热、乙醇对枯草杆菌芽孢皮层裂解酶活力及结构的作用
发布时间：2020-12-07 21:28
乙醇协同热处理（60-80℃）能够杀灭芽孢,而热能够影响酶活力,高浓度乙醇能够钝化酶活力。所以推测,热和乙醇协同作用能够杀灭芽孢的原因很可能是其钝化了皮层裂解酶。因此,本文主要从热、乙醇以及乙醇结合热对枯草杆菌芽孢皮层裂解酶活力的影响,通过紫外吸收光谱、荧光光谱和傅立叶变换红外光谱等研究皮层裂解酶的结构变化,探讨热结合乙醇杀灭芽孢的机理。主要研究结果如下:对枯草杆菌芽孢皮层裂解酶进行热处理发现,皮层裂解酶最佳酶活为40℃,80℃使酶基本失活。紫外吸收光谱显示皮层裂解酶在280 nm左右出现吸收峰,且吸收强度均有不同,这与皮层裂解酶内的Trp残基和Tyr残基变化有关。荧光光谱显示,随着温度的增加,发射峰出现红移,并产生荧光热猝灭现象。当温度为40°C时,红移程度较小,三级结构相对稳定。当温度为80℃时,红移程度最大,三级结构最不稳定。热处理皮层裂解酶的红外光谱中,皮层裂解酶主要以β-转角为主,其次是β-折叠,α-螺旋和无规卷曲的含量较低。当温度范围在4-30℃时,α-螺旋含量和β-折叠随温度的升高几乎不变,二级结构含量变化较小,二级结构相对稳定。当温度为40℃时,β-折叠含量增加,其酶活...
【文章来源】：宁夏大学宁夏回族自治区 211工程院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１温度对皮层裂解酶活力的影响??Ｆｉｇ．?２－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｏｎ?ｃｏｒｔｅｘ－ｌｙｔｉｃ?ｅｎｚｙｍｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ??
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４５００?４０００?３５００?３０００?２５００?２０００?１５００?１０００?５００?０??據数／ｃｎｆ１??图２－５皮层裂解酶的傅里叶红外光谱图??Ｆｉｇ．?２－５?ＦＴＩＲ?ｏｆ?ｃｏｒｔｅｘ－ｌｙｔｉｃ?ｅｎｚｙｍｅ??Ｎ－Ｈ伸缩振动的吸收峰在３４００－３４４０?ｃｎ＾出现，它与氢键缔合后，向低波数发生位移［ｓｙ。由??图８可以看出，枯草杆菌皮层裂解酶在３４１５?ｃｎｒ１处有一个强吸收峰，这是由蛋白质中Ｎ－Ｈ伸缩??振动引起，Ｎ－Ｈ伸缩振动与氢键形成了缔合体，向低波数发生位移。枯草杆菌芽孢皮层裂解酶在??１６６５、１０８０、５２８?ｃｒｒｒ］波数处均有吸收峰，１６６５?ｃｍ－：１处的吸收峰是蛋白质的特征吸收峰，归属于??酰胺１带的Ｃ＝０伸缩振动引起，１０８０?ｃｎｒ１处的吸收峰是由蛋白质中Ｃ－０伸缩振动引起的。而５２８??ｃｍ－１处的吸收峰是由氨基酸的ＣＯＯ面外摇摆振动引起的［Ｓ３］。??（二）枯草杆菌皮层裂解酶酿胺Ｉ带（１６００－１?ＶＯＯｃｎｒ１）的拟合结果分析??００８｜－?Ｔ?０．２４ｒ??０?０７?－??ｉｊ４滅???Ｉ?｜?｜?｜?｜?｜?｜?｜?｜?｜??｜?！?｜?｜?｜??１６００?丨６］０?１６２０?１６３０?】６４０?１６５０?１６６０?丨６７０?１６８０?１６９０?】７００
【参考文献】：
期刊论文
[1]加热温度对混合肉肌原纤维蛋白质结构的影响[J]. 桂萍,罗永康,冯力更. 中国农业大学学报. 2018(05)
[2]枯草芽孢杆菌芽孢表面展示外源功能蛋白的应用[J]. 冯杰,王振华,潘康成. 动物营养学报. 2017(11)
[3]超声波、超高压对白鲢鱼肌肉脂肪氧合酶构象及酶活力的影响[J]. 王帮国,余振宇,林琳,潘丽军,姜绍通. 食品科学. 2018(03)
[4]微分干涉差显微成像方法高通量分析单个苏金云芽孢杆菌HD-1芽孢萌发[J]. 陈越,彭立新,王晓春,黎永青,刘军贤,王桂文. 分析化学. 2015(12)
[5]化学物质辅助超高压处理对枯草杆菌芽孢的作用[J]. 章中,杨宏伟,胡济美,胡小松,张燕,廖小军. 中国食品学报. 2015(05)
[6]芽孢杆菌芽孢内膜脂质的分离及图谱分析[J]. 董伟,沈清,张汉扬,余水静,邓扬悟,潘涛. 有色金属科学与工程. 2015(02)
[7]高压对花生分离蛋白物化特性和微观结构的影响[J]. 何轩辉,刘红芝,刘丽,胡晖,王强. 中国食品学报. 2014(08)
[8]乳酸对多酚氧化酶活性与构象的影响[J]. 方志超,周磊,刘伟,邹立强,熊志强. 食品工业科技. 2014(16)
[9]热处理对蘑菇多酚氧化酶活性及结构的影响[J]. 周磊,邹立强,刘伟,方志超,刘军平. 食品科学. 2014(17)
[10]温度、超声、nisin协同脉冲磁场杀灭枯草芽孢杆菌的研究[J]. 钱静亚,马海乐,李树君,刘斌,张弨. 现代食品科技. 2013(12)
博士论文
[1]蛋白质折叠/解折叠研究[D]. 谭翠燕.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院） 2007
硕士论文
[1]芽孢皮层裂解酶的提取纯化及高压热处理对其影响研究[D]. 孙静.宁夏大学 2018
[2]超高压结合理化因素对芽孢皮层肽聚糖作用的研究[D]. 张津瑜.宁夏大学 2018
[3]运用光学新技术探究理化因子对苏云金芽孢杆菌芽孢萌发的影响[D]. 何树祥.广西师范大学 2017
[4]乳酸—热处理对多酚氧化酶活性与构象的影响[D]. 方志超.南昌大学 2014
[5]蛋白酶在乙醇溶液中性质及其应用研究[D]. 刘玉芳.江南大学 2012
[6]动态高压微射流技术对胰蛋白酶和菠萝蛋白酶性质和构象变化的影响[D]. 张兆琴.南昌大学 2010
[7]莲藕多酚氧化酶的纯化及环境因素对其溶液构象的影响[D]. 胡婉峰.华中农业大学 2008
[8]鱼鳞酶溶性胶原蛋白的提取、特性及其二级结构的温度效应研究[D]. 钟朝辉.华中农业大学 2006
[9]应用圆二色光谱研究电场对蛋白质（酶）构象的影响[D]. 姚占全.内蒙古大学 2005
本文编号：2903927
【文章来源】：宁夏大学宁夏回族自治区 211工程院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１温度对皮层裂解酶活力的影响??Ｆｉｇ．?２－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｏｎ?ｃｏｒｔｅｘ－ｌｙｔｉｃ?ｅｎｚｙｍｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ??
４?２０?３０?４０?５０?６０?７０?８０??处理温度／＾：??图２－４温度对芽孢皮层裂解酶的巯基含量变化的影响??Ｆｉｇ．?２－４?Ｅｔｌ＇ｅｃｔ?ｏｆ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｏｎ?ｍｅｒｃａｐｔｏ?ｇｒｏｕｐ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｏｆ?ｓｐｏｒｅ?ｃｏｒｔｅｘ－ｌｙｔｉｃ?ｅｎｚｙｍｅ??巯基和二硫键在稳定蛋白质三级结构和保持蛋白质活性方面发挥主要作用，两者在一定程度??上互相转化可以反映蛋白质折叠和去折叠化。温度［７９］和压力［８Ｑ］处理都会引起巯基和二硫键的变??化。图２－４为不同温度对枯草杆菌芽孢皮层裂解酶巯基含量的变化影响。经热处理后的巯基含量??随着温度的上升先下降后上升。２０°Ｃ处理２０?ｍｍ后，枯草杆菌芽孢皮层裂解酶巯基含量为原酶的??９３．１％；当升温至４０°Ｃ处理２０?ｍｉｎ后，巯基含量降到最低，其巯基含量变为原酶的５１．５２％。随??后，随着温度的继续升高，枯草杆菌芽孢皮层裂解酶的巯基含量反而增加。何轩辉等报道对花??生分离蛋白超高压处理后，其巯基含量随压力增大呈现先增加后减小的趋势，这可能是由于暴露??出的巯基与其他基团组合形成二硫键导致。本实验中，热处理后的巯基含量随着温度的升高而降??低，可能是由于热处理引起蛋白质结构的改变，枯草杆菌芽孢皮层裂解酶表面的巯基与其他基团??组形成新的二硫键。当温度升高至４０°Ｃ时
４５００?４０００?３５００?３０００?２５００?２０００?１５００?１０００?５００?０??據数／ｃｎｆ１??图２－５皮层裂解酶的傅里叶红外光谱图??Ｆｉｇ．?２－５?ＦＴＩＲ?ｏｆ?ｃｏｒｔｅｘ－ｌｙｔｉｃ?ｅｎｚｙｍｅ??Ｎ－Ｈ伸缩振动的吸收峰在３４００－３４４０?ｃｎ＾出现，它与氢键缔合后，向低波数发生位移［ｓｙ。由??图８可以看出，枯草杆菌皮层裂解酶在３４１５?ｃｎｒ１处有一个强吸收峰，这是由蛋白质中Ｎ－Ｈ伸缩??振动引起，Ｎ－Ｈ伸缩振动与氢键形成了缔合体，向低波数发生位移。枯草杆菌芽孢皮层裂解酶在??１６６５、１０８０、５２８?ｃｒｒｒ］波数处均有吸收峰，１６６５?ｃｍ－：１处的吸收峰是蛋白质的特征吸收峰，归属于??酰胺１带的Ｃ＝０伸缩振动引起，１０８０?ｃｎｒ１处的吸收峰是由蛋白质中Ｃ－０伸缩振动引起的。而５２８??ｃｍ－１处的吸收峰是由氨基酸的ＣＯＯ面外摇摆振动引起的［Ｓ３］。??（二）枯草杆菌皮层裂解酶酿胺Ｉ带（１６００－１?ＶＯＯｃｎｒ１）的拟合结果分析??００８｜－?Ｔ?０．２４ｒ??０?０７?－??ｉｊ４滅???Ｉ?｜?｜?｜?｜?｜?｜?｜?｜?｜??｜?！?｜?｜?｜??１６００?丨６］０?１６２０?１６３０?】６４０?１６５０?１６６０?丨６７０?１６８０?１６９０?】７００
【参考文献】：
期刊论文
[1]加热温度对混合肉肌原纤维蛋白质结构的影响[J]. 桂萍,罗永康,冯力更. 中国农业大学学报. 2018(05)
[2]枯草芽孢杆菌芽孢表面展示外源功能蛋白的应用[J]. 冯杰,王振华,潘康成. 动物营养学报. 2017(11)
[3]超声波、超高压对白鲢鱼肌肉脂肪氧合酶构象及酶活力的影响[J]. 王帮国,余振宇,林琳,潘丽军,姜绍通. 食品科学. 2018(03)
[4]微分干涉差显微成像方法高通量分析单个苏金云芽孢杆菌HD-1芽孢萌发[J]. 陈越,彭立新,王晓春,黎永青,刘军贤,王桂文. 分析化学. 2015(12)
[5]化学物质辅助超高压处理对枯草杆菌芽孢的作用[J]. 章中,杨宏伟,胡济美,胡小松,张燕,廖小军. 中国食品学报. 2015(05)
[6]芽孢杆菌芽孢内膜脂质的分离及图谱分析[J]. 董伟,沈清,张汉扬,余水静,邓扬悟,潘涛. 有色金属科学与工程. 2015(02)
[7]高压对花生分离蛋白物化特性和微观结构的影响[J]. 何轩辉,刘红芝,刘丽,胡晖,王强. 中国食品学报. 2014(08)
[8]乳酸对多酚氧化酶活性与构象的影响[J]. 方志超,周磊,刘伟,邹立强,熊志强. 食品工业科技. 2014(16)
[9]热处理对蘑菇多酚氧化酶活性及结构的影响[J]. 周磊,邹立强,刘伟,方志超,刘军平. 食品科学. 2014(17)
[10]温度、超声、nisin协同脉冲磁场杀灭枯草芽孢杆菌的研究[J]. 钱静亚,马海乐,李树君,刘斌,张弨. 现代食品科技. 2013(12)
博士论文
[1]蛋白质折叠/解折叠研究[D]. 谭翠燕.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院） 2007
硕士论文
[1]芽孢皮层裂解酶的提取纯化及高压热处理对其影响研究[D]. 孙静.宁夏大学 2018
[2]超高压结合理化因素对芽孢皮层肽聚糖作用的研究[D]. 张津瑜.宁夏大学 2018
[3]运用光学新技术探究理化因子对苏云金芽孢杆菌芽孢萌发的影响[D]. 何树祥.广西师范大学 2017
[4]乳酸—热处理对多酚氧化酶活性与构象的影响[D]. 方志超.南昌大学 2014
[5]蛋白酶在乙醇溶液中性质及其应用研究[D]. 刘玉芳.江南大学 2012
[6]动态高压微射流技术对胰蛋白酶和菠萝蛋白酶性质和构象变化的影响[D]. 张兆琴.南昌大学 2010
[7]莲藕多酚氧化酶的纯化及环境因素对其溶液构象的影响[D]. 胡婉峰.华中农业大学 2008
[8]鱼鳞酶溶性胶原蛋白的提取、特性及其二级结构的温度效应研究[D]. 钟朝辉.华中农业大学 2006
[9]应用圆二色光谱研究电场对蛋白质（酶）构象的影响[D]. 姚占全.内蒙古大学 2005
本文编号：2903927
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