云产卷烟霉变微生物的分离鉴定及肉桂醛的抑菌作用研究
发布时间：2021-11-15 03:41
随着人们生活水平的提高,天然防霉剂日益受到重视。烟草、卷烟的霉变是贮烟病害的主要因素,易造成重大经济损失。而天然植物精油有着广谱抑菌的特点,可以作为一种理想的新型、低毒性、高效的卷烟防霉剂。但肉桂醛等精油活性成分具有易挥发、易氧化等特点,限制了其应用,通过微胶囊包埋技术可以有效改善上述问题。本论文从云烟中分离鉴定出主要的霉变微生物,对肉桂醛等四种代表性精油活性成分的抑菌效果差异进行了比较,并初步探索了肉桂醛的抑菌机理;在此基础上,通过复合凝聚微胶囊改善了肉桂醛的稳定性及抑菌性能,考察了微胶囊化肉桂醛的抑菌稳定性,并评价了其应用于卷烟的防霉效果。通过平板涂布、真菌形态学观察、显微镜检、18SrDNA-ITS序列测定的方法,对云产卷烟中的霉变微生物进行分离、纯化和鉴定。从霉变成品卷烟中鉴定得到了15株卷烟霉变微生物,发现引起卷烟霉变的微生物主要为曲霉属、青霉属、枝孢属以及链格孢属。其中,巴西曲霉（Aspergillus brasiliensis）致霉性最强,菌落直径达到75.67±0.89mm,比较优势菌株和混合菌的受抑菌特性,明确巴西曲霉为卷烟防霉剂的抑菌效果指示菌。以抑菌圈和最低抑菌浓...
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
5株卷烟霉变微生物琼脂糖凝胶电泳结果
M13 链格孢属 — — — M14 链格孢属 — — — M15 链格孢属 — — — 将 15 株卷烟霉变微生物测试所得 18SrDNA-ITS 序列构建系统发育树。通过 MEGA，采用邻位相连法（NJ，Neighbor-joining）[100]进行进化距离分析，运用 Bootstrap 对系统树进行检验，重复 1000 次[101]。15 株卷烟霉变微生物系统进化树构建结果如图 3-3 所示。由实验结果可知，15 株卷烟霉变微生物的 ITS 序列聚为 5 个分支，划分为青霉属、枝孢属、链格孢属和 2 个曲霉属分支。相同属的进化关系较近，以较高的支持率聚在同一分支，巴西曲霉和黄曲霉与青霉属的同源性较近，可能来源于相距较近的类群。
3结果与讨论293.3.3典型精油活性成分对菌丝形态变化的影响为了观察典型精油活性成分之一的肉桂醛对巴西曲霉菌丝形态的影响，将生长对数期的霉菌菌丝经过肉桂醛（1.5×MIC）抑菌处理，继续生长1d后，通过扫描电子显微镜观察，结果如图3-8所示。图3-8肉桂醛处理前后菌丝生长状况扫描电镜照片（A）、（B）、（C）、（D）为正常生长的巴西曲霉菌丝，（E）、（F）、（G）、（H）为经过1.5×MIC肉桂醛处理过的巴西曲霉菌丝，标尺分别为100.0μm、50.0μm、20.0μm和10.0μmFig.3-8Scanningelectronmicrographofmycelialbeforeandaftercinnamaldehydetreatment.(A),(B),(C),(D)NormalgrowthofhyphaeofAspergillusbrasiliensiswithscalesof100.0μm,50.0μm,20.0μm,10.0μmrespectively;(E),(F),(G),(H)HyphaeofAspergillusbrasiliensistreatedby1.5×MICcinnamaldehydewithscalesof100.0μm,50.0μm,20.0μm,10.0μmrespectively.由图3-8可知，未经肉桂醛抑菌处理的霉菌菌丝菌丝较挺直，具有一定的支撑能力，细胞膜表面完整、光滑；继续培养1d后霉菌菌丝生长快速且茂密，堆叠层次多，电镜观察下景深更深，表明巴西曲霉生长适应力好、繁殖快、致霉性强；在较低倍镜下观察，可见有完整的产孢结构和部分孢子，具有继续生长繁殖的能力。但是经过肉桂醛处理后，巴西曲霉菌丝皱缩，菌丝隔膜结构裸露，菌丝形态改变，表明细胞壁和细胞膜的完整性和通透性受到破坏，这可能与细胞的渗透失衡有关[127]。继续培养1d后，菌丝数量增长缓慢，生长停滞，堆叠层次少，未完全覆盖培养基表面；在较低倍镜下观察，未见产孢结构或孢子，表明巴西曲霉可能不再具有继续生长繁殖的能力。扫描电镜结果表明，肉桂醛通过破坏菌丝细胞膜，使其菌丝皱缩，生?
【参考文献】：
期刊论文
[1]一株大麻脱胶菌株的分离鉴定及其产果胶酶发酵培养基的优化[J]. 徐鹏,王大红,陈亚欣,王泽轩,王子旭,魏来红,刘高. 中国麻业科学. 2019(03)
[2]贮存条件对肉桂叶精油中各微量成分相对含量的影响（Ⅰ）——萜类化合物[J]. 张笮晦,童永清,黄广智,邓家刚,沈芳. 大众科技. 2019(02)
[3]复凝聚法制备精油微胶囊的研究进展[J]. 许琳琳,郑文静,刘磊,李思佳,崔媛媛,刘容,孙卫东. 中国调味品. 2018(07)
[4]驱蚊防霉粉刷石膏的制备及性能评价[J]. 余洋,杨昌炎,周盼,吴锦胜,虞希,丁一刚. 化学与生物工程. 2018(04)
[5]牛津杯法测定抗菌肽对四种有害微生物的抑制效果[J]. 周芳,熊海涛,张江,柳永刚,宋凯. 饲料工业. 2018(06)
[6]壁材对香草兰精油微胶囊物性与释放特性的影响[J]. 刘双双,那治国,徐飞,初众,张彦军. 食品科学. 2019(03)
[7]柚子精油提取、成分、贮藏及应用研究进展[J]. 陈峰,孙浩,倪辉,洪鹏,李丽君,杨远帆,姜泽东. 食品科学技术学报. 2018(01)
[8]竹粉热处理改善竹粉/聚丙烯复合材料的防霉性能[J]. 周吓星,苏国基,陈礼辉. 农业工程学报. 2017(24)
[9]氧化单宁酸提高含猪血浆蛋白水解物的乳状液物理稳定性[J]. 陈益春,刘骞,姜帅,曹传爱,张欢,孔保华. 食品科学. 2018(18)
[10]黑曲霉发酵法制备米糠粕可溶性膳食纤维工艺优化及其理化分析[J]. 闵钟熳,高路,高育哲,徐彩红,邓雪雪,肖志刚. 食品科学. 2018(02)
博士论文
[1]玉米醇溶蛋白-单宁酸复合颗粒对界面主导食品体系的调控研究[D]. 邹苑.华南理工大学 2018
[2]多酚脂质体的物化稳定性及生理活性研究[D]. 邹立强.南昌大学 2015
硕士论文
[1]肉桂醛脂质体及其壳聚糖修饰物的制备与抑菌性研究[D]. 成方圆.江南大学 2018
[2]微胶囊化复合精油对大米抑菌效果研究[D]. 唐雅珂.中南林业科技大学 2016
[3]烟草花蕾精油的提取、生物活性及其应用研究[D]. 李萌姗.郑州轻工业学院 2016
[4]冷水分散型粉末油脂的制备及其性质研究[D]. 史昫皓.江南大学 2015
[5]谷胱甘肽的复合凝聚微胶囊化技术研究[D]. 杜歌.江南大学 2015
[6]肉桂精油微胶囊的制备及其抑菌效果研究[D]. 赵瑞鹏.上海应用技术学院 2015
[7]挥发性植物精油抑制赭曲霉生长及产毒的研究[D]. 滑慧娟.中国农业科学院 2015
[8]百里香微胶囊制备及抑菌效果和机理研究[D]. 申莉莉.华中农业大学 2015
[9]烟支霉变微生物的鉴定及生物特性研究[D]. 王儒.华南理工大学 2015
[10]一种复合微生态制剂的制备及在仔猪生产上的初步应用[D]. 温灿权.福建农林大学 2015
本文编号：3495957
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
5株卷烟霉变微生物琼脂糖凝胶电泳结果
M13 链格孢属 — — — M14 链格孢属 — — — M15 链格孢属 — — — 将 15 株卷烟霉变微生物测试所得 18SrDNA-ITS 序列构建系统发育树。通过 MEGA，采用邻位相连法（NJ，Neighbor-joining）[100]进行进化距离分析，运用 Bootstrap 对系统树进行检验，重复 1000 次[101]。15 株卷烟霉变微生物系统进化树构建结果如图 3-3 所示。由实验结果可知，15 株卷烟霉变微生物的 ITS 序列聚为 5 个分支，划分为青霉属、枝孢属、链格孢属和 2 个曲霉属分支。相同属的进化关系较近，以较高的支持率聚在同一分支，巴西曲霉和黄曲霉与青霉属的同源性较近，可能来源于相距较近的类群。
3结果与讨论293.3.3典型精油活性成分对菌丝形态变化的影响为了观察典型精油活性成分之一的肉桂醛对巴西曲霉菌丝形态的影响，将生长对数期的霉菌菌丝经过肉桂醛（1.5×MIC）抑菌处理，继续生长1d后，通过扫描电子显微镜观察，结果如图3-8所示。图3-8肉桂醛处理前后菌丝生长状况扫描电镜照片（A）、（B）、（C）、（D）为正常生长的巴西曲霉菌丝，（E）、（F）、（G）、（H）为经过1.5×MIC肉桂醛处理过的巴西曲霉菌丝，标尺分别为100.0μm、50.0μm、20.0μm和10.0μmFig.3-8Scanningelectronmicrographofmycelialbeforeandaftercinnamaldehydetreatment.(A),(B),(C),(D)NormalgrowthofhyphaeofAspergillusbrasiliensiswithscalesof100.0μm,50.0μm,20.0μm,10.0μmrespectively;(E),(F),(G),(H)HyphaeofAspergillusbrasiliensistreatedby1.5×MICcinnamaldehydewithscalesof100.0μm,50.0μm,20.0μm,10.0μmrespectively.由图3-8可知，未经肉桂醛抑菌处理的霉菌菌丝菌丝较挺直，具有一定的支撑能力，细胞膜表面完整、光滑；继续培养1d后霉菌菌丝生长快速且茂密，堆叠层次多，电镜观察下景深更深，表明巴西曲霉生长适应力好、繁殖快、致霉性强；在较低倍镜下观察，可见有完整的产孢结构和部分孢子，具有继续生长繁殖的能力。但是经过肉桂醛处理后，巴西曲霉菌丝皱缩，菌丝隔膜结构裸露，菌丝形态改变，表明细胞壁和细胞膜的完整性和通透性受到破坏，这可能与细胞的渗透失衡有关[127]。继续培养1d后，菌丝数量增长缓慢，生长停滞，堆叠层次少，未完全覆盖培养基表面；在较低倍镜下观察，未见产孢结构或孢子，表明巴西曲霉可能不再具有继续生长繁殖的能力。扫描电镜结果表明，肉桂醛通过破坏菌丝细胞膜，使其菌丝皱缩，生?
【参考文献】：
期刊论文
[1]一株大麻脱胶菌株的分离鉴定及其产果胶酶发酵培养基的优化[J]. 徐鹏,王大红,陈亚欣,王泽轩,王子旭,魏来红,刘高. 中国麻业科学. 2019(03)
[2]贮存条件对肉桂叶精油中各微量成分相对含量的影响（Ⅰ）——萜类化合物[J]. 张笮晦,童永清,黄广智,邓家刚,沈芳. 大众科技. 2019(02)
[3]复凝聚法制备精油微胶囊的研究进展[J]. 许琳琳,郑文静,刘磊,李思佳,崔媛媛,刘容,孙卫东. 中国调味品. 2018(07)
[4]驱蚊防霉粉刷石膏的制备及性能评价[J]. 余洋,杨昌炎,周盼,吴锦胜,虞希,丁一刚. 化学与生物工程. 2018(04)
[5]牛津杯法测定抗菌肽对四种有害微生物的抑制效果[J]. 周芳,熊海涛,张江,柳永刚,宋凯. 饲料工业. 2018(06)
[6]壁材对香草兰精油微胶囊物性与释放特性的影响[J]. 刘双双,那治国,徐飞,初众,张彦军. 食品科学. 2019(03)
[7]柚子精油提取、成分、贮藏及应用研究进展[J]. 陈峰,孙浩,倪辉,洪鹏,李丽君,杨远帆,姜泽东. 食品科学技术学报. 2018(01)
[8]竹粉热处理改善竹粉/聚丙烯复合材料的防霉性能[J]. 周吓星,苏国基,陈礼辉. 农业工程学报. 2017(24)
[9]氧化单宁酸提高含猪血浆蛋白水解物的乳状液物理稳定性[J]. 陈益春,刘骞,姜帅,曹传爱,张欢,孔保华. 食品科学. 2018(18)
[10]黑曲霉发酵法制备米糠粕可溶性膳食纤维工艺优化及其理化分析[J]. 闵钟熳,高路,高育哲,徐彩红,邓雪雪,肖志刚. 食品科学. 2018(02)
博士论文
[1]玉米醇溶蛋白-单宁酸复合颗粒对界面主导食品体系的调控研究[D]. 邹苑.华南理工大学 2018
[2]多酚脂质体的物化稳定性及生理活性研究[D]. 邹立强.南昌大学 2015
硕士论文
[1]肉桂醛脂质体及其壳聚糖修饰物的制备与抑菌性研究[D]. 成方圆.江南大学 2018
[2]微胶囊化复合精油对大米抑菌效果研究[D]. 唐雅珂.中南林业科技大学 2016
[3]烟草花蕾精油的提取、生物活性及其应用研究[D]. 李萌姗.郑州轻工业学院 2016
[4]冷水分散型粉末油脂的制备及其性质研究[D]. 史昫皓.江南大学 2015
[5]谷胱甘肽的复合凝聚微胶囊化技术研究[D]. 杜歌.江南大学 2015
[6]肉桂精油微胶囊的制备及其抑菌效果研究[D]. 赵瑞鹏.上海应用技术学院 2015
[7]挥发性植物精油抑制赭曲霉生长及产毒的研究[D]. 滑慧娟.中国农业科学院 2015
[8]百里香微胶囊制备及抑菌效果和机理研究[D]. 申莉莉.华中农业大学 2015
[9]烟支霉变微生物的鉴定及生物特性研究[D]. 王儒.华南理工大学 2015
[10]一种复合微生态制剂的制备及在仔猪生产上的初步应用[D]. 温灿权.福建农林大学 2015
本文编号：3495957
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