水稻类受体蛋白激酶FLR1正向调控稻谷的储藏性能

发布时间：2023-03-29 20:41

　　稻谷储藏后的品质不仅取决于储藏环境和技术,更取决于储藏前的品质,这是由基因决定的。实验室前期研究发现类受体蛋白激酶FERONIA(FER)同源基因FLR1参与调控水稻淀粉合成并影响种子大小以及淀粉结构。本研究进一步比较FER野生型和突变株种子在人工老化试验条件下的发芽率,初步发现FER蛋白表达正向调控种子储藏性能。在此基础上,探寻水稻FLR1互作蛋白,并在大肠杆菌中表达重组FLR1蛋白,用纯化蛋白免疫大鼠,获得FLR1特异抗血清,为后续研究奠定基础。主要结果如下:(1)人工老化3-9天后,拟南芥FER基因突变后的fer4种子发芽率显著低于野生型种子老化后的发芽率。水稻FER同源基因FLR1过表达植株种子老化前发芽势和发芽率均低于野生型的,经过20天人工老化后,其发芽势和发芽率高于野生型的。说明FER/FLR1基因产物正向调控种子耐储性。(2)通过酵母双杂交文库筛选,得到了28个水稻FLR1结合蛋白,并通过体外实验证实了 7个蛋白与FLR1有互作。(3)为了获得FLR1抗体用于后续功能分析,将FLR1的N端和C端分别构建到表达载体pET-32a、pGEX-4T-1、pET-22b和pTr...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 稻谷储藏及影响储藏品质的因素
        1.1.1 储粮历史
        1.1.2 储粮现状
        1.1.3 影响储藏品质的因素
    1.2 RLK家族基因与水稻FLR基因
        1.2.1 RLK家族基因
        1.2.2 Feronia
        1.2.3 水稻OsFLR家族基因
    1.3 研究目的与意义
    1.4 本课题的研究基础及技术路线
        1.4.1 研究基础
        1.4.2 技术路线
2 材料和方法
    2.1 试剂和材料
        2.1.1 主要材料
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 试剂配制
        2.1.4 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 种子老化发芽实验
        2.2.2 生物信息分析
        2.2.3 水稻材料的种植
        2.2.4 互作蛋白筛选及验证
        2.2.5 基因克隆与载体构建
        2.2.6 蛋白质表达及纯化
        2.2.7 抗体制备及验证
3 实验结果
    3.1 水稻FLR1与稻谷储藏
        3.1.1 拟南芥fer4突变种子影响种子耐储性能
        3.1.2 生物信息分析
        3.1.3 水稻种子发芽
    3.2 酵母筛库
        3.2.1 互作蛋白筛选结果
        3.2.2 互作验证结果
    3.3 水稻FLR1的抗体制备及验证
        3.3.1 OsFLR1基因克隆
        3.3.2 OsFLR1蛋白表达及纯化
        3.3.3 OsFLR1抗体验证
4 讨论
5 结论
6 展望
7 课题创新点
参考文献
致谢



本文编号：3774438