单核细胞的原代分离方法优化及其炎症激活模型的构建

发布时间：2021-09-22 20:25

　　为了得到高纯度高得率的单核细胞（monocyte）并分析其在血栓发生中的作用,本研究利用10位健康人的血样分离出单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,并通过免疫磁珠分选来获得单核细胞,测定PBMC与单核细胞的得率。通过制备血浆中的高丰度蛋白β2GPI,并与其抗体构成抗原抗体复合物来刺激细胞培养,通过荧光定量PCR检测细胞培养基中组织因子TF和TNF-α的含量,构建单核细胞炎症激活模型。实验结果显示单核细胞的得率较高,纯度和活性较好,且β2GPI纯化效果好。荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,添加β2GPI抗原抗体复合物的实验组TF与TNF-αmRNA表达量明显增多。本实验表明纯化的单核细胞被充分激活,在细胞水平上为研究机体炎症反应和血栓形成的分子机理提供了炎症模型。 

【文章来源】：生物资源. 2020,42(02)

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

单核细胞原代分离照片

目前从人体外周血分离单核细胞的方法有很多，如加速红细胞沉降法、细胞分离液不连续密度梯度分离法、贴壁法、流式分选法、免疫磁珠法、基于Fab的无痕亲和细胞选择（TACS?）技术、Colotta法、FicollHypaque密度分离法和密度梯度离心法等，各方法都有其优缺点。如在Ficoll-Hypaque密度分离法中，首先是以1～5倍不等体积的Hank’s液或PBS液将肝素抗凝血稀释，然后将其叠加于LTS1077分层液上（V稀释血液∶V血液为1∶1～4∶1），离心后获得单个核细胞PBMC，再通过洗涤、贴壁6～12h后得到单核细胞，该法所需稀释液及分层液较多，离心液体量较大，且分离出的细胞层次也不太理想[11,12]。贴壁法获得的单核细胞虽耗费时间短，成本低，但其单核细胞的纯度和得率较低，因此其可应用于实验研究的预试阶段[15]。开展对细胞纯度要求较高的实验时，可以选用免疫磁珠法或流式分选法，但流式分选法获得的细胞得率较低，耗费时间长，成本高，并且需要专门的技术人员操作，过程复杂[15]。基于Fab的无痕亲和细胞选择（TACS?）技术是一种相对较新的阳性选择技术，它使用基于CD特异性低亲和力Fab片段的免疫亲和层析来可逆地捕获和释放靶细胞，虽也可以获得高纯度高得率的单核细胞，但其更适合于研究功能参数，其在准备单核细胞和进行单核细胞衍生的DC功能分析方面起着重要作用[16]。图3 TF与TNF-αmRNA表达水平

TF与TNF-αmRNA表达水平

【参考文献】：
期刊论文
[1]间充质干细胞调控单核细胞/巨噬细胞介导炎症反应的研究进展[J]. 陈柄全,彭漪,肖轶,彭智勇,赵吉玲,余国龙.  医学综述. 2019(01)
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[3]三种分离人外周血单核细胞方法的比较[J]. 陈丹,王小东,童静植,丁文,孙科,何景华,强兆艳,李光,康毅.  天津医科大学学报. 2014(06)
[4]TNF-α、IL-6在全身炎症反应综合征表达的研究进展[J]. 田中秋,邓立普.  蛇志. 2008(04)



本文编号：3404331