实时荧光定量PCR分析蒙古韭低温诱导叶片中内参基因的选择

发布时间：2021-03-05 06:07

　　实时荧光定量PCR （real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR）是广泛应用于基因表达分析的实验技术。在基因表达分析过程中,选择稳定表达的内参基因对实验结果的准确性非常重要。以低温诱导24 h和72 h蒙古韭（Allium mongolicum）的叶片为材料,无处理0 h叶片为对照,使用荧光定量PCR法分析了Am5S-rRNA、AmActin、AmGAPDH和AmEF1-α4个看家基因的表达情况。通过ge Norm和NormFinder程序分析,发现AmGAPDH稳定性最好,Am5S-r RNA和AmActin次之,AmEF1-α稳定性最差,因此选择AmGAPDH作为蒙古韭基因表达分析的内参基因。本研究通过qRT-PCR方法分析稳定表达的内参基因,对后续蒙古韭低温诱导基因表达分析有重要的意义。 

【文章来源】：基因组学与应用生物学. 2020,39(01)北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

蒙古韭叶片总RNA的电泳

实时荧光定量PCR技术已经成为基因表达分析研究常规技术之一(Huggett et al.,2005)。在实际实验过程中，由于RNA得率和浓度高低、反转录效率不同以及其他人为因素等导致目的基因表达分析结果出现偏差(Dorak,2006)，因此需要利用内参基因进行校正，从而产生相对准确的结果，缩小偏差(Nolan et al.,2006)。理论上来说，内参基因在植物发育的任何时期和任何部位都能稳定地表达，但实际上没有一种内参基因是始终稳定表达的，由于不同的实验条件、不同的研究材料、不同的处理条件下，理想的内参基因是不同的(Volkov et al.,2003)。因此我们在研究一种新的植物材料基因表达分析时，选择合适的稳定表达的内参基因至关重要。图3 利用GeNorm程序分析各内标基因的表达稳定值(M)

图2 利用定量PCR引物扩增目标基因对于不同的研究材料，以及相同研究材料不同研究内容，所选择的最适内参基因是不同的，找出合适的内参基因对于基因表达分析的准确性至关重要。而不能简单地通过总RNA的定量来分析基因的表达情况，因为总RNA定量容易受到残留DNA的污染，导致基因表达分析偏差较大。但是可以借助总RNA定量的方法为进行定量PCR的总RNA的反转录提供参考，使样品间的差异不会太大，使后续逆转录和PCR过程中尽可能减小误差，尽可能地准确反映内参基因的相对表达量(张艳君等,2007)。

【参考文献】：
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本文编号：3064710