罗非鱼前脂肪细胞传代培养模型的建立及诱导分化

发布时间：2020-11-15 02:40

　　 本实验以尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)为实验对象,探索罗非鱼前脂肪细胞的诱导分化及传代培养方法。本论文首先设计不同的原代培养条件:培养时间、接种密度、换液方式,探索最佳的首次传代培养条件。实现传代后,通过比较不同血清、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、谷氨酰胺(Gln)对罗非鱼前脂肪细胞传代培养的影响,探索罗非鱼前脂肪细胞的新传代培养基,并对细胞进行了冻存、复苏,从而建立了罗非鱼前脂肪细胞传代培养模型。之后,本论文分析了传代培养的罗非鱼前脂肪细胞及在其他不同离体培养条件下(24小时离体培养;原代培养汇合期;原代诱导分化)的脂肪细胞与活体中脂肪组织的脂肪酸组成差异。研究发现,细胞离体培养时间越长,脂肪酸组成成分越少、越简单,但C16:0、C18:0、C18:1n-9和C18:2这4种脂肪酸一直存在且保持较高比例。罗非鱼脂肪组织里,不饱和脂肪酸比例显著高于饱和脂肪酸,其中,单不饱和脂肪酸含量最高。然而,体外培养的脂肪细胞里,饱和脂肪酸所占比重都高于不饱和脂肪酸。最后,本文探索了传代培养的罗非鱼前脂肪细胞的诱导分化方法。本文设计了四种诱导分化培养基:(1)培养基1:15%FBS+10μg/ml胰岛素+DMEM/F12;(2)培养基2:培养基1+1.0mmol/L DEX+0.5mmol/L IBMX;(3)培养基3:培养基2+0.4mmol/L吲哚美辛;(4)培养基4:培养基2+2μg/ml鳕鱼肝油脂肪酸(甲基酯)。12天后,采用油红染色比较观察细胞的生长状况,结果发现培养基4对细胞的诱导结果最佳。本论文工作建立了较为系统的罗非鱼前脂肪细胞的传代培养和分化诱导方法,并对体外培养的脂肪细胞与脂肪组织间的脂肪酸组成有了新的认识,为进一步开展罗非鱼脂代谢提供了可靠的细胞研究平台。
【学位单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：Q813.11
【部分图文】：

图 2-3-1 不同换液方式对罗非鱼前脂肪细胞原代培养的影响（A）不换液；（B）半数换液； （C）完全换液Picture 2-3-1 The effects of different medium exchange methods on primaryculture of preadipocytes in tilapia(A)No fluid exchange; (B) Half fluid exchange; (C) Complete fluid exchang由图，在罗非鱼前脂肪细胞原代培养时，不换液或半数换液对细胞的生长更为有利，其中以半数换液结果最佳，而完全换液组细胞反而生长不好，甚至不贴壁增值。2.3.2 罗非鱼前脂肪细胞首次传代前， 原代培养时间的确定（A）5 天

15 天 20 天图 2-3-2 罗非鱼前脂肪细胞不同原代培养时间的细胞生长情况Figure 2-3-2 The growth of preadipocytes of tilapia in different primary time如图 2-3-2，图 A、B、C、D 分别表示罗非鱼前脂肪细胞原代培养 5天、15 天、20 天时，细胞的生长状况，又分为低密度接种组（1×104）与接种组（2×105）。其中图 A、B 中左边均为高密度接种组，右边均为低密组；图 C、D 均为高密度接种组。由图可知，罗非鱼前脂肪细胞原代培养达到汇合期，之后分 2 种情况：（1）对于高密度接种组，随着培养时间增胞继续增值，细胞间接触十分紧密，出现覆层现象，但 15 天后细胞胞质逐渐变圆，不再贴壁，20 天左右细胞悬浮于培养皿中，此时首次传代时

-3罗非鱼前脂肪细
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本文编号：2884246