保幼激素触发的卵黄原蛋白受体磷酸化及其膜定位

发布时间：2021-05-15 15:11

　　昆虫生殖期,发育中的卵巢吸收和储存大量卵黄原蛋白（Vitellogenin,Vg）作为卵母细胞成熟和胚胎发育的营养物质。该过程中,卵母细胞表面的卵黄原蛋白受体（Vitellogenin receptor,VgR）通过介导胞吞作用转运Vg至卵母细胞内。先前研究报道保幼激素（juvenile hormone,JH）通过蛋白激酶C（Protein kinase C,PKC）调控VgR介导的卵巢Vg吸收过程,但是其中的内分泌调控机制尚不明晰,特别是VgR如何响应JH-PKC信号通路并介导Vg吸收的机制不明。飞蝗（Locusta migratoria）是世界性虫灾防治对象,其卵黄发生由保幼激素主导,是保幼激素调控昆虫生殖发育研究的模式昆虫之一。我们使用飞蝗作为实验对象,利用RNAi、Western blot、免疫共沉淀、免疫组织化学等分子生物学和细胞生物学相关的技术手段,探究飞蝗保幼激素调控VgR介导Vg吸收的分子机制,以期阐明VgR响应JH-PKC信号转导通路并介导卵母细胞吸收Vg的分子调控机制。首先我们从飞蝗卵巢的转录组中筛选出了7种PKC亚型,分别进行RNA干扰,发现在对PKC delta... 

【文章来源】：河南大学河南省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 飞蝗的研究意义
        1.1.1 飞蝗的灾害性
        1.1.2 保幼激素研究的代表性昆虫
    1.2 保幼激素调控昆虫生殖
        1.2.1 保幼激素调控Vg表达和吸收
        1.2.2 卵黄原蛋白受体的研究进展
    1.3 保幼激素信号通路研究进展
        1.3.1 保幼激素的基因组转录调控
        1.3.2 保幼激素的非基因组信号通路
    1.4 拟解决的科学问题及实验方案
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验对象
        2.1.2 实验所用试剂
        2.1.3 实验常用仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 飞蝗卵巢RNA的提取
        2.2.2 cDNA反转录
        2.2.3 RNA干扰
        2.2.4 荧光定量PCR
        2.2.5 兔源多克隆抗体制备
        2.2.6 Western blot
        2.2.7 免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)
        2.2.8 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)
        2.2.9 PKC亚细胞定位
        2.2.10 免疫组织化学
        2.2.11 膜质蛋白分离
第三章 结果与分析
    3.1 证明PKC参与VgR的磷酸化调控
    3.2 保幼激素诱导PKC的亚细胞定位
    3.3 JH诱导PKC iota结合VgR
        3.3.1 飞蝗PKC的抗体制备
        3.3.2 检测与VgR有互作的蛋白激酶
    3.4 保幼激素通过PKC iota诱导VgR上细胞膜
    3.5 PKC激活VgR的丝氨酸位点磷酸化
    3.6 验证VgR被JH诱导上细胞膜具有保守性
第四章 讨论
    4.1 JH诱发VgR磷酸化和质-膜迁移介导Vg吸收
    4.2 JH-PKC信号通路调控VgR磷酸化
第五章 总结
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]我国飞蝗灾害的成因及防治[J]. 周晓钟.  生物学教学. 2003(04)



本文编号：3187858