利用DNA重组技术生产L-苯丙氨酸的研究

发布时间：2021-03-29 11:30

　　L-苯丙氨酸（L-phenylalanine,L-Phe）是人体八大必须氨基酸之一,在人类的新陈代谢中起着重要的作用。而现在生产L-Phe的技术还远远满足不了市场的需求,本研究目的是利用DNA重组技术以及微生物发酵的方法提高L-Phe产量。研究方法包括利用易错PCR技术对rpo A基因进行点突变建立一个基因库,通过突变作用于rpo A的正常转录从而调控工程菌株产生L-Phe的量;利用质粒ptrc99a作为载体转化到感受态细胞中,并从中筛选出高产菌株;通过质粒的构建、筛选、验证、发酵等一系列试验,结果表明工程菌株构建成功,为L-Phe规模化生产提供科学依据。 

【文章来源】：天津农学院学报. 2020,27(02)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

rpoA基因电泳凝胶结果

经发酵数据分析，从发酵开始到第26 h发酵菌株处于自身生长期，并没有L-苯丙氨酸产生，并且在第24 h溶氧达到40 mg/L时，开始与通气量耦联，此时温度调为38℃，从第28 h开始的取样中测得有L-苯丙氨酸的产量，最终经过66 h的发酵试验，L-苯丙氨酸的最终产量为41.75 g/L，见图2，与现有工程菌株34.68 g/L的产量相比有明显提升。4 讨论

【参考文献】：
期刊论文
[1]易错PCR研究进展及应用[J]. 高义平,赵和,吕孟雨,杨学举,王海波.  核农学报. 2013(05)
[2]L-苯丙氨酸生产的代谢工程研究[J]. 贾红华,韦萍,何冰芳.  生物加工过程. 2004(02)
[3]荧光法测定发酵液中的苯丙氨酸含量[J]. 范长胜,陈力,余震,郑善良,杨仁根,周培林.  氨基酸杂志. 1989(02)

博士论文
[1]利用重组大肠杆菌生产L-色氨酸的研究[D]. 古鹏飞.山东大学 2013
[2]L-苯丙氨酸生产菌株的构建、代谢调控和发酵条件优化[D]. 周海岩.江南大学 2011



本文编号：3107472