FAdV-4广西分离株全基因测序分析及其感染CEL和SPF鸡对细胞因子mRNA转录水平影响的研究

发布时间：2021-03-03 21:34

　　禽腺病毒血清4型（FAd V-4）是双链DNA病毒,基因组全长约43 kb,主要感染3～6周龄肉鸡,引起心包积水-肝炎综合征（HHS）,具有很强的传染性和致病性。自2014年以来,该病在我国呈暴发式流行,给养禽业带来巨大的经济损失。2016年起,广西多地养鸡场开始出现疑似该病的感染,但FAd V-4在广西地区的流行情况和对细胞因子影响的分析却鲜有报道。本研究从广西某养鸡场疑似FAd V-4感染的鸡肝脏中分离并鉴定出1株FAd V-4分离株FAd V-4-GX2017-005。对该毒株进行动物回归试验和全基因测序分析,并进一步用该毒株感染鸡胚肝细胞及SPF鸡,探究其对细胞因子转录水平的影响,为了解FAd V-4的流行情况提供数据参考,同时也为防控FAd V-4奠定基础。具体研究内容如下:本研究从广西地区疑似感染FAd V-4鸡中采集肝脏组织,经鸡胚肝细胞传代分离病毒、蚀斑纯化、再经FAd V-4 PCR鉴定、组织半数感染量测定和血清中和试验鉴定、动物回归试验等验证。PCR结果显示该毒株FAd V-4呈阳性,其他常见病原PCR检测结果为阴性;测序结果显示该毒株为FAd V-4,命名为:FA... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

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FAdV-4分离株感染CEL

广西大学硕士学位论文FAdV-4广西分离株全基因测序分析及其感染CEL和SPF鸡对细胞因子mRNA转录水平影响的研究16A:对照组;B:FAdV-4分离株的蚀斑A:Control;B:TheplaquemorphologyofFAdV-4isolated图2-2FAdV-4广西分离株在CEL上的蚀斑纯化Fig.2-2TheplaquemorphologyofGuangxiisolatedstrainFAdV-4-GX2017-005inCEL2.3.3病毒的鉴定对纯化后增殖的病毒液提取DNA和cDNA进行PCR鉴定，扩增产物与目的片段大小相符，REV、AIV（H5）、AIV（H7）、AIV（H9）、NDV、IBV、CIAV、ARV、IBDV、MDV和阴性尿囊液均不出现特异性扩增（图2-3）。将目的片段进行回收，克隆鉴定后测序，测序结果通过NCBI进行BLAST验证，表明为FAdV-4序列，将分离的毒株命名为FAdV-4-GX2017-005。M:100bpDNA分子量标准；1.FAdV-4；2.阴性对照；3.AEV；4.AIV（H5）；5.AIV（H7）；6.AIV（H9）；7.NDV；8.IBV；9.CIAV；10.ARV；11.IBDV；12.MDVM:100bpDNALadder(DyePlus);1.PCRproductofpositiveFAdV-4;2.Negativecontrol;3.AEV;4.AIV(H5);5.AIV(H7);6.AIV(H9);7.NDV;8.IBV;9.CIAV;10.ARV;11.IBDV;12.MDV图2-3分离株FAdV-4PCR鉴定Fig.2-3PCRamplificationofDNAfragmentforFAdV-4isolate

广西大学硕士学位论文FAdV-4广西分离株全基因测序分析及其感染CEL和SPF鸡对细胞因子mRNA转录水平影响的研究18基因的目的条带，表明FAdV-4-GX2017-005成功感染SPF鸡；病死鸡肝脏中也能检测到病毒hexon。每组的感染率和感染后的生存情况结果见表2-4和图2-4。A组3dpi出现呼吸困难、闭眼嗜睡等症状，5dpi内全部死亡；B组4dpi出现采食量减少、拉黄绿色稀粪的临床症状，5、6dpi共有5只SPF鸡死亡，7dpi时鸡群状况开始恢复，14dpi时与对照组无明显差异；C组部分SPF鸡只6dpi出现羽毛松乱的症状，6dpi时有1只SPF鸡死亡；D组在整个感染期间没有出现临床症状。临床症状结果见图2-5。对病死鸡及B组感染后第5天的活鸡进行剖检均可见有明显的心包积水，肝脏肿胀、表面红黄色、质脆，肾脏肿胀苍白，如图2-6（A~F），该剖检症状与自然感染发病的鸡的剖检症状一致。故后期试验采用105.5TCID50经滴鼻点眼途径感染SPF鸡。表2-4FAdV-4-GX2017-005感染SPF鸡后泄殖腔棉拭子病毒PCR检测情况Table2-4FAdV-4-GX2017-005PCRdetectionofcloacalswabvirusafterSPFchickeninfection分组接种剂量（0.2ml）PCR鉴定阳性比例PositiverateGroupsDose1dpi2dpi3dpi4dpi5dpi6dpi7dpi10dpi14dpiA106.5TCID5010/2010/1010/108/88/8B105.5TCID5010/1010/1010/1010/1010/107/75/55/55/5C104.5TCID5010/1010/1010/1010/1010/1010/109/99/99/9D103.5TCID5010/1010/1010/1010/1010/1010/1010/1010/1010/10EPBS---------图2-4FAdV-4-GX2017-005不同攻毒剂量的存活率Fig.2-4FAdV-4-GX2017-005survivalrateofdifferentattackingdose

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硕士论文
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本文编号：3061968