基于蛋白质组学的鱼类过敏原检测方法研究

发布时间：2023-03-29 03:27

　　鱼类中富含丰富的蛋白质,其中蕴含着多种已知和未知的过敏原。这些过敏原蛋白质对消化酶常常具有抵抗作用,研究鱼类蛋白质在体外模拟胃液消化中的稳定性对预测蛋白是否具有致敏性具有重要的参考价值。本文通过体外模拟胃液消化得到牙鲆鱼和大黄鱼蛋白质酶解液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、介孔材料分离富集两种鱼蛋白酶解液中耐消化的蛋白质。结合蛋白质组学及蛋白质序列同源性的分析方法,研究了牙鲆鱼和大黄鱼酶解液中含有的潜在过敏原,为食物中潜在过敏原的筛选提供参考。研究结果如下:(1)将提取的牙鲆鱼、大黄鱼蛋白质进行体外模拟胃液消化。通过SDS-PAGE凝胶电泳分离耐胃蛋白酶酶解的蛋白质,运用蛋白质组学的方法和高效液相色谱-串联质谱联用(HPLC-MS/MS)技术对蛋白质进行分析。在牙鲆鱼中共鉴定到5种耐胃蛋白酶酶解的蛋白质,大黄鱼中共鉴定到7种耐胃蛋白酶酶解的蛋白质。其中来源于牙鲆鱼的原肌球蛋白alpha-1以及来源于大黄鱼的原肌球蛋白alpha-1和alpha-4分别与已知过敏原Ore m 4的蛋白质序列进行对比,三组蛋白质的一致性分别为96.5%、81%和78%。相似性分别...

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 食物过敏原
        1.1.1 食物过敏反应机制
        1.1.2 水产品中主要的过敏原
        1.1.3 控制食物过敏的有效方法
        1.1.4 食物过敏原的检测方法
    1.2 蛋白质组学
        1.2.1 蛋白质组学概述
        1.2.2 蛋白质组学的研究策略
    1.3 介孔材料
    1.4 本文研究内容
第二章 液相色谱-串联质谱联用技术筛选鱼蛋白质中潜在过敏原
    2.1 引言
    2.2 试剂与仪器
        2.2.1 实验试剂
        2.2.2 实验仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 蛋白样品的制备
        2.3.2 对鱼蛋白进行体外模拟胃液消化
        2.3.3 SDS-PAGE凝胶电泳
        2.3.4 鱼蛋白的酶解与胶内酶解
        2.3.5 液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析
        2.3.6 数据检索与分析
        2.3.7 蛋白质同源性分析
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 鱼蛋白质体外模拟胃液消化
        2.4.2 鱼蛋白质的LC-MS/MS分析
        2.4.3 耐酶解蛋白质的LC-MS/MS分析
        2.4.4 鱼蛋白中耐消化蛋白质同源性分析
    2.5 小结
第三章 介孔材料对鱼类蛋白质酶解液吸附性能研究
    3.1 引言
    3.2 试剂与仪器
        3.2.1 实验试剂
        3.2.2 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 介孔材料的制备
        3.3.2 介孔材料的表征
        3.3.3 介孔材料对鱼蛋白质的吸附性能研究
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 介孔材料的表征
        3.4.2 介孔材料吸附性能的研究
    3.5 小结
第四章 介孔材料吸附法与超滤法分离富集耐酶解蛋白质
    4.1 引言
    4.2 试剂与仪器
        4.2.1 实验试剂
        4.2.2 实验仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 鱼蛋白质样品的制备
        4.3.2 鱼蛋白体外模拟胃液消化
        4.3.3 介孔材料的制备
        4.3.4 酶解液中耐酶解蛋白质的分离富集
        4.3.5 蛋白浓度的测定
        4.3.6 液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析
        4.3.7 数据检索与分析
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 蛋白浓度测定
        4.4.2 超滤法富集耐酶解蛋白质的LC-MS/MS分析
        4.4.3 介孔材料分离耐酶解蛋白质的LC-MS/MS分析
    4.5 小结
结论
参考文献
攻读硕士期间发表的论文
致谢



本文编号：3773897