发根农杆菌介导的荔枝LcMYB1转化烟草叶片的研究

发布时间：2021-06-21 10:21

　　利用荔枝果皮花青苷生物合成的关键调节基因LcMYB1为标记,构建植物表达载体pBA002-LcMYB1,电转法转入发根农杆菌A4菌株,通过叶盘法转化烟草K326。结果表明,烟草叶片侵染一周后长出白色的毛状根,约3周后部分毛状根逐渐变成红色,毛状根诱导率为100%,红色毛状根诱导率为19.9%。当筛选培养基中添加5 mg·L^-1 Basta,毛状根诱导率降低为33.3%,但红色毛状根诱导率提高到75%。高效液相色谱分析表明,红色毛状根中积累矢车菊素–3–葡萄糖苷和矢车菊素–3–芸香糖苷,PCR检测证实红色毛状根是由LcMYB1的转入引起的。实时荧光定量PCR表明转LcMYB1可以诱导烟草毛状根中花青苷生物合成相关的结构基因和调节基因表达。 

【文章来源】：园艺学报. 2020,47(04)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

pBA002-LcMYB1植物表达载体示意图

培养大约3周后，含空载体pBA002的发根农杆菌侵染诱导出来的毛状根始终呈现白色（图2,A），含pBA002-LcMYB1质粒的发根农杆菌侵染诱导的毛状根一部分从基部开始逐渐变成红色（图2,B）。在不含Basta的培养基上，获得的毛状根数量最多，但红色毛状根仅占19.9%;5 mg·L-1 Basta使毛状根的数量降低，但红色毛状根的占比提高到75.0%，表明5 mg·L-1 Basta可以作为筛选红色毛状根的适宜选择压力（表2）。将红色毛状根从外植体上切下来，放置在含5 mg·L-1 Basta的MS基本培养基上进行继代培养，可以诱导产生大量红色的毛状根（图2,C）。2.2 转LcMYB1基因烟草红色毛状根的PCR检测

对红色毛状根进行LcMYB1全长（846 bp）的PCR扩增检测，结果（图3）表明，所有红色毛状根都能扩增到与pBA002-LcMYB1阳性对照相同的条带，转空载的烟草长出的白色毛状根无条带，证实毛状根的红色是由LcMYB1的转入引起的。2.3 转LcMYB1基因烟草红色毛状根中花青苷的检测

【参考文献】：
期刊论文
[1]苋菜中甜菜红素代谢相关基因AmMYB2的表达与功能分析[J]. 彭丽云,王云,孙雪丽,王晓,赵春丽,王丛巧,项蕾蕾,陈家兰,赖钟雄,刘生财.  园艺学报. 2019(03)
[2]花青素转录因子调控机制及代谢工程研究进展[J]. 宋雪薇,魏解冰,狄少康,庞永珍.  植物学报. 2019(01)
[3]苹果花青苷调控基因MdMYB111的功能鉴定[J]. 杨官显,许海峰,张静,王楠,房鸿成,姜生辉,王意程,苏梦雨,陈学森.  园艺学报. 2019(05)
[4]发根农杆菌Ri质粒介导的植物基因工程及应用[J]. 吴萼,张瑞,张超,朱瑶,李晨曦,张娜娜,谌容,葛晓萍,谢恬,殷晓浦.  杭州师范大学学报(自然科学版). 2018(05)
[5]果实花青素生物合成分子机制研究进展[J]. 王华,李茂福,杨媛,金万梅.  植物生理学报. 2015(01)
[6]红皮梨花青苷调控基因PyMYBa的克隆与表达分析[J]. 孙莎莎,王楠,冀晓昊,冯守千,张宪省,吴树敬,李敏,王延玲,陈学森.  园艺学报. 2014(06)
[7]利用发根农杆菌诱导毛状根的研究进展[J]. 孟凡娟,王秋玉,谢立波,杨传平.  北方园艺. 2008(12)



本文编号：3240504