罗非鱼皮胶原降解反应行为及肽钙螯合物制备研究
发布时间：2023-03-02 20:10
罗非鱼加工过程中会产生大量的鱼皮,其含有大量的蛋白质,具有较高的利用价值。本文以罗非鱼新鲜鱼皮为原料提取胶原,采用酸热处理降解生成明胶化胶原,并开展了明胶化过程的系统研究;为解决含鱼明胶体系中胶原蛋白肽含量测定的诸多问题,对双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的方法进行了改良及应用评价;对一种来自于枯草芽孢杆菌的碱性胶原蛋白酶进行了分离纯化、酶学性质及结构模拟研究,并采用磺化聚苯乙烯(sulfonated polystyrene,SPS)纳米粒子固载胶原蛋白酶;以固定化酶水解罗非鱼皮明胶化胶原制备胶原蛋白肽为研究体系,基于蛋白质结构知识和3-D模型解析了多组分复杂体系的动态降解行为;以酶解得到的胶原蛋白肽为原料制备了肽钙螯合物,优化了螯合工艺,研究了螯合物的稳定性,并采用Caco-2细胞模型评价了螯合物体外促钙吸收作用。具体研究结果如下:(1)以罗非鱼新鲜鱼皮和鱼鳞为原料,通过纤维组织观察发现罗非鱼皮中主要为Ⅰ型胶原;采用单纯醋酸提取及胃蛋白酶辅助醋酸提取两种方法制得了鱼皮、鱼鳞酸溶性胶原(ASC)及酶促酸溶性胶原(PSC),对产物进行了系统表征及性质对比分析。结果表明:鱼皮ASC和PS...
【文章页数】：186 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 罗非鱼养殖及加工现状
1.1.1 罗非鱼习性及养殖现状
1.1.2 罗非鱼加工现状
1.1.3 罗非鱼的下脚料的综合利用
1.1.4 罗非鱼产业存在的问题及产业转型的迫切性
1.2 胶原蛋白的研究进展
1.2.1 胶原蛋白的分类
1.2.2 胶原蛋白的结构
1.2.3 胶原蛋白的提取方法
1.2.4 胶原蛋白的应用
1.3 胶原明胶化过程
1.3.1 明胶概述
1.3.2 明胶结构
1.3.3 明胶的提取方法
1.4 胶原明胶化过程的微观结构变化研究
1.5 鱼明胶及酶解制备胶原蛋白肽
1.5.1 鱼明胶概况
1.5.2 鱼明胶的氨基酸组成
1.5.3 鱼明胶的应用
1.5.4 胶原蛋白肽的概述
1.6 胶原蛋白酶性质及酶的分离纯化方法
1.6.1 胶原蛋白酶性质
1.6.2 酶的纯化方法
1.7 胶原蛋白肽含量的检测方法
1.8 3-D模型构建在蛋白质酶促水解过程的应用研究
1.9 肽螯合钙的研究进展
1.9.1 螯合机制
1.9.2 肽钙螯合物的吸收利用
1.9.3 生产制备工艺
1.9.4 肽钙螯合物的特性及促钙吸收的机理
1.9.5 肽钙螯合物的结合性能分析
1.9.6 肽钙螯合产品研究
1.10 本文的研究目的、研究内容
1.10.1 研究目的及意义
1.10.2 研究内容
1.10.3 研究技术路线
第二章 罗非鱼皮胶原纤维结构及性质研究
2.1 引言
2.2 材料与仪器
2.2.1 主要材料和试剂
2.2.2 主要仪器与设备
2.3 实验方法
2.3.1 罗非鱼新鲜鱼皮和鱼鳞基本成分的测定
2.3.2 鱼皮胶原纤维的分布
2.3.3 罗非鱼鱼皮、鱼鳞酸溶性胶原(ASC)和酶促酸溶性胶原(PSC)提取方法
2.3.4 胶原产物性质的测定
2.4 结果与分析
2.4.1 罗非鱼鱼皮和鱼鳞组成成分的比较
2.4.2 罗非鱼皮中胶原纤维的分布
2.4.3 胶原产物纯度的测定结果
2.4.4 紫外光谱分析
2.4.5 氨基酸组成分析
2.4.6 FTIR分析
2.4.7 胶原热收缩温度测定(Ts)
2.4.8 胶原产物分子量分布测定结果
2.5 本章小节
第三章 罗非鱼皮胶原明胶化过程的研究
3.1 引言
3.2 材料与仪器
3.2.1 主要材料和试剂
3.2.2 主要仪器与设备
3.3 实验流程及方法
3.3.1 盐酸法提取罗非鱼鱼皮明胶化胶原的制备方法
3.3.2 罗非鱼鱼皮明胶的提取及其提取率计算
3.3.3 罗非鱼鱼皮胶原基本成分的测定方法
3.3.4 明胶化胶原的热稳定性分析
3.3.5 红外光谱分析
3.3.6 明胶化胶原的圆二色谱分析
3.3.7 产物亚基组成及分子量分布
3.4 结果与分析
3.4.1 罗非鱼鱼皮胶原基本成分测定结果
3.4.2 酸处理时间对明胶提取率的影响
3.4.3 不同酸处理时间下胶原降解物的红外光谱分析
3.4.4 酸处理对罗非鱼皮胶原降解物热稳定性的影响
3.4.5 酸处理罗非鱼皮胶原圆二色谱结果分析
3.4.6 不同酸处理时间下罗非鱼皮胶原降解物的SDS-PAGE电泳分析
3.5 本章小结
第四章 双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的改良及应用评价
4.1 引言
4.2 材料与仪器
4.2.1 材料与试剂
4.2.2 仪器与设备
4.3 实验内容和方法
4.3.1 实验流程
4.3.2 测定方法最适参数的选定
4.3.3 最适条件下标准曲线的制作
4.3.4 精密度实验
4.3.5 重复性实验
4.3.6 鱼皮胶原蛋白肽的加样回收率试验
4.3.7 鱼皮胶原蛋白肽与罗非鱼皮胶原蛋白的加样回收率试验
4.3.8 不同种类的罗非鱼胶原蛋白肽加样回收率试验
4.3.9 不同种类罗非鱼胶原蛋白肽与罗非鱼皮胶原蛋白的加样回收率试验
4.3.10 数据及图片处理方法
4.4 结果与分析
4.4.1 络合物最大吸收波长的确定
4.4.2 多肽线性质量浓度范围的确定
4.4.3 最适pH的确定
4.4.4 最适TCA浓度的确定
4.4.5 最适条件下标准曲线的绘制
4.4.6 精密度试验结果分析
4.4.7 重复性试验结果分析
4.4.8 鱼皮胶原蛋白肽的加样回收率试验结果分析
4.4.9 鱼皮胶原蛋白肽与胶原蛋白的加样回收率试验结果分析
4.4.10 不同种类的罗非鱼胶原蛋白肽及加罗非鱼胶原蛋白的加样回收率试验结果分析
4.5 本章小结
第五章 胶原蛋白水解酶的纯化鉴定、酶学性质及固定化研究
5.1 引言
5.2 材料与仪器
5.2.1 主要材料与试剂
5.2.2 仪器与设备
5.3 实验方法
5.3.1 酶的纯化及鉴定
5.3.2 胶原蛋白水解酶酶学性质研究
5.3.3 磺化聚苯乙烯纳米球固定胶原蛋白水解酶及表征
5.4 结果与讨论
5.4.1 胶原蛋白水解酶的分离、纯化与鉴定
5.4.2 胶原蛋白水解酶酶学性质研究
5.4.3 磺化聚苯乙烯(SPS)纳米球固定胶原蛋白水解酶及表征
5.5 本章小节
第六章 罗非鱼皮胶原蛋白酶解过程反应行为研究
6.1 引言
6.2 材料与仪器
6.2.1 主要材料与试剂
6.2.2 主要仪器与设备
6.3 实验方法
6.3.1 酶解体系的建立
6.3.2 水解度的测定
6.3.3 酶解体系物质分子量分布的测定
6.3.4 3-D图形构建与曲面方程拟合及验证
6.3.5 不同水解度下酶解物的抗氧化能力评价
6.3.6 罗非鱼皮明胶化胶原蛋白肽的HPLC-MSMS检测方法及序列分析
6.3.7 鉴定得到的肽序列结构的模拟
6.4 结果与分析
6.4.1 酶解反应动态特征3-D模型构建
6.4.2 罗非鱼皮明胶化胶原酶解产物的抗氧化能力评价
6.4.3 罗非鱼皮明胶化胶原酶解产物肽的序列分析及结构预测
6.5 小结
第七章 罗非鱼皮胶原蛋白肽-钙螯合物的制备及体外Caco-2细胞模型促钙吸收评价
7.1 引言
7.2 材料与仪器
7.2.1 主要材料与试剂
7.2.2 仪器与设备
7.3 实验方法
7.3.1 罗非鱼皮胶原蛋白肽分子量的测定方法
7.3.2 罗非鱼皮胶原蛋白肽中钙含量的测定
7.3.3 罗非鱼皮胶原蛋白肽-钙螯合物基本制备方法
7.3.4 罗非鱼皮胶原蛋白肽-钙螯合物制备工艺优化
7.3.5 钙螯合率的测定
7.3.6 胶原蛋白肽螯合钙的结构表征
7.3.7 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物的稳定性研究
7.3.8 罗非鱼鱼鳞肽钙螯合物中钙结合量的测定方法
7.4 结果与讨论
7.4.1 罗非鱼皮胶原蛋白肽分子量分布测定结果
7.4.2 罗非鱼胶原蛋白肽含钙量的测定结果
7.4.3 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物制备工艺单因素实验结果及分析
7.4.4 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物制备工艺响应面优化试验结果及分析
7.4.5 胶原蛋白肽钙螯合物结构表征
7.4.6 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物稳定性研究
7.4.7 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物体外促钙吸收效果
7.5 本章小节
结论与展望
一、结论
二、主要创新点
三、展望
参考文献
攻读博士学位期间取得的研究成果
致谢
附件
本文编号：3752550
【文章页数】：186 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 罗非鱼养殖及加工现状
1.1.1 罗非鱼习性及养殖现状
1.1.2 罗非鱼加工现状
1.1.3 罗非鱼的下脚料的综合利用
1.1.4 罗非鱼产业存在的问题及产业转型的迫切性
1.2 胶原蛋白的研究进展
1.2.1 胶原蛋白的分类
1.2.2 胶原蛋白的结构
1.2.3 胶原蛋白的提取方法
1.2.4 胶原蛋白的应用
1.3 胶原明胶化过程
1.3.1 明胶概述
1.3.2 明胶结构
1.3.3 明胶的提取方法
1.4 胶原明胶化过程的微观结构变化研究
1.5 鱼明胶及酶解制备胶原蛋白肽
1.5.1 鱼明胶概况
1.5.2 鱼明胶的氨基酸组成
1.5.3 鱼明胶的应用
1.5.4 胶原蛋白肽的概述
1.6 胶原蛋白酶性质及酶的分离纯化方法
1.6.1 胶原蛋白酶性质
1.6.2 酶的纯化方法
1.7 胶原蛋白肽含量的检测方法
1.8 3-D模型构建在蛋白质酶促水解过程的应用研究
1.9 肽螯合钙的研究进展
1.9.1 螯合机制
1.9.2 肽钙螯合物的吸收利用
1.9.3 生产制备工艺
1.9.4 肽钙螯合物的特性及促钙吸收的机理
1.9.5 肽钙螯合物的结合性能分析
1.9.6 肽钙螯合产品研究
1.10 本文的研究目的、研究内容
1.10.1 研究目的及意义
1.10.2 研究内容
1.10.3 研究技术路线
第二章 罗非鱼皮胶原纤维结构及性质研究
2.1 引言
2.2 材料与仪器
2.2.1 主要材料和试剂
2.2.2 主要仪器与设备
2.3 实验方法
2.3.1 罗非鱼新鲜鱼皮和鱼鳞基本成分的测定
2.3.2 鱼皮胶原纤维的分布
2.3.3 罗非鱼鱼皮、鱼鳞酸溶性胶原(ASC)和酶促酸溶性胶原(PSC)提取方法
2.3.4 胶原产物性质的测定
2.4 结果与分析
2.4.1 罗非鱼鱼皮和鱼鳞组成成分的比较
2.4.2 罗非鱼皮中胶原纤维的分布
2.4.3 胶原产物纯度的测定结果
2.4.4 紫外光谱分析
2.4.5 氨基酸组成分析
2.4.6 FTIR分析
2.4.7 胶原热收缩温度测定(Ts)
2.4.8 胶原产物分子量分布测定结果
2.5 本章小节
第三章 罗非鱼皮胶原明胶化过程的研究
3.1 引言
3.2 材料与仪器
3.2.1 主要材料和试剂
3.2.2 主要仪器与设备
3.3 实验流程及方法
3.3.1 盐酸法提取罗非鱼鱼皮明胶化胶原的制备方法
3.3.2 罗非鱼鱼皮明胶的提取及其提取率计算
3.3.3 罗非鱼鱼皮胶原基本成分的测定方法
3.3.4 明胶化胶原的热稳定性分析
3.3.5 红外光谱分析
3.3.6 明胶化胶原的圆二色谱分析
3.3.7 产物亚基组成及分子量分布
3.4 结果与分析
3.4.1 罗非鱼鱼皮胶原基本成分测定结果
3.4.2 酸处理时间对明胶提取率的影响
3.4.3 不同酸处理时间下胶原降解物的红外光谱分析
3.4.4 酸处理对罗非鱼皮胶原降解物热稳定性的影响
3.4.5 酸处理罗非鱼皮胶原圆二色谱结果分析
3.4.6 不同酸处理时间下罗非鱼皮胶原降解物的SDS-PAGE电泳分析
3.5 本章小结
第四章 双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的改良及应用评价
4.1 引言
4.2 材料与仪器
4.2.1 材料与试剂
4.2.2 仪器与设备
4.3 实验内容和方法
4.3.1 实验流程
4.3.2 测定方法最适参数的选定
4.3.3 最适条件下标准曲线的制作
4.3.4 精密度实验
4.3.5 重复性实验
4.3.6 鱼皮胶原蛋白肽的加样回收率试验
4.3.7 鱼皮胶原蛋白肽与罗非鱼皮胶原蛋白的加样回收率试验
4.3.8 不同种类的罗非鱼胶原蛋白肽加样回收率试验
4.3.9 不同种类罗非鱼胶原蛋白肽与罗非鱼皮胶原蛋白的加样回收率试验
4.3.10 数据及图片处理方法
4.4 结果与分析
4.4.1 络合物最大吸收波长的确定
4.4.2 多肽线性质量浓度范围的确定
4.4.3 最适pH的确定
4.4.4 最适TCA浓度的确定
4.4.5 最适条件下标准曲线的绘制
4.4.6 精密度试验结果分析
4.4.7 重复性试验结果分析
4.4.8 鱼皮胶原蛋白肽的加样回收率试验结果分析
4.4.9 鱼皮胶原蛋白肽与胶原蛋白的加样回收率试验结果分析
4.4.10 不同种类的罗非鱼胶原蛋白肽及加罗非鱼胶原蛋白的加样回收率试验结果分析
4.5 本章小结
第五章 胶原蛋白水解酶的纯化鉴定、酶学性质及固定化研究
5.1 引言
5.2 材料与仪器
5.2.1 主要材料与试剂
5.2.2 仪器与设备
5.3 实验方法
5.3.1 酶的纯化及鉴定
5.3.2 胶原蛋白水解酶酶学性质研究
5.3.3 磺化聚苯乙烯纳米球固定胶原蛋白水解酶及表征
5.4 结果与讨论
5.4.1 胶原蛋白水解酶的分离、纯化与鉴定
5.4.2 胶原蛋白水解酶酶学性质研究
5.4.3 磺化聚苯乙烯(SPS)纳米球固定胶原蛋白水解酶及表征
5.5 本章小节
第六章 罗非鱼皮胶原蛋白酶解过程反应行为研究
6.1 引言
6.2 材料与仪器
6.2.1 主要材料与试剂
6.2.2 主要仪器与设备
6.3 实验方法
6.3.1 酶解体系的建立
6.3.2 水解度的测定
6.3.3 酶解体系物质分子量分布的测定
6.3.4 3-D图形构建与曲面方程拟合及验证
6.3.5 不同水解度下酶解物的抗氧化能力评价
6.3.6 罗非鱼皮明胶化胶原蛋白肽的HPLC-MSMS检测方法及序列分析
6.3.7 鉴定得到的肽序列结构的模拟
6.4 结果与分析
6.4.1 酶解反应动态特征3-D模型构建
6.4.2 罗非鱼皮明胶化胶原酶解产物的抗氧化能力评价
6.4.3 罗非鱼皮明胶化胶原酶解产物肽的序列分析及结构预测
6.5 小结
第七章 罗非鱼皮胶原蛋白肽-钙螯合物的制备及体外Caco-2细胞模型促钙吸收评价
7.1 引言
7.2 材料与仪器
7.2.1 主要材料与试剂
7.2.2 仪器与设备
7.3 实验方法
7.3.1 罗非鱼皮胶原蛋白肽分子量的测定方法
7.3.2 罗非鱼皮胶原蛋白肽中钙含量的测定
7.3.3 罗非鱼皮胶原蛋白肽-钙螯合物基本制备方法
7.3.4 罗非鱼皮胶原蛋白肽-钙螯合物制备工艺优化
7.3.5 钙螯合率的测定
7.3.6 胶原蛋白肽螯合钙的结构表征
7.3.7 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物的稳定性研究
7.3.8 罗非鱼鱼鳞肽钙螯合物中钙结合量的测定方法
7.4 结果与讨论
7.4.1 罗非鱼皮胶原蛋白肽分子量分布测定结果
7.4.2 罗非鱼胶原蛋白肽含钙量的测定结果
7.4.3 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物制备工艺单因素实验结果及分析
7.4.4 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物制备工艺响应面优化试验结果及分析
7.4.5 胶原蛋白肽钙螯合物结构表征
7.4.6 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物稳定性研究
7.4.7 罗非鱼皮胶原蛋白肽钙螯合物体外促钙吸收效果
7.5 本章小节
结论与展望
一、结论
二、主要创新点
三、展望
参考文献
攻读博士学位期间取得的研究成果
致谢
附件
本文编号：3752550
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/qgylw/3752550.html
