甲萘威化学发光免疫分析方法研究

发布时间：2023-10-27 17:32

　　化学发光免疫分析是结合了高灵敏度的化学发光与高特异性的免疫反应的微量分析技术。化学发光酶免疫分析是利用辣根过氧化物酶标记抗原或抗体,在体系中加入鲁米诺类物质产生发光反应,因其特异性强、灵敏度高、可实现痕量检测等特点,被广泛应用于基质中农药残留检测。甲萘威是氨基甲酸酯类农药的典型代表,具有中等毒性,在环境和农产品生产过程中易于残留,严重威胁人体健康。因此,发展和建立甲萘威的快速、高效化学发光免疫分析方法,不仅为氨基甲酸酯类农药的快速检测提供技术支撑,更为其它农药的免疫检测方法提供借鉴。本文主要的研究内容如下:1、研究甲萘威化学发光HRP-Luminol-H₂O₂体系。选择具有特异性吸附的HRP酶标记半抗原,进一步通过优化和比较发光体系的灵敏度、稳定性、检测限,建立了一种灵敏度高、特异性好甲萘威残留的直接竞争化学发光免疫分析方法。通过方阵法优化RLUmax/IC₅₀值,确定直接竞争CLEIA法抗体和酶标半抗原的最适工作浓度。结果表明:在HRP-Luminol-H₂O₂体系中,甲萘威...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 氨基甲酸酯类农药
        1.1.1 甲萘威的简介
        1.1.2 氨基甲酸酯类农药的简介
            1.1.2.1 化合物的分子结构及理化性质
            1.1.2.2 氨基甲酸酯类农药的作用机理及危害
        1.1.3 氨基甲酸酯类农药的检测技术
            1.1.3.1 色谱分析法
            1.1.3.2 酶抑制法
            1.1.3.3 免疫分析法
            1.1.3.4 生物传感器分析法
    1.2 化学发光免疫分析
        1.2.1 化学发光免疫分析的原理
        1.2.2 化学发光免疫分析的类型
            1.2.2.1 直接化学发光免疫分析
            1.2.2.2 化学发光酶免疫分析
            1.2.2.3 电化学发光免疫分析
        1.2.3 化学发光免疫分析方法的比较
        1.2.4 化学发光免疫分析技术的应用
            1.2.4.1 在食品安全方面的应用
            1.2.4.2 在医学临床分析方面的应用
            1.2.4.3 在环境方面的应用
    1.3 研究意义及内容
2 化学发光HRP-LUMINOL-H₂O₂ 体系的建立
    2.1 实验材料与方法
        2.1.1 实验仪器与试剂
        2.1.2 实验方法
            2.1.2.1 配置缓冲溶液
            2.1.2.2 甲萘威半抗原的合成
            2.1.2.3 甲萘威人工抗原的合成
            2.1.2.4 甲萘威偶联比的测定
            2.1.2.5 甲萘威抗体的制备
            2.1.2.6 抗体包被浓度及酶标半抗原浓度的确定
            2.1.2.7 CLEIA方法的建立步骤
            2.1.2.8 样品前处理
    2.2 结果与分析
        2.2.1 甲萘威偶联比的计算
        2.2.2 抗血清与包被原的结合效价的测定
        2.2.3 抗血清与包被原的结合效价的确定
        2.2.4 甲萘威抗体包被浓度及酶标半抗原稀释浓度的确立
        2.2.5 建立CLEIA方法的标准曲线
        2.2.6 添加回收试验
    2.3 本章小结
3 间接竞争CLEIA方法的建立
    3.1 实验材料与方法
        3.1.1 实验仪器与试剂
        3.1.2 实验方法
            3.1.2.1 配置缓冲溶液
            3.1.2.2 甲萘威标准溶液的配置
            3.1.2.3 方法的建立
            3.1.2.4 条件优化
            3.1.2.5 间接CLEIA竞争抑制曲线的建立
            3.1.2.6 样品前处理
    3.2 结果与分析
        3.2.1 最佳抗原和抗体稀释比
        3.2.2 甲醇最适浓度的确定
        3.2.3 确定酶标二抗的稀释倍数
        3.2.4 CLEIA标准曲线的建立
        3.2.5 添加回收实验
        3.2.6 方法比较
    3.3 本章小结
4 甲萘威CLEIA方法的确证
    4.1 实验材料与设备
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 设备仪器
        4.1.3 实验试剂
    4.2 实验方法
        4.2.1 样品处理
        4.2.2 样品提取液的净化
        4.2.3 色谱-质谱条件
        4.2.4 配置标准溶液
    4.3 结果与分析
        4.3.1 选择样品提取及净化条件
        4.3.2 优化质谱条件
        4.3.3 建立标准曲线
        4.3.4 添加回收率
    4.4 仪器方法确证
    4.5 本章小结
5 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录



本文编号：3856958