粮食中真菌毒素的荧光定量免疫层析技术研究
发布时间：2022-10-17 17:05
食品安全问题（微生物污染、农兽药残留和违禁物质添加等）严重威胁人畜的生命健康,其中由食品中微生物繁殖后产生的真菌毒素诱发的食源性疾病已广泛引起大家的关注。目前已分离鉴定出的300多种真菌毒素中有30多种的危害较大,又以黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）、玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）和赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）等毒性强、具有“三致”作用的毒素的污染概率最高,主要存在于粮食及其制品中。且一些真菌可同时产生多种毒素,多种毒素混合污染一种粮食的情况也普遍存在。加强检测技术的研发是保障粮食质量安全的重要手段。荧光免疫层析检测技术（fluorescent immunochromatographic assay,FICA）具有灵敏、准确、快速、高通量、低成本,有多种荧光标记物可供选择,能实现多组分的同步检测等优势。本论文旨在建立荧光免疫层析法检测粮食中的真菌毒素,为政府监管提供参考。首先通过肟化改造AFB1得到半抗原AFB1-CMO,...
【文章页数】：111 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 研究目的和意义
1.2 真菌毒素概述
1.2.1 黄曲霉毒素B_1
1.2.2 玉米赤霉烯酮
1.2.3 赭曲霉毒素A
1.3 真菌毒素检测方法
1.3.1 仪器检测方法
1.3.2 免疫学检测方法
1.4 荧光免疫层析法
1.4.1 量子点荧光免疫层析法
1.4.2 量子点微球荧光免疫层析法
1.4.3 时间分辨荧光免疫层析法
1.5 荧光免疫层析法检测真菌毒素的研究展望
1.5.1 多种荧光免疫层析法检测真菌毒素的比较
1.5.2 真菌毒素混合污染的同时检测
1.6 研究内容和方法
1.6.1 黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备
1.6.2 粮食中黄曲霉毒素B_1的三种荧光定量免疫层析技术研究
1.6.3 同时检测粮食中三种真菌毒素的多重时间分辨荧光定量免疫层析技术研究
第2章 黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备
2.1 试验材料
2.1.1 试剂
2.1.2 仪器与设备
2.1.3 溶液体系
2.2 试验方法
2.2.1 抗原制备
2.2.2 动物免疫
2.2.3 抗血清筛选
2.2.4 黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备
2.2.5 抗体纯化
2.2.6 抗体生物素化
2.2.7 抗体性能鉴定
2.3 结果与分析
2.3.1 全抗原鉴定
2.3.2 抗血清筛选
2.3.3 单克隆抗体的制备
2.3.4 抗体的性质
2.4 讨论
2.4.1 人工抗原的合成
2.4.2 单克隆抗体的制备
2.4.3 与文献报道的抗体的比较
2.5 小结
第3章 粮食中黄曲霉毒素B_1的三种荧光定量免疫层析技术研究
3.1 试验材料
3.1.1 试剂
3.1.2 耗材
3.1.3 仪器与设备
3.1.4 溶液体系
3.2 试验方法
3.2.1 三种荧光标记物性质的鉴定
3.2.2 三种标记抗体荧光探针的制备
3.2.3 三种荧光定量免疫层析检测方法的建立
3.2.4 三种荧光定量免疫层析方法工艺条件的优化
3.2.5 动力学分析
3.2.6 定量检测
3.2.7 实际样品检测
3.3 讨论
3.3.1 三种荧光标记物的电镜表征分析
3.3.2 三种荧光定量免疫层析法的原理
3.3.3 荧光定量免疫层析法工艺条件的优化
3.3.4 动力学分析
3.3.5 定量检测
3.3.6 实际样品检测
3.4 讨论
3.4.1 三种荧光定量免疫层析法的比较
3.4.2 与国内外方法比较
3.5 小结
第4章 同时检测粮食中三种真菌毒素的多重时间分辨荧光定量免疫层析技术研究
4.1 试验材料
4.1.1 试剂
4.1.2 耗材
4.1.3 仪器与设备
4.1.4 溶液体系
4.2 试验方法
4.2.1 时间分辨荧光探针的制备
4.2.2 多重时间分辨荧光定量免疫层析法的建立
4.2.3 检测方法优化
4.2.4 动力学分析
4.2.5 定量检测
4.2.6 实际样品检测
4.3 结果与分析
4.3.1 多重时间分辨荧光定量免疫层析法的原理
4.3.2 多重时间分辨荧光定量免疫层析法的优化
4.3.3 动力学分析
4.3.4 定量检测
4.3.5 实际样品检测
4.4 讨论
4.4.1 时间分辨荧光微球标记抗体
4.4.2 与国内外方法的比较
4.5 小结
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.1.1 黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备
5.1.2 粮食中黄曲霉毒素B_1的三种荧光定量免疫层析技术研究
5.1.3 同时检测粮食中三种真菌毒素的多重时间分辨荧光定量免疫层析技术研究
5.2 展望
5.2.1 荧光探针保存方式的探究
5.2.2 时间分辨荧光定量免疫层析法优势普适性的探究
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]检测黄曲霉毒素的方法及其应用[J]. 刘哲栋,徐晖. 现代食品. 2017(22)
[2]荧光标记免疫层析技术在食品安全检测中的应用研究进展[J]. 汤轶伟,张宏,崔芷萌,焦雪晴,刘欢,钟克利,刘秀英,高子媛,徐志祥,丁浩宸,励建荣. 食品工业科技. 2018(02)
[3]玉米赤霉烯酮检测方法的研究进展[J]. 周妍,张圆圆,刁晨曦,陆涛峰,陈洪岩. 中国饲料. 2017(16)
[4]食品黄曲霉毒素总量检测方法的研究与应用[J]. 王亚楠,王晓斐,王自良. 食品与发酵工业. 2018(01)
[5]饲料中玉米赤霉烯酮检测及脱毒技术的研究进展[J]. 葛文霞,柳旭伟,张文举,刘晓娜. 安徽农业科学. 2016(01)
[6]黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测技术研究[J]. 谢珲,章先,王歆,凡鹏程,时玉菲,方维焕. 微生物学通报. 2015(10)
[7]基于上转发光技术的奶粉及牛奶中黄曲霉毒素M1快速定量检测方法研究[J]. 刘晓,王立平,周蕾,林承喜,杨瑞馥,邱景富. 军事医学. 2014(11)
[8]农产品中黄曲霉毒素的时间分辨荧光免疫层析快速检测技术研究[J]. 张兆威,李培武,张奇,丁小霞. 中国农业科学. 2014(18)
[9]黄曲霉毒素免疫检测技术研究进展[J]. 张奇,李培武,陈小媚,周海燕,印南日,甘冬生. 农产品质量与安全. 2013(03)
[10]真菌毒素的污染状况及毒性研究[J]. 陈志飞,王元凯,严亚贤,李树清,于翠,杨翠云,孙建和. 检验检疫学刊. 2012(05)
博士论文
[1]玉米中四种真菌毒素的免疫分析检测技术研究[D]. 张西亚.中国农业大学 2017
[2]黄曲霉毒素杂交瘤细胞株的选育及免疫层析检测技术研究[D]. 张道宏.中国农业科学院 2011
硕士论文
[1]基于核酸适体传感器的赭曲霉毒素A检测方法研究[D]. 鲁丽媛.河南工业大学 2017
[2]PEG-载体蛋白中载体蛋白免疫原性对PEG特异性抗体性质的影响[D]. 万雪.天津科技大学 2016
[3]黄曲霉毒素B1单抗的制备及初步应用[D]. 蒋广明.扬州大学 2007
本文编号：3692454
【文章页数】：111 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
1.1 研究目的和意义
1.2 真菌毒素概述
1.2.1 黄曲霉毒素B_1
1.2.2 玉米赤霉烯酮
1.2.3 赭曲霉毒素A
1.3 真菌毒素检测方法
1.3.1 仪器检测方法
1.3.2 免疫学检测方法
1.4 荧光免疫层析法
1.4.1 量子点荧光免疫层析法
1.4.2 量子点微球荧光免疫层析法
1.4.3 时间分辨荧光免疫层析法
1.5 荧光免疫层析法检测真菌毒素的研究展望
1.5.1 多种荧光免疫层析法检测真菌毒素的比较
1.5.2 真菌毒素混合污染的同时检测
1.6 研究内容和方法
1.6.1 黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备
1.6.2 粮食中黄曲霉毒素B_1的三种荧光定量免疫层析技术研究
1.6.3 同时检测粮食中三种真菌毒素的多重时间分辨荧光定量免疫层析技术研究
第2章 黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备
2.1 试验材料
2.1.1 试剂
2.1.2 仪器与设备
2.1.3 溶液体系
2.2 试验方法
2.2.1 抗原制备
2.2.2 动物免疫
2.2.3 抗血清筛选
2.2.4 黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备
2.2.5 抗体纯化
2.2.6 抗体生物素化
2.2.7 抗体性能鉴定
2.3 结果与分析
2.3.1 全抗原鉴定
2.3.2 抗血清筛选
2.3.3 单克隆抗体的制备
2.3.4 抗体的性质
2.4 讨论
2.4.1 人工抗原的合成
2.4.2 单克隆抗体的制备
2.4.3 与文献报道的抗体的比较
2.5 小结
第3章 粮食中黄曲霉毒素B_1的三种荧光定量免疫层析技术研究
3.1 试验材料
3.1.1 试剂
3.1.2 耗材
3.1.3 仪器与设备
3.1.4 溶液体系
3.2 试验方法
3.2.1 三种荧光标记物性质的鉴定
3.2.2 三种标记抗体荧光探针的制备
3.2.3 三种荧光定量免疫层析检测方法的建立
3.2.4 三种荧光定量免疫层析方法工艺条件的优化
3.2.5 动力学分析
3.2.6 定量检测
3.2.7 实际样品检测
3.3 讨论
3.3.1 三种荧光标记物的电镜表征分析
3.3.2 三种荧光定量免疫层析法的原理
3.3.3 荧光定量免疫层析法工艺条件的优化
3.3.4 动力学分析
3.3.5 定量检测
3.3.6 实际样品检测
3.4 讨论
3.4.1 三种荧光定量免疫层析法的比较
3.4.2 与国内外方法比较
3.5 小结
第4章 同时检测粮食中三种真菌毒素的多重时间分辨荧光定量免疫层析技术研究
4.1 试验材料
4.1.1 试剂
4.1.2 耗材
4.1.3 仪器与设备
4.1.4 溶液体系
4.2 试验方法
4.2.1 时间分辨荧光探针的制备
4.2.2 多重时间分辨荧光定量免疫层析法的建立
4.2.3 检测方法优化
4.2.4 动力学分析
4.2.5 定量检测
4.2.6 实际样品检测
4.3 结果与分析
4.3.1 多重时间分辨荧光定量免疫层析法的原理
4.3.2 多重时间分辨荧光定量免疫层析法的优化
4.3.3 动力学分析
4.3.4 定量检测
4.3.5 实际样品检测
4.4 讨论
4.4.1 时间分辨荧光微球标记抗体
4.4.2 与国内外方法的比较
4.5 小结
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.1.1 黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备
5.1.2 粮食中黄曲霉毒素B_1的三种荧光定量免疫层析技术研究
5.1.3 同时检测粮食中三种真菌毒素的多重时间分辨荧光定量免疫层析技术研究
5.2 展望
5.2.1 荧光探针保存方式的探究
5.2.2 时间分辨荧光定量免疫层析法优势普适性的探究
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]检测黄曲霉毒素的方法及其应用[J]. 刘哲栋,徐晖. 现代食品. 2017(22)
[2]荧光标记免疫层析技术在食品安全检测中的应用研究进展[J]. 汤轶伟,张宏,崔芷萌,焦雪晴,刘欢,钟克利,刘秀英,高子媛,徐志祥,丁浩宸,励建荣. 食品工业科技. 2018(02)
[3]玉米赤霉烯酮检测方法的研究进展[J]. 周妍,张圆圆,刁晨曦,陆涛峰,陈洪岩. 中国饲料. 2017(16)
[4]食品黄曲霉毒素总量检测方法的研究与应用[J]. 王亚楠,王晓斐,王自良. 食品与发酵工业. 2018(01)
[5]饲料中玉米赤霉烯酮检测及脱毒技术的研究进展[J]. 葛文霞,柳旭伟,张文举,刘晓娜. 安徽农业科学. 2016(01)
[6]黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测技术研究[J]. 谢珲,章先,王歆,凡鹏程,时玉菲,方维焕. 微生物学通报. 2015(10)
[7]基于上转发光技术的奶粉及牛奶中黄曲霉毒素M1快速定量检测方法研究[J]. 刘晓,王立平,周蕾,林承喜,杨瑞馥,邱景富. 军事医学. 2014(11)
[8]农产品中黄曲霉毒素的时间分辨荧光免疫层析快速检测技术研究[J]. 张兆威,李培武,张奇,丁小霞. 中国农业科学. 2014(18)
[9]黄曲霉毒素免疫检测技术研究进展[J]. 张奇,李培武,陈小媚,周海燕,印南日,甘冬生. 农产品质量与安全. 2013(03)
[10]真菌毒素的污染状况及毒性研究[J]. 陈志飞,王元凯,严亚贤,李树清,于翠,杨翠云,孙建和. 检验检疫学刊. 2012(05)
博士论文
[1]玉米中四种真菌毒素的免疫分析检测技术研究[D]. 张西亚.中国农业大学 2017
[2]黄曲霉毒素杂交瘤细胞株的选育及免疫层析检测技术研究[D]. 张道宏.中国农业科学院 2011
硕士论文
[1]基于核酸适体传感器的赭曲霉毒素A检测方法研究[D]. 鲁丽媛.河南工业大学 2017
[2]PEG-载体蛋白中载体蛋白免疫原性对PEG特异性抗体性质的影响[D]. 万雪.天津科技大学 2016
[3]黄曲霉毒素B1单抗的制备及初步应用[D]. 蒋广明.扬州大学 2007
本文编号：3692454
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