海带酶解工艺的优化及酶解产物的提取和检测
发布时间：2023-04-23 04:32
随着海洋科学的发展,海洋中的藻类及其衍生物海藻多糖因为具有较强的生物活性、开发价值和应用前景被科学界日益关注。但由于其易凝特点,在应用上受到限制,而其降解产物海藻寡糖分子量较小,易于被动植物利用,弥补了海藻多糖在应用上缺陷,因海藻寡糖多数靠海藻酸裂解酶降解海藻多糖而得到,因此本文主要研究酶解法制备海藻寡糖工艺优化,酶解液中海藻寡糖的提取,酶解液中海藻寡糖的定性、定量检测,酶解液中植物激素的定性定量检测。(1)海藻酸裂解酶粗酶液的制备及酶解条件的优化海藻酸裂解酶酶活检测:分别选取海藻裂解75%、100%、100%放置1 d、100%放置2 d、100%放置3 d提取粗酶液按10%的量加入到海带富集培养基中培养4 d,每天检测酶活并观察海带裂解情况,结果显示当海藻裂解75%时酶活较高且能使海带完全液化。因此通过以上实验可以确定海藻酸裂解酶应在海藻分解75%时提取且此时活性较好。酶解条件优化:实验通过对海藻酸裂解酶在不同的海带裂解培养基、震荡时间及海带浓度等4个方向上综合分析得到海藻酸裂解酶在有无机盐离子例如:硫酸铵、氯化钠等的培养基中海藻酸裂解酶活性相对较高且海藻寡糖的产量也是最高。酶解反...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
1 引言
1.1 海藻寡糖
1.1.1 海藻寡糖
1.1.2 海藻寡糖的应用
1.1.3 海藻寡糖制备方法
1.2 海藻酸裂解酶
1.3 海藻寡糖的检测方法
1.3.1 高效液相色谱法(HPLC)
1.3.2 硫酸-苯酚法
1.3.3 紫外分光检测法
1.4 植物激素检测
1.4.1 生长素:吲哚乙酸(IAA)
1.4.2 细胞分裂素:玉米素(Zeatin)、反式玉米核素(TZR)、异戊烯基腺苷(iP)、异戊烯基腺嘌呤(IPA)
1.4.3 脱落酸(ABA)
1.5 研究目的及意义
2 酶解法制备海藻寡糖工艺优化
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.1.1 样品
2.1.1.2 实验菌种
2.1.2 培养基
2.1.3 实验方法
2.1.3.1 海藻酸钠裂解酶粗酶液的提取方法
2.1.3.2 海藻酸钠裂解酶酶活及海藻寡糖的含量的检测方法
2.1.3.3 不同发酵产酶时间对酶解反应的影响
2.1.3.4 酶解液不同成分对酶解反应的影响
2.1.3.5 不同温度与摇动时间对酶解反应的影响
2.1.3.6 不同海带浓度对酶解反应的影响
2.2 结果
2.2.1 检测S1菌种在富集培养基中的活性
2.2.2 酶解反应体系的最佳成分
2.2.3 酶解反应的最适温度与摇动时间
2.2.4 酶解反应的最佳海带浓度
2.3 讨论
2.3.1 发酵工艺优化分析
2.3.2 小结
3 海带酶解产物中海藻寡糖的分离与提取
3.1 紫外吸收法
3.2 实验材料和试剂
3.3 实验方法
3.3.1 去除蛋白质
3.3.1.1 重金属盐使蛋白质变性析出
3.3.1.2 乙醇使蛋白质变性析出
3.3.2 透膜分离蛋白质
3.3.3 去除无机离子
3.3.4 多糖与寡糖的分离
3.4 实验结果
3.4.1 考马斯亮蓝和乙醇验证蛋白质析出
3.4.2 重金属盐使蛋白质变性析出
3.4.3 透膜分离蛋白质
3.5 小结
4 海带酶解液中海藻寡糖含量检测方法的建立
4.1 实验材料
4.2 实验方法
4.2.1 标准样品筛选
4.2.1.1 制备标准样品
4.2.1.2 标准品的选择
4.2.2 确定酶解液中海藻寡糖含量检测体系
4.2.3 温度对海藻寡糖检测结果的影响
4.2.4 沸水浴不同时间对海带酶解液中寡糖含量的影响
4.2.5 冰水浴水解不同时间对海带酶解液中海藻寡糖含量的影响
4.2.6 确定海带酶解液中海藻寡糖检测的方法
4.2.7 标准曲线的选择
4.2.7.1 标准曲线的确定
4.2.7.2 实验结果的计算
4.2.8 薄层层析(TLC)法测定海带酶解液中多糖
4.2.8.1 展开剂和显色剂
4.2.8.2 海带酶解液浓缩倍数的选择
4.2.8.3 海带酶解液pH值的选择
4.3 结果与讨论
4.3.1 确定海藻寡糖含量检测的方法
4.3.1.1 标准样品的确定
4.3.1.2 海藻寡糖检测体系的确定
4.3.1.3 温度和时间对海藻寡糖水解的影响
4.3.2 确定标准曲线
4.3.3 薄层层析(TLC)法测定海带酶解液中寡糖成分
4.3.3.1 海带酶解液浓缩倍数的选择
4.3.3.2 海带发酵液pH值的选择
4.3.4 讨论
5 海带酶解液中植物激素检测
5.1 样品及指标信息
5.1.1 样品
5.1.2 指标
5.2 试剂、标准品与仪器
5.2.1 试剂与标准品
5.2.1.1 试剂
5.2.1.2 流动相配置
5.3 实验方法
5.4 HPLC-MS/MS
5.4.1 液相条件
5.4.2 质谱参数
5.5 实验结果
5.5.1 生长素:吲哚乙酸(IAA)
5.5.2 细胞分裂素(CTK)—玉米素(Zeatin)、反式玉米核素(TZR)、异戊烯基腺苷(iP)、异戊烯基腺嘌呤(iPA)
5.5.2.1 玉米素(Zeatin)
5.5.2.2 反式玉米核素(TZR)
5.5.2.3 异戊烯基腺嘌呤(iP)
5.5.2.4 异戊烯基腺苷(iPA)
5.5.3 脱落酸(ABA)
5.6 六种激素检测结果
结论
展望
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
本文编号：3799096
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
1 引言
1.1 海藻寡糖
1.1.1 海藻寡糖
1.1.2 海藻寡糖的应用
1.1.3 海藻寡糖制备方法
1.2 海藻酸裂解酶
1.3 海藻寡糖的检测方法
1.3.1 高效液相色谱法(HPLC)
1.3.2 硫酸-苯酚法
1.3.3 紫外分光检测法
1.4 植物激素检测
1.4.1 生长素:吲哚乙酸(IAA)
1.4.2 细胞分裂素:玉米素(Zeatin)、反式玉米核素(TZR)、异戊烯基腺苷(iP)、异戊烯基腺嘌呤(IPA)
1.4.3 脱落酸(ABA)
1.5 研究目的及意义
2 酶解法制备海藻寡糖工艺优化
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.1.1 样品
2.1.1.2 实验菌种
2.1.2 培养基
2.1.3 实验方法
2.1.3.1 海藻酸钠裂解酶粗酶液的提取方法
2.1.3.2 海藻酸钠裂解酶酶活及海藻寡糖的含量的检测方法
2.1.3.3 不同发酵产酶时间对酶解反应的影响
2.1.3.4 酶解液不同成分对酶解反应的影响
2.1.3.5 不同温度与摇动时间对酶解反应的影响
2.1.3.6 不同海带浓度对酶解反应的影响
2.2 结果
2.2.1 检测S1菌种在富集培养基中的活性
2.2.2 酶解反应体系的最佳成分
2.2.3 酶解反应的最适温度与摇动时间
2.2.4 酶解反应的最佳海带浓度
2.3 讨论
2.3.1 发酵工艺优化分析
2.3.2 小结
3 海带酶解产物中海藻寡糖的分离与提取
3.1 紫外吸收法
3.2 实验材料和试剂
3.3 实验方法
3.3.1 去除蛋白质
3.3.1.1 重金属盐使蛋白质变性析出
3.3.1.2 乙醇使蛋白质变性析出
3.3.2 透膜分离蛋白质
3.3.3 去除无机离子
3.3.4 多糖与寡糖的分离
3.4 实验结果
3.4.1 考马斯亮蓝和乙醇验证蛋白质析出
3.4.2 重金属盐使蛋白质变性析出
3.4.3 透膜分离蛋白质
3.5 小结
4 海带酶解液中海藻寡糖含量检测方法的建立
4.1 实验材料
4.2 实验方法
4.2.1 标准样品筛选
4.2.1.1 制备标准样品
4.2.1.2 标准品的选择
4.2.2 确定酶解液中海藻寡糖含量检测体系
4.2.3 温度对海藻寡糖检测结果的影响
4.2.4 沸水浴不同时间对海带酶解液中寡糖含量的影响
4.2.5 冰水浴水解不同时间对海带酶解液中海藻寡糖含量的影响
4.2.6 确定海带酶解液中海藻寡糖检测的方法
4.2.7 标准曲线的选择
4.2.7.1 标准曲线的确定
4.2.7.2 实验结果的计算
4.2.8 薄层层析(TLC)法测定海带酶解液中多糖
4.2.8.1 展开剂和显色剂
4.2.8.2 海带酶解液浓缩倍数的选择
4.2.8.3 海带酶解液pH值的选择
4.3 结果与讨论
4.3.1 确定海藻寡糖含量检测的方法
4.3.1.1 标准样品的确定
4.3.1.2 海藻寡糖检测体系的确定
4.3.1.3 温度和时间对海藻寡糖水解的影响
4.3.2 确定标准曲线
4.3.3 薄层层析(TLC)法测定海带酶解液中寡糖成分
4.3.3.1 海带酶解液浓缩倍数的选择
4.3.3.2 海带发酵液pH值的选择
4.3.4 讨论
5 海带酶解液中植物激素检测
5.1 样品及指标信息
5.1.1 样品
5.1.2 指标
5.2 试剂、标准品与仪器
5.2.1 试剂与标准品
5.2.1.1 试剂
5.2.1.2 流动相配置
5.3 实验方法
5.4 HPLC-MS/MS
5.4.1 液相条件
5.4.2 质谱参数
5.5 实验结果
5.5.1 生长素:吲哚乙酸(IAA)
5.5.2 细胞分裂素(CTK)—玉米素(Zeatin)、反式玉米核素(TZR)、异戊烯基腺苷(iP)、异戊烯基腺嘌呤(iPA)
5.5.2.1 玉米素(Zeatin)
5.5.2.2 反式玉米核素(TZR)
5.5.2.3 异戊烯基腺嘌呤(iP)
5.5.2.4 异戊烯基腺苷(iPA)
5.5.3 脱落酸(ABA)
5.6 六种激素检测结果
结论
展望
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
本文编号：3799096
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