变性泡介导的链交换扩增方法在猪肉掺假检测及电场辅助核酸预处理中的应用研究
发布时间：2024-02-15 04:54
牛肉和羊肉因其较高的蛋白质含量和较低的脂肪含量,味道鲜美且营养丰富,但是由于牛羊的饲养成本高等因素,使得牛羊肉的价格比较高。由于猪肉的颜色和质地与羊肉或牛肉相似,因此被广泛用作这两种肉的替代品。未经声明在牛肉或羊肉中添加猪肉是欺诈行为,可能会严重威胁诸如穆斯林等消费者的种族选择或宗教习俗。随着中国人民生活水平的提高和中国食品工业的现代化,导致动物食品生产的需求和生产在不断增加。同时,为了追求更高的经济效益,食品制造商可能会用便宜的肉类代替昂贵的羊肉或牛肉,例如可食用的猪肉,鸡肉,鸭肉,马肉和不可食用的老鼠肉,狐狸肉等。随着肉制品掺假问题在全世界范围内变得日益突出,用简单的设备实现现场的肉制品掺假检测对于食品安全、宗教信仰等领域具有越来越重要的意义。目前已经开发出许多技术来鉴定其他肉类中的猪肉来源,例如形态学,光谱学,化学技术和蛋白质分析。这些方法的准确性高度依赖于经验和技能,并受复杂的食物基质的影响,因此通常很难从几种肉类混合物中检测出猪肉。基于核酸的分子技术,由于DNA分子具有更高的稳定性,对肉制品掺假检测更有优势,具有快速,高灵敏度和特异性的特点。然而,聚合酶链反应中热循环过程对实...
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
1.1 引言
1.2 肉制品中猪肉掺假的检测方法
1.2.1 光谱法
1.2.1.1 红外光谱法
1.2.1.2 拉曼光谱法
1.2.1.3 高光谱成像
1.2.1.4 激光诱导击穿光谱
1.2.2 蛋白质组学分析法
1.2.2.1 免疫分析法
1.2.2.2 MS技术
1.2.3 变温核酸扩增方法
1.2.4 等温核酸扩增方法
1.2.4.1 环介导等温扩增
1.2.4.2 依赖于解旋酶的等温核酸扩增
1.2.4.3 交叉引物等温扩增技术
1.2.4.4 重组酶聚合扩增
1.2.4.5 滚环扩增
1.2.4.6 指数等温扩增
1.2.4.7 单引物引发的核酸扩增反应
1.2.4.8 基于变性泡介导的链交换扩增
1.3 不同表征方法在猪肉核酸检测中的应用
1.4 本论文的研究意义与主要内容
第二章 等温核酸扩增反应对肉制品中猪肉掺假检测的研究
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 仪器与试剂
2.2.2 动物组织基因提取试剂盒法提取肉制品中的核酸
2.2.3 热裂解法肉制品基因组DNA的提取
2.2.4 琼脂糖凝胶电泳
2.2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.3 结果讨论
2.3.1 凝胶电泳方法对猪肉核酸提取效果的表征
2.3.2 基于变性泡介导的链交换扩增反应对猪肉掺假检测的研究
2.3.2.1 SEA方法检测猪源性成分特异性引物的温度优化实验
2.3.2.2 SEA方法对猪源性成分的可行性和特异性检测
2.3.2.3 SEA方法对猪源性成分的灵敏度检测
2.3.2.4 抗干扰检测
2.3.2.5 快速提取与基于变性泡介导的链交换扩增反应联用
2.3.2.6 SEA与其他检测方法的比较
2.4 小结
第三章 快速电化学核酸提取技术的初步探究
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 仪器与试剂
3.2.2 裸金电极的制备
3.2.3 生物传感器的组装
3.2.4 电化学测量
3.2.5 电场辅助杂交和电场辅助洗脱
3.2.6 采用实时荧光PCR技术对提取效果进行验证
3.3 结果与讨论
3.3.1 电场辅助杂交电压条件优化
3.3.2 电场辅助杂交时间条件优化
3.3.3 洗脱电场条件优化
3.3.4 复杂环境下电化学辅助杂交提取效果
3.4 小结
第四章 展望
4.1 基于变性泡介导的链交换扩增技术研究展望
4.2 基于电场辅助杂交的核酸提取方法研究展望
结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文目录
本文编号：3899241
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
1.1 引言
1.2 肉制品中猪肉掺假的检测方法
1.2.1 光谱法
1.2.1.1 红外光谱法
1.2.1.2 拉曼光谱法
1.2.1.3 高光谱成像
1.2.1.4 激光诱导击穿光谱
1.2.2 蛋白质组学分析法
1.2.2.1 免疫分析法
1.2.2.2 MS技术
1.2.3 变温核酸扩增方法
1.2.4 等温核酸扩增方法
1.2.4.1 环介导等温扩增
1.2.4.2 依赖于解旋酶的等温核酸扩增
1.2.4.3 交叉引物等温扩增技术
1.2.4.4 重组酶聚合扩增
1.2.4.5 滚环扩增
1.2.4.6 指数等温扩增
1.2.4.7 单引物引发的核酸扩增反应
1.2.4.8 基于变性泡介导的链交换扩增
1.3 不同表征方法在猪肉核酸检测中的应用
1.4 本论文的研究意义与主要内容
第二章 等温核酸扩增反应对肉制品中猪肉掺假检测的研究
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 仪器与试剂
2.2.2 动物组织基因提取试剂盒法提取肉制品中的核酸
2.2.3 热裂解法肉制品基因组DNA的提取
2.2.4 琼脂糖凝胶电泳
2.2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.3 结果讨论
2.3.1 凝胶电泳方法对猪肉核酸提取效果的表征
2.3.2 基于变性泡介导的链交换扩增反应对猪肉掺假检测的研究
2.3.2.1 SEA方法检测猪源性成分特异性引物的温度优化实验
2.3.2.2 SEA方法对猪源性成分的可行性和特异性检测
2.3.2.3 SEA方法对猪源性成分的灵敏度检测
2.3.2.4 抗干扰检测
2.3.2.5 快速提取与基于变性泡介导的链交换扩增反应联用
2.3.2.6 SEA与其他检测方法的比较
2.4 小结
第三章 快速电化学核酸提取技术的初步探究
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 仪器与试剂
3.2.2 裸金电极的制备
3.2.3 生物传感器的组装
3.2.4 电化学测量
3.2.5 电场辅助杂交和电场辅助洗脱
3.2.6 采用实时荧光PCR技术对提取效果进行验证
3.3 结果与讨论
3.3.1 电场辅助杂交电压条件优化
3.3.2 电场辅助杂交时间条件优化
3.3.3 洗脱电场条件优化
3.3.4 复杂环境下电化学辅助杂交提取效果
3.4 小结
第四章 展望
4.1 基于变性泡介导的链交换扩增技术研究展望
4.2 基于电场辅助杂交的核酸提取方法研究展望
结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文目录
本文编号：3899241
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