基于Nrf2通路研究番茄红素、叶黄素、绿原酸和飞燕草素的抗氧化相互作用
发布时间：2022-10-08 10:20
植物化学物具有清除活性氧（ROS）的能力,与心血管疾病（CVD）的发病机制有着十分紧密的联系,人们对植物化学物的研究有着极大兴趣。但是,目前对食物中不同植物化学物之间的相互作用关系及其作用机制的研究较少。番茄红素（Lycopene,LY）、叶黄素（Lutein,LU）、绿原酸（Chlorogenic acid,CA）和飞燕草素（Delphinidin,DP）是食品中含量丰富且分布广泛的抗氧化物质,具有抗氧化、抗炎症、降低心血管疾病等多种疾病的发病率等功能。本论文以上述四种天然植物化学物为研究对象,采用ABTS和DPPH两种体外化学实验方法,分析四种植物化学物的体外抗氧化相互作用,采用H2O2诱导H9c2大鼠心肌细胞建立氧化损伤模型,研究四种植物化学物复配前后对H9c2大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用。在此基础上,研究番茄红素和叶黄素的细胞内吸收与降解,并基于Nrf2通路分析植物化学物的抗氧化相互作用机制,为阐明植物化学物抗氧化相互作用机制和开发相应的功能食品提供理论依据。主要研究内容及结果如下:1.以不同摩尔比对四种天然植物化学物（番茄红素、叶黄素、绿原酸和飞燕草素）进行两两复配（1:9...
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
1.1 前言
1.2 植物化学物的抗氧化活性及功能
1.2.1 类胡萝卜素
1.2.2 酚类化合物
1.2.3 其他植物化学物
1.3 植物化学物的相互作用
1.4 抗氧化系统机制的概述
1.4.1 通过直接清除自由基发挥抗氧化作用
1.4.2 通过激活体内固有的抗氧化系统发挥抗氧化作用
1.5 课题研究的来源、意义及主要内容
1.5.1 课题来源
1.5.2 研究价值及意义
1.6 创新点
1.7 主要研究内容
第2章 番茄红素、叶黄素、绿原酸和飞燕草素的体外抗氧化相互作用
2.1 引言
2.2 试验材料与设备
2.2.1 材料与试剂
2.2.2 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 ABTS自由基清除能力测定
2.3.2 DPPH自由基清除能力测定
2.3.3 数据处理
2.4 结果与分析
2.4.1 四种植物化学物的ABTS自由基清除能力
2.4.2 ABTS法中四种植物化学物的抗氧化相互作用关系
2.4.3 四种植物化学物的DPPH自由基清除能力
2.4.4 DPPH法中四种植物化学物的抗氧化相互作用关系
2.4.5 等辐射分析法评价天然产物间抗氧化相互作用关系
2.5 讨论
2.5.1 等辐射分析法可以快速直观的判断植物化学物的抗氧化相互作用
2.5.2 两种物质以不同比例混合后抗氧化相互作用可能具有较大差异
2.5.3 DPPH法和ABTS法测定四种植物化学物结果存在差异
2.6 小结
第3章 番茄红素、叶黄素、绿原酸和飞燕草素复配前后对H9C2细胞氧化损伤的保护作用
3.1 引言
3.2 试验材料与设备
3.2.1 材料与试剂
3.2.2 实验仪器
3.3 实验方法
3.3.1 H9c2细胞的培养
3.3.2 植物化学物对细胞的毒性实验
3.3.3 CAA法测细胞抗氧化活性
3.3.4 细胞内ROS的测定
3.3.5 抗氧化酶的测定
3.3.6 数据处理
3.4 结果与分析
3.4.1 植物化学物对H9c2细胞的毒性实验
3.4.2 四种天然植物化学物单独作用H9c2细胞的抗氧化保护作用
3.4.3 联合指数法筛选显著抗氧化协同、拮抗组合
3.4.4 显著抗氧化协同、拮抗组合的ROS水平测定
3.4.5 显著抗氧化协同、拮抗组合的抗氧化酶活性的测定
3.5 讨论
3.5.1 高浓度的植物化学物可能在H9c2细胞产生促氧化作用
3.5.2 体外化学与细胞内抗氧化相互作用的差异
3.5.3 显著协同拮抗组在抗氧化酶活性水平上未达到预期相互作用效果
3.6 小结
第4章 基于NRF2通路研究抗氧化相互作用机制
4.1 引言
4.2 试验材料与设备
4.2.1 材料与试剂
4.2.2 实验仪器
4.3 实验方法
4.3.1 H9c2细胞的培养
4.3.2 Western Blot检测Nrf2信号通路相关蛋白的表达
4.3.3 免疫荧光染色测定Nrf2进入细胞核
4.3.4 JC-1染色检测线粒体膜电位
4.3.5 数据分析
4.4 结果与分析
4.4.1 H_2O_2作用浓度对细胞Nrf2通路蛋白的影响
4.4.2 H_2O_2作用时间对细胞Nrf2通路蛋白的影响
4.4.3 飞燕草素作用时间对Nrf2通路蛋白的影响
4.4.4 四种天然植物化学物复配前后对GCLC、HO-1蛋白的影响
4.4.5 四种天然植物化学物复配前后Nrf2蛋白入核的影响
4.4.6 免疫荧光染色测定Nrf2进入细胞核
4.4.7 Nrf2抑制剂对显著协同拮抗组中Nrf2通路蛋白表达的影响
4.4.8 JC-1检测线粒体膜电位变化
4.5 讨论
4.5.1 Nrf2信号通路是调控细胞内氧化应激水平的核心通路
4.5.2 H_2O_2的对H9c2细胞的作用变化
4.5.3 四种植物化学物复配组合对H9c2细胞氧化损伤的保护机制
4.6 小结
第5章 番茄红素和叶黄素在H9C2细胞的降解和吸收
5.1 引言
5.2
5.2.1 材料与试剂
5.2.2 实验仪器
5.3 实验方法
5.3.1 番茄红素和叶黄素在DMEM培养基中的降解
5.3.2 番茄红素含量的测定
5.3.3 叶黄素含量的测定
5.3.4 H9c2细胞中类胡萝卜素的提取
5.3.5 数据分析
5.4 结果与分析
5.4.1 番茄红素在DMEM培养基中的降解
5.4.2 不同比例、不同浓度复配前后对番茄红素细胞吸收的影响
5.4.3 叶黄素在DMEM培养基中的降解
5.4.4 不同比例、不同浓度复配前后对叶黄素细胞吸收的影响
5.5 讨论
5.5.1 植物化学物的吸收和代谢机制
5.5.2 植物化学物的吸收与抗氧化相互作用的关系
5.5.3 类胡萝卜素在DMEM培养基中的稳定性与细胞吸收的关系
5.6 小结
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.1.1 番茄红素、叶黄素、绿原酸和飞燕草素体外抗氧化相互作用
6.1.2 番茄红素、叶黄素、绿原酸和飞燕草素复配前后对H9c2细胞氧化损伤的保护作用
6.1.3 基于Nrf2通路研究四种植物化学物相互作用的机理
6.1.4 番茄红素和叶黄素在H9c2细胞的降解和吸收
6.2 进一步工作方向
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]TLR4对ox-LDL作用后的血管内皮细胞ROS及线粒体膜电位的影响[J]. 龙元,李宇辉,张勇. 临床和实验医学杂志. 2018(11)
[2]叶黄素与玉米黄质协同抗氧化活性的研究[J]. 任丹丹,张海丽,王惜童,薛凌云,吴文忠. 食品工业科技. 2017(17)
[3]番茄红素的抗氧化活性研究[J]. 刘国安,薛莹,马伟,李贵琛,吴亚楠. 西北师范大学学报(自然科学版). 2016(02)
[4]番薯提取液与茶多酚、葛根黄酮对PC12细胞的协同抗氧化研究[J]. 刘晓娟,何凤林,赵力超,刘欣. 现代食品科技. 2015(12)
[5]异鼠李素对H2O2引起的H9C2细胞氧化应激损伤的保护作用研究[J]. 董曦,孙桂波,罗云,孙晓波,陈素红. 中国药理学通报. 2015(06)
[6]万寿菊叶黄素抗氧化作用量效关系研究[J]. 李晋生,靳冉,陈霞,岳枫,刘丹,张瀚涛,叶祖光. 中国中医药信息杂志. 2013(09)
[7]植物化学物质的健康效应及其研究前景[J]. 丁苗,周才琼. 食品工业科技. 2013(23)
[8]花青素防治乳腺癌研究进展[J]. 罗丽萍,韩彬,彭晓莉,余小平,刘卫华,李遂焰. 天然产物研究与开发. 2012(S1)
[9]植物花青素研究进展[J]. 赵云荣,王世雷. 安徽农业科学. 2008(08)
[10]天然抗氧化剂的研究概况[J]. 朱将伟. 饲料工业. 2007(24)
博士论文
[1]基于Nrf2/ARE通路研究复方QYJD抗结肠癌细胞生长及抗氧化作用机理[D]. 方若鸣.广州中医药大学 2016
[2]飞燕草素葡萄糖苷在血管内皮细胞的摄取利用及损伤保护效应研究[D]. 金鑫.第三军医大学 2013
硕士论文
[1]EGCG、葡萄籽原花青素与二氢杨梅素协同抗氧化及对小鼠乳腺癌4T1细胞的协同抑制作用研究[D]. 张姝萍.浙江大学 2019
[2]基于量子化学计算研究类胡萝卜素及黄烷酮清除自由基的构效关系[D]. 刘科梅.南昌大学 2018
[3]虾青素与5种天然抗氧化剂的抗氧化活性比较研究[D]. 刘晓星.河北工程大学 2018
[4]深色农产品抗氧化协同作用的研究[D]. 蒋海伟.南昌大学 2015
本文编号：3687537
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
1.1 前言
1.2 植物化学物的抗氧化活性及功能
1.2.1 类胡萝卜素
1.2.2 酚类化合物
1.2.3 其他植物化学物
1.3 植物化学物的相互作用
1.4 抗氧化系统机制的概述
1.4.1 通过直接清除自由基发挥抗氧化作用
1.4.2 通过激活体内固有的抗氧化系统发挥抗氧化作用
1.5 课题研究的来源、意义及主要内容
1.5.1 课题来源
1.5.2 研究价值及意义
1.6 创新点
1.7 主要研究内容
第2章 番茄红素、叶黄素、绿原酸和飞燕草素的体外抗氧化相互作用
2.1 引言
2.2 试验材料与设备
2.2.1 材料与试剂
2.2.2 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 ABTS自由基清除能力测定
2.3.2 DPPH自由基清除能力测定
2.3.3 数据处理
2.4 结果与分析
2.4.1 四种植物化学物的ABTS自由基清除能力
2.4.2 ABTS法中四种植物化学物的抗氧化相互作用关系
2.4.3 四种植物化学物的DPPH自由基清除能力
2.4.4 DPPH法中四种植物化学物的抗氧化相互作用关系
2.4.5 等辐射分析法评价天然产物间抗氧化相互作用关系
2.5 讨论
2.5.1 等辐射分析法可以快速直观的判断植物化学物的抗氧化相互作用
2.5.2 两种物质以不同比例混合后抗氧化相互作用可能具有较大差异
2.5.3 DPPH法和ABTS法测定四种植物化学物结果存在差异
2.6 小结
第3章 番茄红素、叶黄素、绿原酸和飞燕草素复配前后对H9C2细胞氧化损伤的保护作用
3.1 引言
3.2 试验材料与设备
3.2.1 材料与试剂
3.2.2 实验仪器
3.3 实验方法
3.3.1 H9c2细胞的培养
3.3.2 植物化学物对细胞的毒性实验
3.3.3 CAA法测细胞抗氧化活性
3.3.4 细胞内ROS的测定
3.3.5 抗氧化酶的测定
3.3.6 数据处理
3.4 结果与分析
3.4.1 植物化学物对H9c2细胞的毒性实验
3.4.2 四种天然植物化学物单独作用H9c2细胞的抗氧化保护作用
3.4.3 联合指数法筛选显著抗氧化协同、拮抗组合
3.4.4 显著抗氧化协同、拮抗组合的ROS水平测定
3.4.5 显著抗氧化协同、拮抗组合的抗氧化酶活性的测定
3.5 讨论
3.5.1 高浓度的植物化学物可能在H9c2细胞产生促氧化作用
3.5.2 体外化学与细胞内抗氧化相互作用的差异
3.5.3 显著协同拮抗组在抗氧化酶活性水平上未达到预期相互作用效果
3.6 小结
第4章 基于NRF2通路研究抗氧化相互作用机制
4.1 引言
4.2 试验材料与设备
4.2.1 材料与试剂
4.2.2 实验仪器
4.3 实验方法
4.3.1 H9c2细胞的培养
4.3.2 Western Blot检测Nrf2信号通路相关蛋白的表达
4.3.3 免疫荧光染色测定Nrf2进入细胞核
4.3.4 JC-1染色检测线粒体膜电位
4.3.5 数据分析
4.4 结果与分析
4.4.1 H_2O_2作用浓度对细胞Nrf2通路蛋白的影响
4.4.2 H_2O_2作用时间对细胞Nrf2通路蛋白的影响
4.4.3 飞燕草素作用时间对Nrf2通路蛋白的影响
4.4.4 四种天然植物化学物复配前后对GCLC、HO-1蛋白的影响
4.4.5 四种天然植物化学物复配前后Nrf2蛋白入核的影响
4.4.6 免疫荧光染色测定Nrf2进入细胞核
4.4.7 Nrf2抑制剂对显著协同拮抗组中Nrf2通路蛋白表达的影响
4.4.8 JC-1检测线粒体膜电位变化
4.5 讨论
4.5.1 Nrf2信号通路是调控细胞内氧化应激水平的核心通路
4.5.2 H_2O_2的对H9c2细胞的作用变化
4.5.3 四种植物化学物复配组合对H9c2细胞氧化损伤的保护机制
4.6 小结
第5章 番茄红素和叶黄素在H9C2细胞的降解和吸收
5.1 引言
5.2
5.2.1 材料与试剂
5.2.2 实验仪器
5.3 实验方法
5.3.1 番茄红素和叶黄素在DMEM培养基中的降解
5.3.2 番茄红素含量的测定
5.3.3 叶黄素含量的测定
5.3.4 H9c2细胞中类胡萝卜素的提取
5.3.5 数据分析
5.4 结果与分析
5.4.1 番茄红素在DMEM培养基中的降解
5.4.2 不同比例、不同浓度复配前后对番茄红素细胞吸收的影响
5.4.3 叶黄素在DMEM培养基中的降解
5.4.4 不同比例、不同浓度复配前后对叶黄素细胞吸收的影响
5.5 讨论
5.5.1 植物化学物的吸收和代谢机制
5.5.2 植物化学物的吸收与抗氧化相互作用的关系
5.5.3 类胡萝卜素在DMEM培养基中的稳定性与细胞吸收的关系
5.6 小结
第6章 结论与展望
6.1 结论
6.1.1 番茄红素、叶黄素、绿原酸和飞燕草素体外抗氧化相互作用
6.1.2 番茄红素、叶黄素、绿原酸和飞燕草素复配前后对H9c2细胞氧化损伤的保护作用
6.1.3 基于Nrf2通路研究四种植物化学物相互作用的机理
6.1.4 番茄红素和叶黄素在H9c2细胞的降解和吸收
6.2 进一步工作方向
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]TLR4对ox-LDL作用后的血管内皮细胞ROS及线粒体膜电位的影响[J]. 龙元,李宇辉,张勇. 临床和实验医学杂志. 2018(11)
[2]叶黄素与玉米黄质协同抗氧化活性的研究[J]. 任丹丹,张海丽,王惜童,薛凌云,吴文忠. 食品工业科技. 2017(17)
[3]番茄红素的抗氧化活性研究[J]. 刘国安,薛莹,马伟,李贵琛,吴亚楠. 西北师范大学学报(自然科学版). 2016(02)
[4]番薯提取液与茶多酚、葛根黄酮对PC12细胞的协同抗氧化研究[J]. 刘晓娟,何凤林,赵力超,刘欣. 现代食品科技. 2015(12)
[5]异鼠李素对H2O2引起的H9C2细胞氧化应激损伤的保护作用研究[J]. 董曦,孙桂波,罗云,孙晓波,陈素红. 中国药理学通报. 2015(06)
[6]万寿菊叶黄素抗氧化作用量效关系研究[J]. 李晋生,靳冉,陈霞,岳枫,刘丹,张瀚涛,叶祖光. 中国中医药信息杂志. 2013(09)
[7]植物化学物质的健康效应及其研究前景[J]. 丁苗,周才琼. 食品工业科技. 2013(23)
[8]花青素防治乳腺癌研究进展[J]. 罗丽萍,韩彬,彭晓莉,余小平,刘卫华,李遂焰. 天然产物研究与开发. 2012(S1)
[9]植物花青素研究进展[J]. 赵云荣,王世雷. 安徽农业科学. 2008(08)
[10]天然抗氧化剂的研究概况[J]. 朱将伟. 饲料工业. 2007(24)
博士论文
[1]基于Nrf2/ARE通路研究复方QYJD抗结肠癌细胞生长及抗氧化作用机理[D]. 方若鸣.广州中医药大学 2016
[2]飞燕草素葡萄糖苷在血管内皮细胞的摄取利用及损伤保护效应研究[D]. 金鑫.第三军医大学 2013
硕士论文
[1]EGCG、葡萄籽原花青素与二氢杨梅素协同抗氧化及对小鼠乳腺癌4T1细胞的协同抑制作用研究[D]. 张姝萍.浙江大学 2019
[2]基于量子化学计算研究类胡萝卜素及黄烷酮清除自由基的构效关系[D]. 刘科梅.南昌大学 2018
[3]虾青素与5种天然抗氧化剂的抗氧化活性比较研究[D]. 刘晓星.河北工程大学 2018
[4]深色农产品抗氧化协同作用的研究[D]. 蒋海伟.南昌大学 2015
本文编号：3687537
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