小曲酒微生物群落结构及功能的研究[D]. 唐洁.江南大学 2012
本文编号：3494668
【文章来源】：齐鲁工业大学山东省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
酒曲制备流程图
齐鲁工业大学硕士学位论文19图2.1菌种初筛透明圈结果Fig.2.1resultsofprimaryscreeningtransparentcircleofbacteria表2.5高酯化力菌株初筛结果Table2.5Preliminaryscreeningresultsofstrainwithhighesterificationpower菌株D/mmd/mmD/d值X119.92312.8101.555X234.18816.0622.128X335.01618.7391.869J119.3578.9482.163Z122.7488.4702.686Z222.3168.8362.526Z321.3638.9542.386Z420.7488.6702.393Z519.3168.8362.186Z622.3638.9542.498由表2.5可知，10株菌株的D/d值为1.555～2.686，均具有水解三丁酸甘油酯的能力，其中，霉菌的D/d值最大，选取其中D/d值较大的5株霉菌（Z1、Z2、Z3、Z4、Z6）进行复筛。2.4.3大曲中高产酯化酶菌株的复筛结果菌株Z1、Z2、Z3、Z4、Z6的酯化力测定结果见表2.6表2.6高酯化力菌株复筛结果Table2.6Secondaryscreeningresultsofstrainwithhighesterificationpower菌株Z1Z2Z3Z4Z6酯化力/(mg·g-1·100h)36.94±1.6732.00±2.2729.32±1.2930.65±1.2925.86±3.30由表2.6可知，菌株Z1的酯化力最高为36.94mg/g·100h，且高于企标QB/T5188-2017酿造红曲规定的30mg/g·100h。因此，选定该菌株为目标菌株进行菌种鉴定，并定义为YL-1。2.4.4形态学鉴定结果菌株YL-1在CYA培养基、G25N培养基和PDA培养基上的菌落形态见图2.2及表2.7、显微形态见图2.3。
第二章高酯化力菌株的筛选与鉴定16图2.2菌株YL-1在PDA培养基、CYA培养基及G25N培养基上的菌落形态Fig.2.2ColonymorphologyofstrainYL-1onPDAmedium,CYAmeidiumandG25Nmedium表2.7菌株YL-1的菌落形态特征Table2.7ColonymorphologicalcharacteristicsofstrainYL-1形态PDA培养基CYA培养基G25N培养基菌落颜色橙黄色，边缘白色橙红色，边缘白色白色菌落形状平坦，圆形平坦，圆形平坦，圆形菌丝形态菌丝浓密菌丝较密菌丝稀疏菌丝高度低低低生长速度快中等慢根据赫氏与皮特关于红曲菌的形态和分类学，在PDA培养基上生长旺盛，在G25N培养基上呈现白色，菌落在CYA最初是白色，成熟后呈现红色的只有红曲霉。注：A图为10·4倍数的菌丝结构；B图为10·10倍数的孢子结构；C为10·40倍数下闭囊壳结构；D为10·100倍数下子囊结构图2.3菌株YL-1的显微形态Fig.2.3MicroscopicmorphologyofstrainYL-1由图2.2、表2.7及图2.3可知，菌株YL-1菌丝浓密，且生长旺盛。菌株菌丝非常短小，菌株菌落直径很大，最大可至5cm，菌落生长初期时菌丝是呈现为白色的，当其成熟后由于粉笔一些色素会导致菌落培养基表面和背面呈现出橘黄色。置于显微镜下观察到菌丝内部有横隔，有分枝，菌丝内均含有多核，菌株孢子主要生长在菌丝的顶端，且还观察到闭囊壳呈球形，闭囊壳内还包含有许多的子囊，且子囊也呈现为球形。结合《菌种鉴定手册》[72]初步判断该菌株为红曲霉（Monascus）。2.4.5生理生化鉴定
【参考文献】：
期刊论文
[1]响应面法优化大豆豆荚甾醇提取工艺的研究[J]. 诸爱士,金志强,潘明纬,黄鑫磊,李嘉雄,石嫣雯. 中国粮油学报. 2020(04)
[2]响应面法优化醇法提取黑豆种皮中花色苷工艺[J]. 霍岩,赵梓伊,张一鸣,宋香宠,尚宏丽. 饲料研究. 2020(03)
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[4]响应面法优化三七渣固态发酵产红色素工艺[J]. 卢上飞,谭显东,黄凡,时金栋,羊依金,郭旭晶. 食品工业科技. 2020(16)
[5]西蓝花废弃茎叶固态发酵饲料的营养成分及活性代谢产物的分析研究[J]. 孙宏,姚晓红,汤江武,吴逸飞,王新,李园成,沈琦. 中国畜牧杂志. 2020(09)
[6]三七渣固态发酵生产灵芝菌质的工艺优化[J]. 谭显东,卢上飞,胡伟,魏琨,羊依金. 食品工业科技. 2020(18)
[7]红酵母固态发酵农林废弃物接种量对菌体生长及营养成分的影响[J]. 苗欣宇,牛红红,李达,郑丽,迟燕平,苏颖,刘佳彤,王景会. 农产品加工. 2019(24)
[8]灵芝固态发酵豆渣的抗氧化特性变化研究[J]. 申春莉,沙见宇,李曼,张锦丽. 食品研究与开发. 2019(24)
[9]酒曲的研究进展[J]. 陈孝,温承坤,巩园园,方尚玲,陈茂彬. 中国酿造. 2019(10)
[10]复合麸曲在白酒生产中的应用[J]. 丁鹏飞,张杰,李文达,岳腾飞,谢国排. 酿酒科技. 2019(12)
硕士论文
[1]红曲酿造发酵剂的研发与应用研究[D]. 邢丽.齐鲁工业大学 2019
[2]功能红曲研发与红曲色素分离技术研究[D]. 李同乐.齐鲁工业大学 2019
[3]重组华根霉脂肪酶非水相酯合成活性的激活研究[D]. 杨一涵.江南大学 2018
[4]高产淀粉酶红曲霉菌株的筛选鉴定、条件优化及酶学性质的研究[D]. 吴巧玉.浙江师范大学 2016
[5]中高温大曲中产酯化酶细菌的选育[D]. 刘阳.安徽工程大学 2013
[6]浓香型大曲中高产酯化酶菌株的筛选及产酶条件优化[D]. 杜春迎.黑龙江大学 2012
[7]清香型小曲酒微生物群落结构及功能的研究[D]. 唐洁.江南大学 2012
本文编号：3494668
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