燕麦多肽抗氧化活性及其调控路径的初步研究
发布时间：2023-03-22 18:09
外界环境中的各种辐射、空气污染、重金属超标以及有机药剂等都会使机体产生过量的自由基导致生物大分子的氧化损伤,这种氧化损伤的积累最终导致机体生理功能的衰退。因此在日常生活中合理摄取外源性抗氧化剂十分必要。燕麦是一种药食兼用作物,在我国产量高,价格相对低廉,容易获得。燕麦多肽具有抗氧化、延缓衰老的作用,但燕麦多肽在体内对氧化损伤的防护作用及其机制还不清楚。本研究采用酶解法,以还原力和多肽得率为指标优化制备燕麦多肽的工艺条件。在此基础上,建立D-半乳糖氧化损伤大鼠模型,研究燕麦多肽的体内抗氧化效果,并运用RNA-Seq技术探究其抗氧化的分子机制。主要研究结果如下:(1)根据单因素和响应面优化试验,确定制备燕麦多肽的最佳工艺条件为:碱性蛋白酶Alcalase 2.4L FG用量为1.68 mL/L,底物浓度为10%,pH为9.84,温度55℃,酶解时间为94 min。在此条件下制备的燕麦多肽还原力达到1.10,多肽得率为17.02%。(2)通过建立D-半乳糖氧化损伤大鼠模型,研究燕麦多肽的体内抗氧化功能。结果显示:与对照组(NG)相比,模型组(MG)的丙二醛(MDA)含量、羰基含量、谷胱甘肽(...
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩写词对照表
第一章 绪论
1.1 研究背景及意义
1.1.1 研究背景
1.1.2 研究目的和意义
1.2 氧化损伤与防护的研究进展
1.2.1 氧化损伤的机制
1.2.1.1 DNA的损伤
1.2.1.2 蛋白质的损伤
1.2.1.3 脂质的损伤
1.2.2 氧化损伤防护的研究进展
1.2.2.1 抗氧化酶研究进展
1.2.2.2 抗氧化物研究进展
1.2.3 氧化损伤的动物模型
1.3 多肽的研究进展
1.3.1 多肽的来源
1.3.2 常见多肽制备方法及特点
1.3.3 多肽的研究现状
1.3.3.1 多肽的功能
1.3.3.2 多肽的应用
1.3.4 抗氧化肽的研究进展
1.3.4.1 抗氧化肽的制备及来源
1.3.4.2 燕麦抗氧化肽
1.3.4.3 抗氧化肽的活性评价
1.4 转录组测序技术
1.4.1 转录组测序技术概况
1.4.2 转录组测序技术的应用
第二章 燕麦多肽的制备及其工艺优化
2.1 前言
2.2 材料与设备
2.2.1 试验材料
2.2.2 试验设备
2.3 试验方法
2.3.1 燕麦蛋白的提取
2.3.2 碱性蛋白酶水解燕麦蛋白工艺的优化
2.3.2.1 碱性蛋白酶水解燕麦蛋白单因素优化试验
2.3.2.2 碱性蛋白酶水解燕麦蛋白的响应面工艺优化
2.3.3 还原力的测定方法
2.3.4 多肽得率的测定方法
2.4 结果分析与讨论
2.4.1 燕麦蛋白的常规成分测定
2.4.2 燕麦多肽制备的单因素结果分析
2.4.2.1 加酶量对酶解效果的影响
2.4.2.2 温度对酶解效果的影响
2.4.2.3 底物浓度对酶解效果的影响
2.4.2.4 pH对酶解效果的影响
2.4.2.5 酶解时间对酶解效果的影响
2.4.3 响应面试验结果及方差分析
2.4.3.1 响应面法优化
2.4.3.2 响应面分析与最佳工艺条件的确定
2.4.3.3 最优条件验证
2.5 本章小结
第三章 燕麦多肽的抗氧化功能研究
3.1 前言
3.2 材料与设备
3.2.1 试验材料
3.2.2 试验设备
3.3 试验方法
3.3.1 燕麦多肽的制备
3.3.2 试验动物及分组
3.3.3 旷场实验
3.3.4 血清、脏器的采集
3.3.5 血清、脏器样品的预处理
3.3.6 指标测定
3.3.6.1 肝脏组织匀浆中蛋白质含量测定
3.3.6.2 抗氧化指标的测定
3.3.6.3 组织病理学观察
3.3.7 数据统计
3.4 结果分析与讨论
3.4.1 体重变化分析
3.4.2 MDA含量变化分析
3.4.3 羰基含量变化分析
3.4.4 GSH含量变化分析
3.4.5 抗氧化酶活性分析
3.4.5.1 血清抗氧化酶活性分析
3.4.5.2 肝脏抗氧化酶活性分析
3.4.6 组织病理学结果分析
3.4.7 旷场实验
3.5 本章小结
第四章 燕麦多肽抗氧化效果的转录组学分析
4.1 前言
4.2 材料与设备
4.2.1 试验材料
4.2.2 试验设备
4.3 试验方法
4.3.1 总RNA提取
4.3.2 转录组文库制备
4.3.3 差异表达基因的筛选
4.3.4 差异基因表达模式聚类分析
4.3.5 表达谱数据的定量PCR验证
4.4 结果与讨论
4.4.1 总RNA质量的检测结果
4.4.2 过滤后的Reads质量统计
4.4.3 测序饱和度分析
4.4.4 差异表达基因的筛选
4.4.5 GO功能富集分析
4.4.6 Pathway显著性富集分析
4.4.7 差异基因的功能分析
4.4.8 表达谱数据的定量PCR验证
4.5 本章小结
第五章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间科研成果
本文编号：3767341
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
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摘要
abstract
中英文缩写词对照表
第一章 绪论
1.1 研究背景及意义
1.1.1 研究背景
1.1.2 研究目的和意义
1.2 氧化损伤与防护的研究进展
1.2.1 氧化损伤的机制
1.2.1.1 DNA的损伤
1.2.1.2 蛋白质的损伤
1.2.1.3 脂质的损伤
1.2.2 氧化损伤防护的研究进展
1.2.2.1 抗氧化酶研究进展
1.2.2.2 抗氧化物研究进展
1.2.3 氧化损伤的动物模型
1.3 多肽的研究进展
1.3.1 多肽的来源
1.3.2 常见多肽制备方法及特点
1.3.3 多肽的研究现状
1.3.3.1 多肽的功能
1.3.3.2 多肽的应用
1.3.4 抗氧化肽的研究进展
1.3.4.1 抗氧化肽的制备及来源
1.3.4.2 燕麦抗氧化肽
1.3.4.3 抗氧化肽的活性评价
1.4 转录组测序技术
1.4.1 转录组测序技术概况
1.4.2 转录组测序技术的应用
第二章 燕麦多肽的制备及其工艺优化
2.1 前言
2.2 材料与设备
2.2.1 试验材料
2.2.2 试验设备
2.3 试验方法
2.3.1 燕麦蛋白的提取
2.3.2 碱性蛋白酶水解燕麦蛋白工艺的优化
2.3.2.1 碱性蛋白酶水解燕麦蛋白单因素优化试验
2.3.2.2 碱性蛋白酶水解燕麦蛋白的响应面工艺优化
2.3.3 还原力的测定方法
2.3.4 多肽得率的测定方法
2.4 结果分析与讨论
2.4.1 燕麦蛋白的常规成分测定
2.4.2 燕麦多肽制备的单因素结果分析
2.4.2.1 加酶量对酶解效果的影响
2.4.2.2 温度对酶解效果的影响
2.4.2.3 底物浓度对酶解效果的影响
2.4.2.4 pH对酶解效果的影响
2.4.2.5 酶解时间对酶解效果的影响
2.4.3 响应面试验结果及方差分析
2.4.3.1 响应面法优化
2.4.3.2 响应面分析与最佳工艺条件的确定
2.4.3.3 最优条件验证
2.5 本章小结
第三章 燕麦多肽的抗氧化功能研究
3.1 前言
3.2 材料与设备
3.2.1 试验材料
3.2.2 试验设备
3.3 试验方法
3.3.1 燕麦多肽的制备
3.3.2 试验动物及分组
3.3.3 旷场实验
3.3.4 血清、脏器的采集
3.3.5 血清、脏器样品的预处理
3.3.6 指标测定
3.3.6.1 肝脏组织匀浆中蛋白质含量测定
3.3.6.2 抗氧化指标的测定
3.3.6.3 组织病理学观察
3.3.7 数据统计
3.4 结果分析与讨论
3.4.1 体重变化分析
3.4.2 MDA含量变化分析
3.4.3 羰基含量变化分析
3.4.4 GSH含量变化分析
3.4.5 抗氧化酶活性分析
3.4.5.1 血清抗氧化酶活性分析
3.4.5.2 肝脏抗氧化酶活性分析
3.4.6 组织病理学结果分析
3.4.7 旷场实验
3.5 本章小结
第四章 燕麦多肽抗氧化效果的转录组学分析
4.1 前言
4.2 材料与设备
4.2.1 试验材料
4.2.2 试验设备
4.3 试验方法
4.3.1 总RNA提取
4.3.2 转录组文库制备
4.3.3 差异表达基因的筛选
4.3.4 差异基因表达模式聚类分析
4.3.5 表达谱数据的定量PCR验证
4.4 结果与讨论
4.4.1 总RNA质量的检测结果
4.4.2 过滤后的Reads质量统计
4.4.3 测序饱和度分析
4.4.4 差异表达基因的筛选
4.4.5 GO功能富集分析
4.4.6 Pathway显著性富集分析
4.4.7 差异基因的功能分析
4.4.8 表达谱数据的定量PCR验证
4.5 本章小结
第五章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间科研成果
本文编号：3767341
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/qgylw/3767341.html
