核桃JrAMT基因的克隆与功能分析
发布时间：2021-08-13 10:25
氮素是生物体内蛋白质、氨基酸等多种物质的组成部分,也是植物生长最重要的矿质元素之一,被称为生命元素,植物可吸收利用的主要氮源是铵态氮和硝态氮。目前,农作物生长过程中普遍存在氮素利用率较低,大量施用氮肥仍是提高农作物产量的主要手段。研究表明,过多施用氮肥可导致作物抗逆能力下降、土壤结构破坏以及水体污染等。因此,开展氮素高效利用作物种质创新已成为提高氮素利用率的重要途径。核桃（Juglans regia L.）为世界最重要“四大坚果”之一,为国家木本油料发展战略树种。本论文以核桃为研究对象,开展了核桃铵转运蛋白（AMT,ammonium transporter）基因克隆、过表达载体构建,同源转化核桃体细胞胚等研究,以期获得生长良好的核桃铵态氮高效利用再生植株。本研究的主要研究结果如下:（1）成功克隆核桃JrAMT基因、构建过量表达载体并开展了亚细胞定位分析通过同源克隆法成功克隆了核桃JrAMT基因全长cDNA,进行生物信息分析结果表明,该基因长度为1464bp,经过NCBI在线序列比对显示该基因的序列编码的氨基酸序列属于Ammonium Transporter Family。该基因编码的蛋...
【文章来源】：浙江农林大学浙江省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
表达载体pCAMBIA1300-GFP的酶切图谱
转化农杆菌具体操作步骤Figure2.2SpecificstepsfortransformationofAgrobacterium
其中体胚的浓度为280.1ng/μL，体胚的 OD260/OD280=1.98，其浓度和质量达到反转录的要求（图2.3）。图 2.3 核桃体胚总 RNA 凝胶电泳图泳道 1-2 为核桃体胚提取 RNA。Figure2.3 Gel electrophoresis of total RNA of walnut somatic embryosLane 1-2 indicates walnut somatic embryo extract RNA.2.3.2 核桃 JrAMT 基因全长扩增以扩增好的 cDNA 为模板，加入自己设计的上下游引物进行 PCR 扩增，设计退火梯度，扩增核桃 JrAMT 基因。根据电泳显示的条带的亮度最终选择 66.2℃为最佳的退火温度，PCR 扩增后，1%琼脂糖凝胶电泳表明扩增的产物与预期结
【参考文献】：
期刊论文
[1]铵态氮和硝态氮对谷子形态和生物量的影响研究[J]. 崔纪菡,赵静,孟建,刘猛,赵宇,宋世佳,夏雪岩,李顺国. 中国农业科技导报. 2017(10)
[2]植物硝酸盐转运蛋白功能及表达调控研究进展[J]. 宋田丽,周建建,徐晨曦,蔡晓锋,戴绍军,王全华,王小丽. 上海师范大学学报(自然科学版). 2017(05)
[3]增强大肠杆菌MEP2通路发酵生产抗癌药物紫杉醇前体[J]. 黄晓斌,仲蕾蕾. 重庆大学学报. 2017(07)
[4]植物中氮素利用及硝态氮转运蛋白的研究进展[J]. 胡春吉,雷宁,邹良平,彭明. 分子植物育种. 2016(08)
[5]改性核桃壳处理含Cr（Ⅵ）废水的效果[J]. 常爱香,安燕,胡鸣鸣,徐萌飞,杨雪艳. 南方农业学报. 2016(02)
[6]红叶石楠叶片发育的形态特征及色素含量变化[J]. 孔祥海,李思,丁力,邱丰艳. 北方园艺. 2015(24)
[7]核桃壳的化学成分及其功能活性研究进展[J]. 张旭,梁杏,陈朝银,胡启蒙,曹丽娟,赵声兰. 食品研究与开发. 2015(14)
[8]药物联合应用治疗胃炎及胃十二指肠溃疡52例临床疗效分析[J]. 王彩玲. 世界最新医学信息文摘. 2015(53)
[9]核桃产业发展的文献综述[J]. 温广刚. 品牌. 2014(05)
[10]核桃青皮的开发利用研究进展[J]. 仲军梅,刘玉梅. 食品工业科技. 2014(19)
博士论文
[1]超量表达谷氨酰胺合成酶、硝酸根转运蛋白和铵离子转运蛋白家族1基因对水稻氮代谢的功能研究[D]. 蔡红梅.华中农业大学 2009
硕士论文
[1]桑树氮代谢相关基因的克隆及表达分析[D]. 钱娇.江苏科技大学 2016
[2]不同时期施氮对苹果氮素吸收利用及内源激素含量的影响研究[D]. 周乐.山东农业大学 2014
[3]转AtAMT1;1基因甜菜T1代外源基因表达及其功能鉴定[D]. 段娜.内蒙古农业大学 2013
[4]利用抑制性扣除杂交（SSH）技术克隆水稻根系硝态氮诱导基因及诱导基因表达谱的研究[D]. 王小兵.浙江大学 2002
本文编号：3340255
【文章来源】：浙江农林大学浙江省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
表达载体pCAMBIA1300-GFP的酶切图谱
转化农杆菌具体操作步骤Figure2.2SpecificstepsfortransformationofAgrobacterium
其中体胚的浓度为280.1ng/μL，体胚的 OD260/OD280=1.98，其浓度和质量达到反转录的要求（图2.3）。图 2.3 核桃体胚总 RNA 凝胶电泳图泳道 1-2 为核桃体胚提取 RNA。Figure2.3 Gel electrophoresis of total RNA of walnut somatic embryosLane 1-2 indicates walnut somatic embryo extract RNA.2.3.2 核桃 JrAMT 基因全长扩增以扩增好的 cDNA 为模板，加入自己设计的上下游引物进行 PCR 扩增，设计退火梯度，扩增核桃 JrAMT 基因。根据电泳显示的条带的亮度最终选择 66.2℃为最佳的退火温度，PCR 扩增后，1%琼脂糖凝胶电泳表明扩增的产物与预期结
【参考文献】：
期刊论文
[1]铵态氮和硝态氮对谷子形态和生物量的影响研究[J]. 崔纪菡,赵静,孟建,刘猛,赵宇,宋世佳,夏雪岩,李顺国. 中国农业科技导报. 2017(10)
[2]植物硝酸盐转运蛋白功能及表达调控研究进展[J]. 宋田丽,周建建,徐晨曦,蔡晓锋,戴绍军,王全华,王小丽. 上海师范大学学报(自然科学版). 2017(05)
[3]增强大肠杆菌MEP2通路发酵生产抗癌药物紫杉醇前体[J]. 黄晓斌,仲蕾蕾. 重庆大学学报. 2017(07)
[4]植物中氮素利用及硝态氮转运蛋白的研究进展[J]. 胡春吉,雷宁,邹良平,彭明. 分子植物育种. 2016(08)
[5]改性核桃壳处理含Cr（Ⅵ）废水的效果[J]. 常爱香,安燕,胡鸣鸣,徐萌飞,杨雪艳. 南方农业学报. 2016(02)
[6]红叶石楠叶片发育的形态特征及色素含量变化[J]. 孔祥海,李思,丁力,邱丰艳. 北方园艺. 2015(24)
[7]核桃壳的化学成分及其功能活性研究进展[J]. 张旭,梁杏,陈朝银,胡启蒙,曹丽娟,赵声兰. 食品研究与开发. 2015(14)
[8]药物联合应用治疗胃炎及胃十二指肠溃疡52例临床疗效分析[J]. 王彩玲. 世界最新医学信息文摘. 2015(53)
[9]核桃产业发展的文献综述[J]. 温广刚. 品牌. 2014(05)
[10]核桃青皮的开发利用研究进展[J]. 仲军梅,刘玉梅. 食品工业科技. 2014(19)
博士论文
[1]超量表达谷氨酰胺合成酶、硝酸根转运蛋白和铵离子转运蛋白家族1基因对水稻氮代谢的功能研究[D]. 蔡红梅.华中农业大学 2009
硕士论文
[1]桑树氮代谢相关基因的克隆及表达分析[D]. 钱娇.江苏科技大学 2016
[2]不同时期施氮对苹果氮素吸收利用及内源激素含量的影响研究[D]. 周乐.山东农业大学 2014
[3]转AtAMT1;1基因甜菜T1代外源基因表达及其功能鉴定[D]. 段娜.内蒙古农业大学 2013
[4]利用抑制性扣除杂交（SSH）技术克隆水稻根系硝态氮诱导基因及诱导基因表达谱的研究[D]. 王小兵.浙江大学 2002
本文编号：3340255
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