桑叶1-脱氧野尻霉素分离及其与糖苷类物质协同降糖作用
发布时间：2022-01-25 04:59
高脂膳食以及运动的缺乏极易引发2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）,T2DM是一种慢性的代谢性疾病,无法从根本上得到治疗。血糖水平的控制是一个长期的用药过程,而目前的降糖药物作用途径比较单一,长期使用容易出现脏器损伤、腹胀等不良反应,因此本研究从降糖效果出发,研究药食同源天然产物的联合降糖效果及作用机制。本研究以桑叶1-脱氧野尻霉素（1-Deoxynojirimycin,DNJ）,红景天苷（Salidroside）和山药多糖（Polysaccharide）三种天然产物以1:1:1的质量比进行小鼠实验,研究该降糖受试物（DSP）对糖尿病小鼠血糖水平的调节能力,探究DSP对糖脂代谢的作用机制。通过响应面法优化桑叶中DNJ的最佳提取工艺条件为,在p H值为3的60%乙醇溶液中,以1:24的料液比在350 W,60℃下超声50 min的DNJ得率最高,为11.4 mg/g。为提高DNJ的纯度,进行了纯化单因素实验,优化得到最佳纯化工艺条件为,在纯化介质为HPD400大孔树脂下,以径长比1:15,上样浓度2.5 mg/m L,上样量20 m L,80%乙醇溶液...
【文章来源】：哈尔滨工业大学黑龙江省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：102 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
型糖尿病的复杂发病机制[29]
?鹧字⒎从Γ?谄すδ苷习?┖推咸烟悄土渴芩穑ˋbnormalglucosetolerance，IGT），进而导致胰岛素抵抗（葡萄糖利用率降低）[30]。在IGT期间，各种胰岛素信号通路基因/蛋白均会受到不同程度的影响，从而降低机体外周组织葡萄糖的利用能力，最终导致高血糖，高血脂和T2DM[24]。T2DM患病期间，自身的胰岛素活性受损（胰岛素缺乏）会引发多种代谢紊乱，例如糖代谢异常（外周组织摄取葡萄糖减少，糖酵解和糖异生增加），脂代谢紊乱（脂解作用增加，脂肪生成减少）以及蛋白质代谢失衡（蛋白质分解过多，肌肉减少）[31]。图1-2胰岛素抵抗和胰岛β细胞受损间的关系[32]Fig.1-2Therelationshipbetweeninsulinresistanceandβ-cellfailure胰岛素作为体内唯一的降血糖激素，对机体的碳水化合物等三大营养物质具有调控作用，可以影响糖脂代谢的相关器官。在调节糖代谢过程中，胰岛素的作用有两个：①促进机体利用外源性葡萄糖，促进细胞对血液中葡萄糖的吸收；诱导肝细胞中葡萄糖激酶的合成，使进入细胞的葡萄糖加速磷酸化；诱导6-磷酸果糖激酶-1或者丙酮酸激酶的合成，增加糖酵解；使磷酸激酶激活，促进葡萄糖氧化；②减少机体内源性葡萄糖增多，促进葡萄糖转化合成糖原，减少糖异生与糖原的分解。胰岛素在胞内的传递主要是胰岛素先与全身各组织细胞膜受体糖蛋白结合，激活受体β-亚基的酪氨酸，使其插入膜内区域的酪氨酸残基至少有5个磷酸化，进而提高细胞质内酪氨酸激酶的活性，胰岛素受体底物的酪氨酸发生磷酸化后会激活磷脂酰肌醇-3激酶（Phosphatidylinositol-3-kinases，PI3K），将葡萄糖转运子4转位
哈尔滨工业大学工学硕士学位论文-24-2h后离心，对上清液通过旋转蒸发进行浓缩，旋蒸温度不超过55℃；将浓缩液与无水乙醇按照1:4（V/V）在4℃冰箱中静置12h；收集沉淀物，依次用无水乙醇、丙酮洗涤，离心；用去离子水溶解沉淀，得粗多糖溶液；按照氯仿:正丁醇:多糖=10:2:3的比例除去粗多糖中的蛋白质进行纯化，离心后上层为多糖，中部为乳蛋白，下部为氯仿正丁醇，用移液管收集上层多糖；在离心管中加入无水乙醇（多糖:无水乙醇=1:4），振荡10min，离心，弃上清，沉淀为CYP，冷冻干燥后密封，避光备用。将1-脱氧野尻霉素（1-Deoxynojirimycin），红景天苷（Salidroside），山药多糖（Polysaccharide）按照1:1:1进行配比作为受试物（DSP）进行小鼠实验，通过体内动物实验研究DSP对高脂膳食联合链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的降糖效果以及作用机制。2.4基于2型糖尿病小鼠模型研究受试物降糖效果及作用机制2.4.1实验动物分组及饲养购买4周龄二级清洁级雄性KM小鼠（22g~24g）60只，动物实验过程中严格遵守《实验动物管理条例》。所有小鼠均饲养在温度（23±1）℃、12h光/暗循环的实验室里，自由进食饮水。将小鼠随机分成6组：空白组（Normalcontrolgroup，NC组）、模型组（Diabetescontrolgroup，DC组）、二甲双胍阳性对照组（Metforminpositivecontrolgroup，Met组），DSP受试物低剂量干预组（L-DSP组）、中剂量干预组（M-DSP组）和高剂量干预组（H-DSP组）。设计方案见图2-1。图2-1动物实验设计方案Fig.2-1Animalexperimentaldesign
【参考文献】：
期刊论文
[1]高效液相色谱法测定降糖型保健食品中的1-脱氧野尻霉素[J]. 陈蓓,李放,刘华良,吉文亮. 食品安全质量检测学报. 2018(22)
[2]药食同源类植物多糖降血糖功效的研究进展[J]. 张晓寒,张程慧,于文睿,薛婉茹,佟彤,孙嘉璘,冯叙桥. 食品安全质量检测学报. 2018(14)
[3]红景天苷对糖尿病大鼠血糖血脂及胰岛素代谢的影响[J]. 高静媛,杨雨旸,王志文. 中国煤炭工业医学杂志. 2017(04)
[4]大孔吸附树脂分离纯化生物碱类化合物研究进展[J]. 季慧,陈斌斌,黄越燕. 亚太传统医药. 2017(01)
[5]山楂多糖药理作用和提取工艺研究进展[J]. 吕玲霞,辛立红,管仁伟,路俊仙,王萌,郭瑞齐,胡春苗,林慧彬. 药物评价研究. 2016(06)
[6]2型糖尿病胰岛素与胰岛素抵抗信号转导通路研究进展[J]. 周方圆,杨宇峰,石岩. 辽宁中医药大学学报. 2016(11)
[7]Phytochemistry,pharmacology,and clinical trials of Morus alba[J]. Eric Wei-Chiang CHAN,Phui-Yan LYE,Siu-Kuin WONG. Chinese Journal of Natural Medicines. 2016(01)
[8]基于糖代谢信号通路的中药活性成分抗2型糖尿病研究进展[J]. 吕小龙,周文,王晖,冯英巧,陈垦. 时珍国医国药. 2015(05)
[9]桑枝提取物中1-脱氧野尻霉素的稳定性研究[J]. 刘超,徐立,刘静,郑曼. 食品科学. 2014(23)
[10]Chou-Talalay在抗肿瘤联合用药中的研究应用概况[J]. 王士群,朱宇珍,郑学宝. 中国现代应用药学. 2013(04)
博士论文
[1]木蝴蝶黄酮改善糖尿病鼠糖代谢的肠道机制研究[D]. 张博崴.大连理工大学 2018
[2]西洋参改善IR的作用及其机制研究[D]. 盛波.黑龙江中医药大学 2008
硕士论文
[1]EGCG、葡萄籽原花青素与二氢杨梅素协同抗氧化及对小鼠乳腺癌4T1细胞的协同抑制作用研究[D]. 张姝萍.浙江大学 2019
[2]条斑紫菜多糖抑制α-淀粉酶特性与降血糖作用[D]. 曾傲琼.江南大学 2018
[3]深色农产品抗氧化协同作用的研究[D]. 蒋海伟.南昌大学 2015
[4]地黄水苏糖对糖尿病小鼠肠道菌群的影响[D]. 王露.北京协和医学院 2013
[5]桑叶中DNJ分离纯化及含量测定的研究[D]. 杨海霞.浙江大学 2003
本文编号：3607937
【文章来源】：哈尔滨工业大学黑龙江省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：102 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
型糖尿病的复杂发病机制[29]
?鹧字⒎从Γ?谄すδ苷习?┖推咸烟悄土渴芩穑ˋbnormalglucosetolerance，IGT），进而导致胰岛素抵抗（葡萄糖利用率降低）[30]。在IGT期间，各种胰岛素信号通路基因/蛋白均会受到不同程度的影响，从而降低机体外周组织葡萄糖的利用能力，最终导致高血糖，高血脂和T2DM[24]。T2DM患病期间，自身的胰岛素活性受损（胰岛素缺乏）会引发多种代谢紊乱，例如糖代谢异常（外周组织摄取葡萄糖减少，糖酵解和糖异生增加），脂代谢紊乱（脂解作用增加，脂肪生成减少）以及蛋白质代谢失衡（蛋白质分解过多，肌肉减少）[31]。图1-2胰岛素抵抗和胰岛β细胞受损间的关系[32]Fig.1-2Therelationshipbetweeninsulinresistanceandβ-cellfailure胰岛素作为体内唯一的降血糖激素，对机体的碳水化合物等三大营养物质具有调控作用，可以影响糖脂代谢的相关器官。在调节糖代谢过程中，胰岛素的作用有两个：①促进机体利用外源性葡萄糖，促进细胞对血液中葡萄糖的吸收；诱导肝细胞中葡萄糖激酶的合成，使进入细胞的葡萄糖加速磷酸化；诱导6-磷酸果糖激酶-1或者丙酮酸激酶的合成，增加糖酵解；使磷酸激酶激活，促进葡萄糖氧化；②减少机体内源性葡萄糖增多，促进葡萄糖转化合成糖原，减少糖异生与糖原的分解。胰岛素在胞内的传递主要是胰岛素先与全身各组织细胞膜受体糖蛋白结合，激活受体β-亚基的酪氨酸，使其插入膜内区域的酪氨酸残基至少有5个磷酸化，进而提高细胞质内酪氨酸激酶的活性，胰岛素受体底物的酪氨酸发生磷酸化后会激活磷脂酰肌醇-3激酶（Phosphatidylinositol-3-kinases，PI3K），将葡萄糖转运子4转位
哈尔滨工业大学工学硕士学位论文-24-2h后离心，对上清液通过旋转蒸发进行浓缩，旋蒸温度不超过55℃；将浓缩液与无水乙醇按照1:4（V/V）在4℃冰箱中静置12h；收集沉淀物，依次用无水乙醇、丙酮洗涤，离心；用去离子水溶解沉淀，得粗多糖溶液；按照氯仿:正丁醇:多糖=10:2:3的比例除去粗多糖中的蛋白质进行纯化，离心后上层为多糖，中部为乳蛋白，下部为氯仿正丁醇，用移液管收集上层多糖；在离心管中加入无水乙醇（多糖:无水乙醇=1:4），振荡10min，离心，弃上清，沉淀为CYP，冷冻干燥后密封，避光备用。将1-脱氧野尻霉素（1-Deoxynojirimycin），红景天苷（Salidroside），山药多糖（Polysaccharide）按照1:1:1进行配比作为受试物（DSP）进行小鼠实验，通过体内动物实验研究DSP对高脂膳食联合链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的降糖效果以及作用机制。2.4基于2型糖尿病小鼠模型研究受试物降糖效果及作用机制2.4.1实验动物分组及饲养购买4周龄二级清洁级雄性KM小鼠（22g~24g）60只，动物实验过程中严格遵守《实验动物管理条例》。所有小鼠均饲养在温度（23±1）℃、12h光/暗循环的实验室里，自由进食饮水。将小鼠随机分成6组：空白组（Normalcontrolgroup，NC组）、模型组（Diabetescontrolgroup，DC组）、二甲双胍阳性对照组（Metforminpositivecontrolgroup，Met组），DSP受试物低剂量干预组（L-DSP组）、中剂量干预组（M-DSP组）和高剂量干预组（H-DSP组）。设计方案见图2-1。图2-1动物实验设计方案Fig.2-1Animalexperimentaldesign
【参考文献】：
期刊论文
[1]高效液相色谱法测定降糖型保健食品中的1-脱氧野尻霉素[J]. 陈蓓,李放,刘华良,吉文亮. 食品安全质量检测学报. 2018(22)
[2]药食同源类植物多糖降血糖功效的研究进展[J]. 张晓寒,张程慧,于文睿,薛婉茹,佟彤,孙嘉璘,冯叙桥. 食品安全质量检测学报. 2018(14)
[3]红景天苷对糖尿病大鼠血糖血脂及胰岛素代谢的影响[J]. 高静媛,杨雨旸,王志文. 中国煤炭工业医学杂志. 2017(04)
[4]大孔吸附树脂分离纯化生物碱类化合物研究进展[J]. 季慧,陈斌斌,黄越燕. 亚太传统医药. 2017(01)
[5]山楂多糖药理作用和提取工艺研究进展[J]. 吕玲霞,辛立红,管仁伟,路俊仙,王萌,郭瑞齐,胡春苗,林慧彬. 药物评价研究. 2016(06)
[6]2型糖尿病胰岛素与胰岛素抵抗信号转导通路研究进展[J]. 周方圆,杨宇峰,石岩. 辽宁中医药大学学报. 2016(11)
[7]Phytochemistry,pharmacology,and clinical trials of Morus alba[J]. Eric Wei-Chiang CHAN,Phui-Yan LYE,Siu-Kuin WONG. Chinese Journal of Natural Medicines. 2016(01)
[8]基于糖代谢信号通路的中药活性成分抗2型糖尿病研究进展[J]. 吕小龙,周文,王晖,冯英巧,陈垦. 时珍国医国药. 2015(05)
[9]桑枝提取物中1-脱氧野尻霉素的稳定性研究[J]. 刘超,徐立,刘静,郑曼. 食品科学. 2014(23)
[10]Chou-Talalay在抗肿瘤联合用药中的研究应用概况[J]. 王士群,朱宇珍,郑学宝. 中国现代应用药学. 2013(04)
博士论文
[1]木蝴蝶黄酮改善糖尿病鼠糖代谢的肠道机制研究[D]. 张博崴.大连理工大学 2018
[2]西洋参改善IR的作用及其机制研究[D]. 盛波.黑龙江中医药大学 2008
硕士论文
[1]EGCG、葡萄籽原花青素与二氢杨梅素协同抗氧化及对小鼠乳腺癌4T1细胞的协同抑制作用研究[D]. 张姝萍.浙江大学 2019
[2]条斑紫菜多糖抑制α-淀粉酶特性与降血糖作用[D]. 曾傲琼.江南大学 2018
[3]深色农产品抗氧化协同作用的研究[D]. 蒋海伟.南昌大学 2015
[4]地黄水苏糖对糖尿病小鼠肠道菌群的影响[D]. 王露.北京协和医学院 2013
[5]桑叶中DNJ分离纯化及含量测定的研究[D]. 杨海霞.浙江大学 2003
本文编号：3607937
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