鱼类主要过敏原小清蛋白金磁免疫层析试纸条的研制
发布时间：2022-01-11 14:44
鱼类是人类重要的食物来源,不仅味道鲜美而且营养丰富。新鲜鱼肉中富含15%20%的全价蛋白,1%10%的脂肪,并富含重要的不饱和脂肪酸。我国是水产养殖大国,占世界养殖水产品产量的70%以上,淡水渔业总面积达1760万公顷占国土面积的1.8%。鱼类及其制品含有丰富的营养,同时也是FAO及WHO认定的导致人类过敏的八大类食物之一。其中鱼肉中的小清蛋白（parvalbumin,PV）被视为主要的过敏原,因此开展针对鱼类及其制品中小清蛋白强特异性、高灵敏度的检测具有重要的理论和现实意义。本文研究主要包括小清蛋白单克隆抗体的制备及鉴定、金磁复合纳米微粒的制备以及小清蛋白金磁免疫层析检测方法的建立。具体研究内容如下:1.小清蛋白单克隆抗体的制备以高纯度的PV免疫7只BALB/c小鼠,利用间接ELISA方法测小鼠抗血清效价,获取效价最高的小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,获得杂交瘤细胞。间接ELISA方法筛选阳性孔,有限稀释法进行3次亚克隆得到分泌同质的杂交瘤细胞株。采用小鼠体内诱生腹水法大量制备单抗。采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单抗...
【文章来源】：上海师范大学上海市
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小青蛋白金磁性免疫层析试纸的研究内容
图 2-1 小鼠抗血清效价分析图 2-1 中的结果显示，在第六次免疫后，3 号和 5 号小鼠的抗血清效价为28000，免疫效果良好。根据细胞融合实验的要求，使用 3 号小鼠的脾细胞为细胞融合材料，使用 5 号小鼠的脾细胞作为备选。.4.2 杂交瘤细胞融合和阳性孔制备在 5 块板中有细胞团生长的孔数为 425，融合率为 88.5%。经过两次换液养，融合第 9 天取细胞上清检测阳性孔，100μL/孔，用间接 ELISA 法检测到，小清蛋白融合细胞板中有 21 个阳性孔，在细胞板中 21 个阳性孔中挑长势良好的 5 个强阳性孔（OD450> 1.3）进行亚克。经过三次亚克隆和筛后，筛选出三个具有强阳性结果和良好生长的杂交瘤细胞，命名为 2A1，C3 和 3C3。亚克隆的目的是纯化细胞，在亚克隆过程中，应尽可能选择单细胞克隆组的孔。最后选择的细胞系可以是满足要求的纯细胞。此外，当细胞板中检测到强阳性孔时，应尽快进行亚克隆以筛选细胞。以避免阳性
图 2-2 小清蛋白单克隆抗体效价分析2.4.4 腹水的纯化及鉴定为了获得小清蛋白单克隆抗体，必须浓缩和纯化小鼠的腹水。鉴定纯化腹水纯度的方法是 SDS-PAGE，单克隆抗体浓度鉴定结果如图所示。轻链蛋白的分子量约为 26KD。重链及轻链清晰可见，且图中并未见多余杂条带的出现，这就说明了该单克隆抗体纯度很高，为后续的免疫层析检测打好了基础。M 1 2 3Heave chain
【参考文献】：
期刊论文
[1]大豆蛋白源替代鱼粉蛋白对鱼类生长、消化及肠道组织的影响[J]. 段晶,王婧瑶,吴莉芳,瞿子惠,周锴,杨兰,王桂芹. 大豆科学. 2018(03)
[2]食物过敏的致敏途径及发生机制的研究进展[J]. 王东明,左媛媛,何翔,张慧敏. 中国中西医结合皮肤性病学杂志. 2017(05)
[3]食物过敏研究新动态[J]. 陈红兵. 食品安全质量检测学报. 2017(04)
[4]海鲈鱼鱼肉发酵过程中小清蛋白IgE结合能力的变化[J]. 高卿,李振兴,米娜莎,林洪,吕良涛,张延杰. 食品科学. 2017(22)
[5]日本食物过敏原的管理及对我国的启示[J]. 郑颖,陈曙光,叶钰,方卿颖,陈红兵,高金燕. 食品科学. 2016(03)
[6]中国食品过敏原标识认知状况分析[J]. 闫瑞,李坤,程景民,郝志媛. 中国公共卫生. 2016(02)
[7]常见食物过敏原结构稳定因素与致敏性的关系研究进展[J]. 张晴晴,吴子健,胡志和,王帅,王连芬. 食品科学. 2015(03)
[8]泛素连接酶和小清蛋白在脑性瘫痪小鼠模型海马组织中的表达及其意义[J]. 秦明,胡莹莹,魏云艳,朱虹,王德广. 神经解剖学杂志. 2015(01)
[9]运动疲劳对大鼠黑质网状部小清蛋白表达的影响[J]. 孙丽娜. 体育科技文献通报. 2014(06)
[10]免疫学技术在食品过敏原检测中的应用[J]. 胡骁飞,王耀,邓瑞广,张改平. 食品科学. 2014(08)
博士论文
[1]水产品中危害物胶体金免疫层析毛细管检测技术的研究[D]. 杜淑媛.中国海洋大学 2015
硕士论文
[1]消费者食品过敏原标签的认知现状与对策研究[D]. 闫瑞.山西医科大学 2016
[2]基于金磁微粒的核酸纯化新方法[D]. 刘蓓.西北大学 2008
[3]小清蛋白在孤独症模型大鼠情绪与认知相关脑区的表达及其发育研究[D]. 王维霞.复旦大学 2008
[4]多种食品过敏原体外快速检测技术的研究[D]. 张在军.暨南大学 2005
本文编号：3582963
【文章来源】：上海师范大学上海市
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小青蛋白金磁性免疫层析试纸的研究内容
图 2-1 小鼠抗血清效价分析图 2-1 中的结果显示，在第六次免疫后，3 号和 5 号小鼠的抗血清效价为28000，免疫效果良好。根据细胞融合实验的要求，使用 3 号小鼠的脾细胞为细胞融合材料，使用 5 号小鼠的脾细胞作为备选。.4.2 杂交瘤细胞融合和阳性孔制备在 5 块板中有细胞团生长的孔数为 425，融合率为 88.5%。经过两次换液养，融合第 9 天取细胞上清检测阳性孔，100μL/孔，用间接 ELISA 法检测到，小清蛋白融合细胞板中有 21 个阳性孔，在细胞板中 21 个阳性孔中挑长势良好的 5 个强阳性孔（OD450> 1.3）进行亚克。经过三次亚克隆和筛后，筛选出三个具有强阳性结果和良好生长的杂交瘤细胞，命名为 2A1，C3 和 3C3。亚克隆的目的是纯化细胞，在亚克隆过程中，应尽可能选择单细胞克隆组的孔。最后选择的细胞系可以是满足要求的纯细胞。此外，当细胞板中检测到强阳性孔时，应尽快进行亚克隆以筛选细胞。以避免阳性
图 2-2 小清蛋白单克隆抗体效价分析2.4.4 腹水的纯化及鉴定为了获得小清蛋白单克隆抗体，必须浓缩和纯化小鼠的腹水。鉴定纯化腹水纯度的方法是 SDS-PAGE，单克隆抗体浓度鉴定结果如图所示。轻链蛋白的分子量约为 26KD。重链及轻链清晰可见，且图中并未见多余杂条带的出现，这就说明了该单克隆抗体纯度很高，为后续的免疫层析检测打好了基础。M 1 2 3Heave chain
【参考文献】：
期刊论文
[1]大豆蛋白源替代鱼粉蛋白对鱼类生长、消化及肠道组织的影响[J]. 段晶,王婧瑶,吴莉芳,瞿子惠,周锴,杨兰,王桂芹. 大豆科学. 2018(03)
[2]食物过敏的致敏途径及发生机制的研究进展[J]. 王东明,左媛媛,何翔,张慧敏. 中国中西医结合皮肤性病学杂志. 2017(05)
[3]食物过敏研究新动态[J]. 陈红兵. 食品安全质量检测学报. 2017(04)
[4]海鲈鱼鱼肉发酵过程中小清蛋白IgE结合能力的变化[J]. 高卿,李振兴,米娜莎,林洪,吕良涛,张延杰. 食品科学. 2017(22)
[5]日本食物过敏原的管理及对我国的启示[J]. 郑颖,陈曙光,叶钰,方卿颖,陈红兵,高金燕. 食品科学. 2016(03)
[6]中国食品过敏原标识认知状况分析[J]. 闫瑞,李坤,程景民,郝志媛. 中国公共卫生. 2016(02)
[7]常见食物过敏原结构稳定因素与致敏性的关系研究进展[J]. 张晴晴,吴子健,胡志和,王帅,王连芬. 食品科学. 2015(03)
[8]泛素连接酶和小清蛋白在脑性瘫痪小鼠模型海马组织中的表达及其意义[J]. 秦明,胡莹莹,魏云艳,朱虹,王德广. 神经解剖学杂志. 2015(01)
[9]运动疲劳对大鼠黑质网状部小清蛋白表达的影响[J]. 孙丽娜. 体育科技文献通报. 2014(06)
[10]免疫学技术在食品过敏原检测中的应用[J]. 胡骁飞,王耀,邓瑞广,张改平. 食品科学. 2014(08)
博士论文
[1]水产品中危害物胶体金免疫层析毛细管检测技术的研究[D]. 杜淑媛.中国海洋大学 2015
硕士论文
[1]消费者食品过敏原标签的认知现状与对策研究[D]. 闫瑞.山西医科大学 2016
[2]基于金磁微粒的核酸纯化新方法[D]. 刘蓓.西北大学 2008
[3]小清蛋白在孤独症模型大鼠情绪与认知相关脑区的表达及其发育研究[D]. 王维霞.复旦大学 2008
[4]多种食品过敏原体外快速检测技术的研究[D]. 张在军.暨南大学 2005
本文编号：3582963
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