DHA和2-DHA-单甘酯的制备纯化及调节HepG2细胞脂质代谢的比较研究

发布时间：2023-02-14 14:49

　　二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)是一种n-3多不饱和脂肪酸,它在维护人体营养健康和预防治疗某些疾病方面发挥重要作用。目前,市场上高浓度DHA多为乙酯型,相比于乙酯型,游离型和甘油酯型DHA更易吸收。此外,即使同为甘油酯型,DHA在甘油骨架上的位置不同对其生理活性亦有重要的影响。根据甘三酯在体内的代谢特点,DHA位置分布不同的甘三酯会形成DHA和2-单甘酯型DHA(2-DHAMAG)。本论文制备了高浓度DHA和2-DHA-MAG,并对2-DHA-MAG酰基转移规律进行了研究,同时以DHA和2-DHA-MAG代表DHA位置分布不同的甘三酯的代谢产物,比较其对HepG2细胞脂质代谢的影响。主要研究内容如下:首先,以金枪鱼油水解产物脂肪酸为原料,通过低温溶剂结晶和尿素包合分别富集DHA。结果表明,以乙腈作为低温结晶溶剂,可显著缩短结晶所需时间,在脂肪酸与乙腈比为1:10(w/v)、结晶温度-60°C、结晶时间1 h的条件下,使DHA的含量从26.85%提高至56.31%,回收率为60%左右;采用尿素包合法对DHA富集时,在脂肪酸:尿素:溶剂为1:3:12(w/...

【文章页数】：105 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
缩写符号说明
第一章 绪论
    1.1 DHA的概述
        1.1.1 DHA的功能性
        1.1.2 DHA的来源、存在形式及位置分布
    1.2 甘三酯的消化、吸收和代谢
    1.3 DHA在甘三酯上的位置分布对脂质代谢的影响
        1.3.1 DHA的位置分布对血脂和肝脏脂质水平的影响
        1.3.2 DHA的位置分布对脂质代谢调节的差异
    1.4 细胞模型评价脂质代谢和位置分布的研究
    1.5 DHA的纯化
        1.5.1 低温结晶
        1.5.2 尿素包合
        1.5.3 酶法富集
        1.5.4 分子蒸馏
        1.5.5 色谱分离
    1.6 2-MAG的制备及酰基转移
        1.6.1 2-MAG及其制备方法
        1.6.2 2-MAG的酰基转移
    1.7 研究背景及意义
    1.8 论文主要研究内容
第二章 DHA的富集纯化
    2.1 引言
    2.2 材料与仪器
        2.2.1 实验材料与试剂
        2.2.2 实验仪器与设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 金枪鱼油脂肪酸的制备
        2.3.2 低温溶剂结晶富集金枪鱼油脂肪酸中的DHA
        2.3.3 尿素包合法富集金枪鱼油脂肪酸中的DHA
        2.3.4 制备液相富集DHA
        2.3.5 气相色谱分析脂肪酸组成
        2.3.6 脂肪酸回收率计算
        2.3.7 数据分析
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 低温溶剂结晶富集金枪鱼油脂肪酸中DHA的工艺优化
        2.4.2 尿素包合法富集金枪鱼油脂肪酸中DHA的工艺优化
        2.4.3 低温结晶与尿素包合结合富集DHA
        2.4.4 低温结晶、尿素包合富集藻油脂肪酸中DHA
        2.4.5 制备液相富集DHA
    2.5 本章小结
第三章 酶法醇解制备2-单甘酯型DHA
    3.1 引言
    3.2 材料与仪器
        3.2.1 实验材料与试剂
        3.2.2 实验仪器与设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 酶法醇解制备2-MAG
        3.3.2 溶剂萃取法分离纯化2-MAG
        3.3.3 2-DHA-MAG的富集
        3.3.4 脂肪酶的回收利用
        3.3.5 油脂成分检测分析
        3.3.6 数据统计分析
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 原料油脂脂肪酸组成及分布特点
        3.4.2 酶法醇解制备2-MAG
        3.4.3 脂肪酶的回收利用
        3.4.4 溶剂萃取纯化产物中2-MAG
        3.4.5 2-DHA-MAG的分离纯化
    3.5 本章小结
第四章 富含DHA的2-单甘酯的酰基转移动力学研究
    4.1 引言
    4.2 实验材料与试剂
        4.2.1 实验材料与试剂
        4.2.2 实验仪器与设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 2-MAG的合成及纯化
        4.3.2 酰基转移反应
        4.3.3 液相测定2-MAG含量
        4.3.4 薄层色谱法分离1-MAG和2-MAG
        4.3.5 气相色谱测定脂肪酸组成
        4.3.6 2-MAG含量的计算
        4.3.7 数据统计分析
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 酰基转移原料2-MAG的选择
        4.4.2 温度对藻油2-MAG酰基转移的影响
        4.4.3 溶剂对藻油2-MAG酰基转移的影响
        4.4.4 藻油2-MAG酰基转移动力学的研究
        4.4.5 溶剂性质对酰基转移速率常数的影响
        4.4.6 藻油2-MAG酰基转移后脂肪酸的分布
    4.5 本章小结
第五章DHA在甘三酯的位置分布对HepG2细胞脂质代谢的影响
    5.1 引言
    5.2 材料与仪器
        5.2.1 实验材料与试剂
        5.2.2 实验仪器与设备
    5.3 实验方法
        5.3.1 脂肪酸组成相同的2-DHA-MAG与DHA样品的制备
        5.3.2 主要试剂的配置
        5.3.3 细胞培养
        5.3.4 细胞活力的检测
        5.3.5 油酸诱导肝脂肪变性细胞模型的建立
        5.3.6 2-DHA-MAG和DHA的添加及对细胞的刺激
        5.3.7 细胞脂质的提取及检测
        5.3.8 细胞内总甘三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量的测定
        5.3.9 细胞总RNA提取、cDNA合成和实时荧光定量PCR
        5.3.10 数据统计分析
    5.4 结果与讨论
        5.4.1 不同浓度2-DHA-MAG和DHA对细胞活性的影响
        5.4.2 2-DHA-MAG和DHA对HepG2细胞脂肪酸组成的影响
        5.4.3 2-DHA-MAG和DHA对HepG2细胞内TG和TC水平的影响
        5.4.4 2-DHA-MAG和DHA对脂质代谢关键转录因子及基因mRNA表达的影响
        5.4.5 肝细胞脂肪变性细胞模型的建立
        5.4.6 2-DHA-MAG和DHA对脂肪变性HepG2细胞TG和TC水平的影响
        5.4.7 2-DHA-MAG和DHA对脂肪变性HepG2细胞脂质代谢调节的差异
    5.5 本章小结
主要结论与展望
    主要结论
    展望
论文创新点
致谢
参考文献
附录:攻读博士学位期间研究成果及获得的奖励



本文编号：3742568