淀粉链键接方式酶法重构与性质研究
发布时间：2023-03-23 19:39
淀粉作为我国居民日常米面主食的典型组分,是机体能量摄入的主要来源,其品质直接影响着机体健康。通过酶法改性淀粉,可以提升淀粉的抗消化性能,进而提升淀粉的品质。糖基转移酶(GTase)具有断裂α-1,4糖苷键、形成其它糖苷键的水解转苷催化特性,是增强淀粉抗消化性能的一种重要酶类。本课题用来源于Azotobacter chroococcum ATCC 4412(嗜铬固氮菌ATCC 4412)的GTase对dian分进行酶法改性,首先GTase的酶学性质和重构淀粉链的作用机理,接着以麦芽糊精(MD)为底物制备难消化糊精,并对难消化糊精的理化性质进行研究,最后对难消化糊精影响Caco-2细胞吸收转运葡萄糖和肠道益生功能进行评价。首先,通过分子生物学方法诱导表达了来源于A.chroococcum ATCC 4412的GTase并研究了其酶学性质。结果表明:GTase的最适pH为6.5-7.0,最适温度为55°C,热变性温度为62°C。1 mmol/L的Ca2+能使GTase的酶活提高2.44倍。GTase的酶活遵循米氏方程的动力学行为,催化效率(kcat...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩写符号说明
1 绪论
1.1 淀粉改性研究
1.1.1 淀粉结构与功能
1.1.2 物理改性
1.1.3 化学改性
1.1.4 酶改性
1.2 GTase的研究
1.2.1 GTase简介
1.2.2 GTase的结构
1.2.3 GTase的催化机理
1.3 膳食纤维的生理功能研究
1.3.1 调节血清中的血脂
1.3.2 控制血糖浓度
1.3.3 降低结肠癌发病率
1.3.4 提高免疫调节功能
1.4 课题研究背景及意义
1.5 课题主要研究内容
2 材料与方法
2.1 主要材料与试剂
2.2 主要仪器与设备
2.3 实验方法
2.3.1 重组菌的构建
2.3.2 GTase的制备
2.3.3 系统发育分析和序列对比
2.3.4 GTase的酶学性质研究
2.3.5 酶改性对淀粉/麦芽糊精结构特性的影响
2.3.6 难消化糊精的制备
2.3.7 难消化糊精的理化性质
2.3.8 难消化糊精对Caco-2细胞吸收、转运葡萄糖的影响
2.3.9 难消化糊精的体外模拟发酵研究
2.4 统计分析
3 结果与讨论
3.1 GTase的表达与纯化
3.2 进化树与保守序列分析
3.2.1 进化树分析
3.2.2 保守序列分析
3.3 GTase的酶学性质
3.3.1 GTase的热变性温度研究
3.3.2 p H对 GTase酶活力的影响
3.3.3 温度对GTase酶活力的影响
3.3.4 金属离子对GTase酶活力的影响
3.3.5 GTase的反应动力学研究
3.4 GTase改性对淀粉/麦芽糊精的影响
3.4.1 薄层色谱
3.4.2 GTase改性对淀粉/麦芽糊精相对分子质量的影响
3.4.3 GTase改性对淀粉/麦芽糊精糖苷键的影响
3.4.4 GTase改性对淀粉/麦芽糊精结构的影响
3.4.5 GTase最适作用底物分析
3.4.6 GTase重构淀粉链键接方式机理研究
3.5 难消化糊精的制备
3.5.1 HPLC监测难消化糊精的制备过程
3.5.2 HPSEC-MALL-RI分析难消化糊精制备过程
3.5.3 难消化糊精制备过程中结构的变化
3.5.4 难消化糊精制备过程中消化特性的变化
3.6 难消化糊精的理化特性
3.6.1 难消化糊精的粒径分析
3.6.2 难消化糊精的流变特性
3.6.3 难消化糊精的热力学特性
3.6.4 难消化糊精的稳定性分析
3.6.5 难消化糊精的消化动力学分析
3.7 难消化糊精对葡萄糖跨膜转运的影响
3.7.1 难消化糊精的细胞毒性
3.7.2 难消化糊精对Caco-2细胞吸收葡萄糖的影响
3.7.3 难消化糊精对Caco-2细胞转运葡萄糖的影响
3.7.4 难消化糊精对Caco-2细胞葡萄糖转运体表达的影响
3.8 难消化糊精的体外发酵分析
3.8.1 难消化糊精对肠道细菌增殖和发酵液pH的分析
3.8.2 难消化糊精对SCFAs产量的影响
主要结论与展望
主要结论
展望
文章创新点
致谢
参考文献
附录 Ⅰ
附录 Ⅱ:作者在攻读硕士学位期间发表的论文
本文编号：3768623
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩写符号说明
1 绪论
1.1 淀粉改性研究
1.1.1 淀粉结构与功能
1.1.2 物理改性
1.1.3 化学改性
1.1.4 酶改性
1.2 GTase的研究
1.2.1 GTase简介
1.2.2 GTase的结构
1.2.3 GTase的催化机理
1.3 膳食纤维的生理功能研究
1.3.1 调节血清中的血脂
1.3.2 控制血糖浓度
1.3.3 降低结肠癌发病率
1.3.4 提高免疫调节功能
1.4 课题研究背景及意义
1.5 课题主要研究内容
2 材料与方法
2.1 主要材料与试剂
2.2 主要仪器与设备
2.3 实验方法
2.3.1 重组菌的构建
2.3.2 GTase的制备
2.3.3 系统发育分析和序列对比
2.3.4 GTase的酶学性质研究
2.3.5 酶改性对淀粉/麦芽糊精结构特性的影响
2.3.6 难消化糊精的制备
2.3.7 难消化糊精的理化性质
2.3.8 难消化糊精对Caco-2细胞吸收、转运葡萄糖的影响
2.3.9 难消化糊精的体外模拟发酵研究
2.4 统计分析
3 结果与讨论
3.1 GTase的表达与纯化
3.2 进化树与保守序列分析
3.2.1 进化树分析
3.2.2 保守序列分析
3.3 GTase的酶学性质
3.3.1 GTase的热变性温度研究
3.3.2 p H对 GTase酶活力的影响
3.3.3 温度对GTase酶活力的影响
3.3.4 金属离子对GTase酶活力的影响
3.3.5 GTase的反应动力学研究
3.4 GTase改性对淀粉/麦芽糊精的影响
3.4.1 薄层色谱
3.4.2 GTase改性对淀粉/麦芽糊精相对分子质量的影响
3.4.3 GTase改性对淀粉/麦芽糊精糖苷键的影响
3.4.4 GTase改性对淀粉/麦芽糊精结构的影响
3.4.5 GTase最适作用底物分析
3.4.6 GTase重构淀粉链键接方式机理研究
3.5 难消化糊精的制备
3.5.1 HPLC监测难消化糊精的制备过程
3.5.2 HPSEC-MALL-RI分析难消化糊精制备过程
3.5.3 难消化糊精制备过程中结构的变化
3.5.4 难消化糊精制备过程中消化特性的变化
3.6 难消化糊精的理化特性
3.6.1 难消化糊精的粒径分析
3.6.2 难消化糊精的流变特性
3.6.3 难消化糊精的热力学特性
3.6.4 难消化糊精的稳定性分析
3.6.5 难消化糊精的消化动力学分析
3.7 难消化糊精对葡萄糖跨膜转运的影响
3.7.1 难消化糊精的细胞毒性
3.7.2 难消化糊精对Caco-2细胞吸收葡萄糖的影响
3.7.3 难消化糊精对Caco-2细胞转运葡萄糖的影响
3.7.4 难消化糊精对Caco-2细胞葡萄糖转运体表达的影响
3.8 难消化糊精的体外发酵分析
3.8.1 难消化糊精对肠道细菌增殖和发酵液pH的分析
3.8.2 难消化糊精对SCFAs产量的影响
主要结论与展望
主要结论
展望
文章创新点
致谢
参考文献
附录 Ⅰ
附录 Ⅱ:作者在攻读硕士学位期间发表的论文
本文编号：3768623
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