复合益生菌发酵全豆豆乳的研制及预防高脂饮食诱导C57BL/6小鼠高血脂症的研究
发布时间：2021-11-20 12:30
发酵豆乳的主要成分是豆乳和益生菌,它兼备大豆和益生菌的保健作用。本研究在单因素试验的基础上,通过响应面法优化益生菌发酵豆乳的工艺流程,同时比较有无豆皮发酵豆乳在理化指标、抗氧化能力及储存稳定性等方面的异同。由于发酵豆乳中益生菌的比例对产品风味和品质有很大程度的影响,本研究进一步建立了快速检测发酵豆乳中两种益生菌(植物乳杆菌Lactobacillus plantarum H6、副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei Y12)比例的实时定量聚合酶链式反应（real time polymerase chain reaction RT-RCR）法。此方法根据植物乳杆菌、副干酪乳杆菌保守区域设计特异性引物与探针,对建立的RT-PCR法进行特异性、灵敏度、重复性验证,最后结果与国标法进行比较。为验证发酵豆乳预防高血脂症的效果,本研究进一步进行了小鼠实验。将C57BL/6小鼠随机分为高脂饮食组、正常组、益生菌干预组、发酵豆乳干预组,饲喂8周。通过检测小鼠体重改变、内脏脂肪变化、体内脂质水平和肝脏指标变化、肝脏细胞形态、肠道菌群等方面判断...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
有豆皮(a)(c)和无豆皮(b)(d)发酵豆乳密封保存1d(a)(b)及21d(c)(d)的外观比较
22皿。稀释液移入平皿后，将冷却至48℃的(man,rogosaandSharpMRS)琼脂培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使混合均匀。36℃±1℃厌氧培养72h±2h。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。稀释液的制备：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分振摇，制成1:10的样品匀液。同理可用此方法继续稀释。2.4实验结果2.4.1引物设计表2-7为两种乳酸菌的引物，利用此引物对对应的DNA进行常规PCR扩增均出现明显条带(图2-1）。表2-7植物乳杆菌和副干酪乳杆菌的引物Table2-7PrimersofL.plantarumandL.paracasei目的基因引物5’-3’LactobacillusplantarumL.plantarum-RAGGTGTTATCCCCCGCTTCTL.plantarum-FTTACATTTGAGTGAGTGGCGAACTLactobacillusparacaseiL.paracasei-FTCCGGGAACTGCTCAGCL.paracasei-RTGTTTCACGAACAGGTG图2-1两株乳酸菌DNA的PCR扩增凝胶电泳图Fig2-1GelelectrophoresisofPCRamplificationofDNAoftwolacticacidbacteriastrains2.4.2实时荧光定量方法特异性的研究以标准菌株的引物对标准菌株及其他9株乳酸菌进行PCR试验，对得出的PCR产物进行凝胶电泳实验，结果如图2-2所示，只有标准菌株出现明显条带，其余菌株均无明显条带。图2-3为两种标准菌株引物的特异性的结果，图中出现明显扩增，含有标准菌株的豆乳也出现了扩增但与标准菌株不相似，同时两种菌株的熔解曲线（图2-4）都只出现了单峰，表明两种引物的特异性高[36]。
23图2-2标准菌株及9菌乳酸菌DNA的PCR凝胶电泳图。1为鼠李糖乳杆菌(Y1)，2为嗜酸乳杆菌(Y2)，3为罗伊氏乳杆菌(Y15)，4为德氏乳杆菌(Y18)，5为清酒乳杆菌(K5)，6为类肠膜魏斯氏菌(K6)，7为发酵乳杆菌(F5)，8为肠膜明串珠菌(F6)，9为沙克乳酸杆菌(E7)，10为植物乳杆菌(H6)，11为副干酪乳杆菌(Y12)Fig.2-2PCRgelelectrophoresisofstandardstrainand9strainlacticacidbacteriaDNA.1isLactobacillusrhamnosus(Y1),2isLactobacillusacidophilus(Y2),3isLactobacillusreuteri(Y15),4isLactobacillusdelbrueckii(Y18),5isLactobacillussake(K5),6isWeissellaenteritidis(K6),7isLactobacillusfermentans(F5),8isLeuconostocenterica(F6),9isLactobacillusshack(E7),10isLactobacillusplantarum(H6),11isLactobacillusparacasei(Y12).AB图2-3植物乳杆菌A、副干酪乳杆菌B实时荧光定量PCR的扩增曲线Fig2-3AmplificationcurvesofLactobacillusplantarumAandLactobacillusparacaseiBreal-timefluorescencequantitativePCR
【参考文献】：
期刊论文
[1]云南乳饼中乳酸菌的筛选及其功能活性[J]. 刘江,程群,王振兴,孙健,何雪梅,刘大群,周贵七,熊智,张雪春. 食品与发酵工业. 2020(04)
[2]葡萄蚕豆萎蔫病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法及应用[J]. 张梦妍,张尊平,任芳,胡国君,范旭东,董雅凤. 园艺学报. 2020(01)
[3]多重实时荧光定量PCR对下呼吸道感染病原体检测分析[J]. 刘馨玉,李萌,石璞玉,陈明伟. 中华肺部疾病杂志(电子版). 2019(05)
[4]实时荧光定量PCR技术检测腐乳中大豆转基因成分[J]. 许银叶,许佩勤,庄俊钰,冯志强. 江苏调味副食品. 2019(02)
[5]乳酸菌在豆乳中的生长特性及其与酵母菌联合发酵作用[J]. 王龄焓,陈辰,万洋灵,郭顺堂. 食品工业科技. 2019(19)
[6]荧光定量PCR检测原料乳中粘质沙雷氏菌[J]. 姜鸿瑞,韩紫音,夏海磊,王梦琦,冀德君,毛永江,杨章平,张慧敏. 中国奶牛. 2019(05)
[7]利用实时荧光定量PCR法检测食品中鹌鹑源性成分[J]. 罗建兴,海小,刘国强,郭梁,徐伟良,李春冬. 食品研究与开发. 2019(03)
[8]番茄细菌性斑点病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 柴阿丽,帕提古丽,郭威涛,石延霞,谢学文,席先梅,李宝聚. 园艺学报. 2019(01)
[9]关于荧光定量关于荧光定量PCR在预测微生物学中的运用分析[J]. 韦兰芳. 现代农业研究. 2019(01)
[10]实时荧光定量PCR技术的原理及其应用[J]. 安钢力. 中国现代教育装备. 2018(21)
本文编号：3507328
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
有豆皮(a)(c)和无豆皮(b)(d)发酵豆乳密封保存1d(a)(b)及21d(c)(d)的外观比较
22皿。稀释液移入平皿后，将冷却至48℃的(man,rogosaandSharpMRS)琼脂培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使混合均匀。36℃±1℃厌氧培养72h±2h。从样品稀释到平板倾注要求在15min内完成。稀释液的制备：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分振摇，制成1:10的样品匀液。同理可用此方法继续稀释。2.4实验结果2.4.1引物设计表2-7为两种乳酸菌的引物，利用此引物对对应的DNA进行常规PCR扩增均出现明显条带(图2-1）。表2-7植物乳杆菌和副干酪乳杆菌的引物Table2-7PrimersofL.plantarumandL.paracasei目的基因引物5’-3’LactobacillusplantarumL.plantarum-RAGGTGTTATCCCCCGCTTCTL.plantarum-FTTACATTTGAGTGAGTGGCGAACTLactobacillusparacaseiL.paracasei-FTCCGGGAACTGCTCAGCL.paracasei-RTGTTTCACGAACAGGTG图2-1两株乳酸菌DNA的PCR扩增凝胶电泳图Fig2-1GelelectrophoresisofPCRamplificationofDNAoftwolacticacidbacteriastrains2.4.2实时荧光定量方法特异性的研究以标准菌株的引物对标准菌株及其他9株乳酸菌进行PCR试验，对得出的PCR产物进行凝胶电泳实验，结果如图2-2所示，只有标准菌株出现明显条带，其余菌株均无明显条带。图2-3为两种标准菌株引物的特异性的结果，图中出现明显扩增，含有标准菌株的豆乳也出现了扩增但与标准菌株不相似，同时两种菌株的熔解曲线（图2-4）都只出现了单峰，表明两种引物的特异性高[36]。
23图2-2标准菌株及9菌乳酸菌DNA的PCR凝胶电泳图。1为鼠李糖乳杆菌(Y1)，2为嗜酸乳杆菌(Y2)，3为罗伊氏乳杆菌(Y15)，4为德氏乳杆菌(Y18)，5为清酒乳杆菌(K5)，6为类肠膜魏斯氏菌(K6)，7为发酵乳杆菌(F5)，8为肠膜明串珠菌(F6)，9为沙克乳酸杆菌(E7)，10为植物乳杆菌(H6)，11为副干酪乳杆菌(Y12)Fig.2-2PCRgelelectrophoresisofstandardstrainand9strainlacticacidbacteriaDNA.1isLactobacillusrhamnosus(Y1),2isLactobacillusacidophilus(Y2),3isLactobacillusreuteri(Y15),4isLactobacillusdelbrueckii(Y18),5isLactobacillussake(K5),6isWeissellaenteritidis(K6),7isLactobacillusfermentans(F5),8isLeuconostocenterica(F6),9isLactobacillusshack(E7),10isLactobacillusplantarum(H6),11isLactobacillusparacasei(Y12).AB图2-3植物乳杆菌A、副干酪乳杆菌B实时荧光定量PCR的扩增曲线Fig2-3AmplificationcurvesofLactobacillusplantarumAandLactobacillusparacaseiBreal-timefluorescencequantitativePCR
【参考文献】：
期刊论文
[1]云南乳饼中乳酸菌的筛选及其功能活性[J]. 刘江,程群,王振兴,孙健,何雪梅,刘大群,周贵七,熊智,张雪春. 食品与发酵工业. 2020(04)
[2]葡萄蚕豆萎蔫病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法及应用[J]. 张梦妍,张尊平,任芳,胡国君,范旭东,董雅凤. 园艺学报. 2020(01)
[3]多重实时荧光定量PCR对下呼吸道感染病原体检测分析[J]. 刘馨玉,李萌,石璞玉,陈明伟. 中华肺部疾病杂志(电子版). 2019(05)
[4]实时荧光定量PCR技术检测腐乳中大豆转基因成分[J]. 许银叶,许佩勤,庄俊钰,冯志强. 江苏调味副食品. 2019(02)
[5]乳酸菌在豆乳中的生长特性及其与酵母菌联合发酵作用[J]. 王龄焓,陈辰,万洋灵,郭顺堂. 食品工业科技. 2019(19)
[6]荧光定量PCR检测原料乳中粘质沙雷氏菌[J]. 姜鸿瑞,韩紫音,夏海磊,王梦琦,冀德君,毛永江,杨章平,张慧敏. 中国奶牛. 2019(05)
[7]利用实时荧光定量PCR法检测食品中鹌鹑源性成分[J]. 罗建兴,海小,刘国强,郭梁,徐伟良,李春冬. 食品研究与开发. 2019(03)
[8]番茄细菌性斑点病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 柴阿丽,帕提古丽,郭威涛,石延霞,谢学文,席先梅,李宝聚. 园艺学报. 2019(01)
[9]关于荧光定量关于荧光定量PCR在预测微生物学中的运用分析[J]. 韦兰芳. 现代农业研究. 2019(01)
[10]实时荧光定量PCR技术的原理及其应用[J]. 安钢力. 中国现代教育装备. 2018(21)
本文编号：3507328
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