绿萍LmPDS基因RNAi载体的构建及遗传转化

发布时间：2021-06-25 18:05

　　PDS基因编码控制类胡萝卜素生物合成过程中的关键酶,其被沉默或抑制性表达会使叶片组织出现斑驳、黄化、白化的现象.构建绿萍（Lemna minor）LmPDS基因RNAi载体及完成遗传转化研究,对于实现RNAi技术在绿萍中的应用具有重要意义.选取595 bp LmPDS基因片段为干涉片段,利用中间载体pUCCRNAi将克隆的LmPDS干涉片段正反向插入植物表达载体pCAMBIA2300-35S-OCST中.将成功构建的RNAi载体通过农杆菌介导法转入绿萍愈伤,经愈伤抗性筛选、植株再生、植株扩培、标记基因NPTII检测等过程,获得植株70株,其中4株为转基因阳性植株.再经荧光定量PCR分析、番茄红素含量检测、表型观察转基因植株.结果显示,转基因阳性植株LmPDS相对表达量明显下降,为对照的28.8%-40.5%,其番茄红素含量也明显下降,且叶片出现了明显的白化表型.本研究成功构建绿萍LmPDS基因RNAi载体,实现了RNAi在绿萍中的应用,结果可为进一步的绿萍基因功能研究提供材料和方法.（图11表1参30） 

【文章来源】：应用与环境生物学报. 2020,26(02)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

LmPDS-RNAi载体构建图.

分别以c DNA和p UC1质粒为模板，扩增出Lm PDS-Sence、LmPDS-Antisence片段.琼脂糖凝胶电泳结果显示，扩增的条带清晰且条带单一（图4），能够用于后续试验.2.4 重组载体pUC1、pUC2、LmPDS-RNAi的菌液PCR检测及酶切鉴定

以18S rRNA基因为内参基因，q-18S-F和q-18S-R、q-LmPDS-F和q-LmPDS-R为荧光定量PCR引物，检测转基因阳性植株LmPDS基因相对表达量.试验结果表明，4个转基因阳性植株LmPDS基因表达量都明显下降（图8），与对照的相比，1号植株降低为40.5%,2号植株降低为33.2%,3号植株降低为34.7%,4号植株降低为28.8%.表明转入的干扰片段对转录的mRNA发生了沉默作用.图4 LmPDS-Sence、LmPDS-Antisence干涉片段的扩增.

【参考文献】：
期刊论文
[1]基于RNAi的转基因作物研发进展[J]. 张守路,饶力群,汪启明.  现代农业科技. 2018(21)
[2]RNAi技术的最新研究进展[J]. 王伟伟,刘妮,陆沁,凌晓霏,陈航.  生物技术通报. 2017(11)
[3]芥蓝八氢番茄红素脱氢酶基因BaPDS1和BaPDS2的克隆与表达分析[J]. 孙勃,张芬,夏雪,薛生玲,袁巧,陈清,汤浩茹.  园艺学报. 2016(11)
[4]浮萍（Lemna aequinoctialis）干粉对Pb2+的吸附[J]. 陈兰钗,方扬,靳艳玲,陈谦,赵永贵,肖瑶,赵海.  应用与环境生物学报. 2013(06)
[5]溶剂萃取法提取番茄红素的研究[J]. 路世武,李师翁,董玉.  兰州交通大学学报. 2006(06)

硕士论文
[1]蜡梅八氢番茄红素脱氢酶基因CpPds的克隆与表达分析[D]. 陶静静.西南大学 2013
[2]水稻OsELF3基因RNAi载体的构建及其转化研究[D]. 赵俊茗.四川农业大学 2011



本文编号：3249683