副猪嗜血杆菌外膜囊泡蛋白质组分分析、致炎作用及lpxM基因缺失株构建的研究
发布时间：2021-03-26 20:00
副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,H.parasuis）是存在于猪上呼吸道的条件致病菌,猪感染H.parasuis时发病主要是一系列炎症反应,死亡率高达50%,每年给猪的养殖业造成巨大损失。外膜囊泡（Outer membrane vesicles,OMVs）能携带多种蛋白质、脂多糖等病原相关分子模式（PAMPs）进入宿主细胞,诱导细胞炎症反应甚至死亡。H.parasuis能分泌OMVs,但其生物学特性及对宿主细胞作用还鲜有研究。本研究以血清5型强毒株H45为研究对象,以密度梯度离心法提纯OMVs,观察其结构及测定其粒径,进行蛋白质组学分析;研究OMVs和H.parasuis对小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7的毒力和致炎作用,并研究caspase-11基因对OMVs介导细胞致炎作用的影响;利用同源重组技术构建H45的lpx M基因缺失株,研究该基因缺失对H45生长情况、抗血清杀菌能力、生物被膜形成能力、对细胞毒力作用和部分抗生素敏感性的影响。利用统计学方法对实验结果进行相关性分析,结果如下:1.从H45中提取的OMVs呈球形,粒径分布在60-70 nm之间,平均粒...
【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPS的结构及位置分布[111]
华南理工大学硕士学位论文20图2-1H45的鉴定及血清分型Fig.2-1theidentificationandserotypingofH45注：M为DL2000DNAMaker；1,+,-为鉴定是否为HPS，分别为H45、阳性对照和阴性对照（1090bp）；2,+,-为鉴定H45血清型，为别为H45、阳性对照和阴性对照（450bp）。2.4.2OMVs的SDS-PAGE电泳考马斯亮蓝染色结果将OMVs经密度梯度离心后，收集各个密度的样品进行SDS-PAGE电泳，并对蛋白胶进行考马斯亮染色，观察到蛋白质主要集中在2和3泳道，即20%和25%的密度层，少部分蛋白质集中在样品层，OMVs蛋白质主要大小集中在60kDa~75kDa和180kDa左右。图2-2OMVs各个密度梯度的SDS-PAGE电泳图Fig.2-2SDS-PAGEelectrophoresisdiagramofeachdensitygradientofOMVs注：M为310kDa大小的蛋白Maker；1-7分别为样品层、密度梯度20%、25%、30%、35%、40%和45%样品的SDS-PAGE电泳结果。
华南理工大学硕士学位论文20图2-1H45的鉴定及血清分型Fig.2-1theidentificationandserotypingofH45注：M为DL2000DNAMaker；1,+,-为鉴定是否为HPS，分别为H45、阳性对照和阴性对照（1090bp）；2,+,-为鉴定H45血清型，为别为H45、阳性对照和阴性对照（450bp）。2.4.2OMVs的SDS-PAGE电泳考马斯亮蓝染色结果将OMVs经密度梯度离心后，收集各个密度的样品进行SDS-PAGE电泳，并对蛋白胶进行考马斯亮染色，观察到蛋白质主要集中在2和3泳道，即20%和25%的密度层，少部分蛋白质集中在样品层，OMVs蛋白质主要大小集中在60kDa~75kDa和180kDa左右。图2-2OMVs各个密度梯度的SDS-PAGE电泳图Fig.2-2SDS-PAGEelectrophoresisdiagramofeachdensitygradientofOMVs注：M为310kDa大小的蛋白Maker；1-7分别为样品层、密度梯度20%、25%、30%、35%、40%和45%样品的SDS-PAGE电泳结果。
【参考文献】：
期刊论文
[1]脂多糖修饰对革兰阴性菌毒力及外膜囊泡生物学特性影响的研究进展[J]. 杨君,李冰,蔡汝健,宋帅,勾红潮,楚品品,卞志标,王令,闫鹤,李春玲. 动物医学进展. 2020(02)
[2]副猪嗜血杆菌vacJ基因缺失菌株构建及其生物学特性分析[J]. 赵良友,高雪丽,刘超男,申海龙,姜南,万伟泉,吕晓萍,郑世民. 华北农学报. 2017(05)
[3]嗜水气单胞菌外膜囊泡组分及功能分析[J]. 孙莉娜,姚祖杰,谭礼宁,李碗芯,胡文杰,林玲,林向民. 基因组学与应用生物学. 2015(12)
[4]副猪嗜血杆菌病的危害与防治[J]. 蔡旭旺,陈焕春,吴斌,刘正飞. 养殖与饲料. 2003(05)
博士论文
[1]副猪嗜血杆菌感染致炎症相关信号通路的研究[D]. 陈雨珊.华中农业大学 2016
硕士论文
[1]副猪嗜血杆菌dsbA基因缺失株的构建及功能研究[D]. 李兰颖.华中农业大学 2014
[2]副猪嗜血杆菌wza基因在其粘附和抗吞噬中的作用研究[D]. 曹瑞娟.华中农业大学 2014
[3]铜绿假单胞菌外膜囊泡的研究[D]. 张佳星.重庆医科大学 2014
本文编号：3102165
【文章来源】：华南理工大学广东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LPS的结构及位置分布[111]
华南理工大学硕士学位论文20图2-1H45的鉴定及血清分型Fig.2-1theidentificationandserotypingofH45注：M为DL2000DNAMaker；1,+,-为鉴定是否为HPS，分别为H45、阳性对照和阴性对照（1090bp）；2,+,-为鉴定H45血清型，为别为H45、阳性对照和阴性对照（450bp）。2.4.2OMVs的SDS-PAGE电泳考马斯亮蓝染色结果将OMVs经密度梯度离心后，收集各个密度的样品进行SDS-PAGE电泳，并对蛋白胶进行考马斯亮染色，观察到蛋白质主要集中在2和3泳道，即20%和25%的密度层，少部分蛋白质集中在样品层，OMVs蛋白质主要大小集中在60kDa~75kDa和180kDa左右。图2-2OMVs各个密度梯度的SDS-PAGE电泳图Fig.2-2SDS-PAGEelectrophoresisdiagramofeachdensitygradientofOMVs注：M为310kDa大小的蛋白Maker；1-7分别为样品层、密度梯度20%、25%、30%、35%、40%和45%样品的SDS-PAGE电泳结果。
华南理工大学硕士学位论文20图2-1H45的鉴定及血清分型Fig.2-1theidentificationandserotypingofH45注：M为DL2000DNAMaker；1,+,-为鉴定是否为HPS，分别为H45、阳性对照和阴性对照（1090bp）；2,+,-为鉴定H45血清型，为别为H45、阳性对照和阴性对照（450bp）。2.4.2OMVs的SDS-PAGE电泳考马斯亮蓝染色结果将OMVs经密度梯度离心后，收集各个密度的样品进行SDS-PAGE电泳，并对蛋白胶进行考马斯亮染色，观察到蛋白质主要集中在2和3泳道，即20%和25%的密度层，少部分蛋白质集中在样品层，OMVs蛋白质主要大小集中在60kDa~75kDa和180kDa左右。图2-2OMVs各个密度梯度的SDS-PAGE电泳图Fig.2-2SDS-PAGEelectrophoresisdiagramofeachdensitygradientofOMVs注：M为310kDa大小的蛋白Maker；1-7分别为样品层、密度梯度20%、25%、30%、35%、40%和45%样品的SDS-PAGE电泳结果。
【参考文献】：
期刊论文
[1]脂多糖修饰对革兰阴性菌毒力及外膜囊泡生物学特性影响的研究进展[J]. 杨君,李冰,蔡汝健,宋帅,勾红潮,楚品品,卞志标,王令,闫鹤,李春玲. 动物医学进展. 2020(02)
[2]副猪嗜血杆菌vacJ基因缺失菌株构建及其生物学特性分析[J]. 赵良友,高雪丽,刘超男,申海龙,姜南,万伟泉,吕晓萍,郑世民. 华北农学报. 2017(05)
[3]嗜水气单胞菌外膜囊泡组分及功能分析[J]. 孙莉娜,姚祖杰,谭礼宁,李碗芯,胡文杰,林玲,林向民. 基因组学与应用生物学. 2015(12)
[4]副猪嗜血杆菌病的危害与防治[J]. 蔡旭旺,陈焕春,吴斌,刘正飞. 养殖与饲料. 2003(05)
博士论文
[1]副猪嗜血杆菌感染致炎症相关信号通路的研究[D]. 陈雨珊.华中农业大学 2016
硕士论文
[1]副猪嗜血杆菌dsbA基因缺失株的构建及功能研究[D]. 李兰颖.华中农业大学 2014
[2]副猪嗜血杆菌wza基因在其粘附和抗吞噬中的作用研究[D]. 曹瑞娟.华中农业大学 2014
[3]铜绿假单胞菌外膜囊泡的研究[D]. 张佳星.重庆医科大学 2014
本文编号：3102165
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3102165.html
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