沙门菌质粒毒力基因spvC抑制巨噬细胞焦亡的机制研究
发布时间：2021-10-24 19:48
目的:沙门菌质粒毒力基因spvC具有磷酸苏氨酸裂解酶活性,可通过丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号传导通路抑制肠道炎症反应,促进细菌全身播散。课题组前期研究发现该作用与其抑制巨噬细胞焦亡密切相关。本研究旨在探究spvC影响巨噬细胞焦亡的机制,为控制沙门菌感染提供新的靶点,并为其他相应疾病治疗提供新的思路。本研究第一部分利用鼠伤寒沙门菌与巨噬细胞共培养建立感染模型,探讨spvC抑制巨噬细胞焦亡与MAPK信号传导通路、焦亡相关炎性小体3（nucleotide-binding oligomerization domain,leucine-richrepeatandpyrindomain-containing3,NLRP3）、炎性小体 4（NLRwith CARD domain-containing 4,NLRC4）及凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC）寡聚的关系。第二部分利用CRISPR/Cas9系统构建敲除焦亡关键蛋白...
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１透射电子显微镜观察Ｊ７７４Ａ．１细胞超微结构??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?ＴＥＭ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?Ｊ７７４Ａ．１?ｃｅｌｌｓ??（Ｗｈｉｔｅ?ａｒｒｏｗｈｅａｄｓ，?ｂａｃｔｅｒｉａ；?ｂｌａｃｋ?ａｒｒｏｗｈｅａｄｓ，?ＰＩＴｓ；?ｗｈｉｔｅ?ａｒｒｏｗｓ，?ｒｕｐｔｕｒｅｄ?ｐｌａｓｍａ??ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．?Ｓｃａｌｅ?ｂａｒ，?５?｜ｉｍ．）??１７??
?ｎ?ｍ?＿??ｃ?＾?ｆ?：?［ｍｉ?ＳＴＭ－ｃ－ｓｊ＾ｖＣ??？；?＾?１０－?Ｓｉｎ?ａ：??｜ｌ〇５－?Ｐ［｜?Ｉ?Ｉ?｜；??ｊ，晒酬ｌ?｜ｌ晒丨??Ｃｏｎｔｒｏｌ?２ｈ?８ｈ?１６ｈ?２４?ｈ??ｔｔｉｉ？ｉｉｉｉｔｉｉｉｉｉｗ？ｉｆｉｉｉｉ＜ｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉ＾ｉｉ？ｉｉ＾ｉｎｉｉｉｉＭ—ｗｉｉｉｗｉｌｒ?ＷＭｇｇａｆｉｇＭｆｔａａｅｉｇｓａｓｆｆｇａｓａｔｆｉＢＢｔｅＫ?ＲｉｕｊＷＢＷＭｗｉｕｗｗＭｗＭｒｉＷｉｉｎｉｉｉｗｗｗｎｎ??Ｔｉｍｅ??图１．４?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测Ｊ７７４Ａ．１细胞ｐ３８磷酸化水平??Ｆｉｇｕｒｅ?１．４?Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｐ３８?ｏｆ?Ｊ７７４Ａ．?１?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ａｎａｌｙｚｅｄ?ｂｙ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??（＊＊＊＊Ｐ＜?０．０００１，?＊Ｐ＜?０．０５）??２．２．２沙门菌质粒毒力基因孕ｖＣ对炎性小体ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＣ４的影响??课题组前期用沙门菌感染的巨噬细胞发现５ｐｖＣ可在感染后期抑制与细胞焦??亡密切相关的炎性小体ＮＬＲＰ３和ＮＬＲＣ４的表达，为进一步探究＃ｖＣ在沙门菌??感染巨噬细胞早期的生物学效应，将三株受试菌分别与过夜培养至对数生长期的??Ｊ７７４Ａ．１细胞共作用，于不同时间点提取各感染组全细胞裂解液总蛋白，Ｗｅｓｔｅｒｎ??ｂｌｏｔ检测炎性小体ＮＬＲＰ３和ＮＬＲＣ４的蛋白水平。??２．２．２．１?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?检测?ＮＬＲＰ３?的蛋白水平??三株受试菌与Ｊ７７４Ａ．１共培养２ｈ、４ｈ和８ｈ，?Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ结果显不感染后??８?ｈ携带５ｐｖＣ沙门菌感染的巨噬细胞Ｊ７７４Ａ．１细胞中焦亡相关蛋白Ｎ
Ｃ抑制巨噬细胞焦亡的机制研宂?第一部分??２?５－ｉ?Ｉ—————Ｉ??＊?以；＾國?Ｃｏｎｔｒｏｌ??Ａ?■??☆?３：?２．０－?Ｅ?丨?Ｅ３?ＳＴＭ－ＷＴ??＊｜?ｓ?ｆ＂！?＝?ｊ?Ｂ?ＳＴＭ－ＪｓｐｉＣ??ｆ?ｆ?ａ?＝?ｉｆｉ?ＩＥ３Ｉ?ＳＴＭ?ｃ?ｓ／ｎＣ??Ｚ?Ｓ?＝?ｆｔ?＝??—ｆｉＬ?ｉｂｉ?－??Ｅ?Ｅ??２?０．５－?：?５?＝??－。。＿丨丨■曜１．??Ｃｏｎｔｒｏｌ?２?ｈ?４?ｈ?＿?—??Ｔｉｍｅ??图１．５?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测Ｊ７７４Ａ．１细胞ＮＬＲＰ３蛋白水平??Ｆｉｇｕｒｅ?１．５?ＮＬＲＰ３?ｏｆ?Ｊ７７４Ａ．?１?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ａｎａｌｙｚｅｄ?ｂｙ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??（＊＊＊＊Ｐ＜?０．０００１）??２．２．２．２?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?检测?ＮＬＲＣ４?的蛋白水平??三株受试菌与〗７７４八．１共培养２１１、４１１和８１１，＇＾５１６〇１５１〇１结果显示感染后??８?ｈ携带沙门菌感染的巨噬细胞Ｊ７７４Ａ．１细胞中焦亡相关蛋白ＮＬＲＣ４低于??敲除株感染组。??ＳＴＭ－ＷＴ?－?＋?－?－?＋?－?－?＋?－?－??ＳＴＭ－／ｄ５／＞ｖＣ?－??ＳＴＭ－ｃ－ｓｐｖＣ?－?－?－?＋?－?－?＋?－?－?＋??ＮＬＲＣ４?？?．為－一丨一辦．?ｍｏｍｒｎ．ｍ?？?１１０?ｋＤａ??Ｈｉｓｔｏｎｅ?Ｈ３?１７?ｋＤａ??２ｈ?４ｈ?Ｌ?版―—Ｊ??二了?Ｃｏｎｔｒｏｌ??＾?ｒ－？?—??＞－Ｘ?．?．?Ａ?＾?ＳＴＭＷＴ??＊－
本文编号：3455874
【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１透射电子显微镜观察Ｊ７７４Ａ．１细胞超微结构??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?ＴＥＭ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?Ｊ７７４Ａ．１?ｃｅｌｌｓ??（Ｗｈｉｔｅ?ａｒｒｏｗｈｅａｄｓ，?ｂａｃｔｅｒｉａ；?ｂｌａｃｋ?ａｒｒｏｗｈｅａｄｓ，?ＰＩＴｓ；?ｗｈｉｔｅ?ａｒｒｏｗｓ，?ｒｕｐｔｕｒｅｄ?ｐｌａｓｍａ??ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．?Ｓｃａｌｅ?ｂａｒ，?５?｜ｉｍ．）??１７??
?ｎ?ｍ?＿??ｃ?＾?ｆ?：?［ｍｉ?ＳＴＭ－ｃ－ｓｊ＾ｖＣ??？；?＾?１０－?Ｓｉｎ?ａ：??｜ｌ〇５－?Ｐ［｜?Ｉ?Ｉ?｜；??ｊ，晒酬ｌ?｜ｌ晒丨??Ｃｏｎｔｒｏｌ?２ｈ?８ｈ?１６ｈ?２４?ｈ??ｔｔｉｉ？ｉｉｉｉｔｉｉｉｉｉｗ？ｉｆｉｉｉｉ＜ｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉ＾ｉｉ？ｉｉ＾ｉｎｉｉｉｉＭ—ｗｉｉｉｗｉｌｒ?ＷＭｇｇａｆｉｇＭｆｔａａｅｉｇｓａｓｆｆｇａｓａｔｆｉＢＢｔｅＫ?ＲｉｕｊＷＢＷＭｗｉｕｗｗＭｗＭｒｉＷｉｉｎｉｉｉｗｗｗｎｎ??Ｔｉｍｅ??图１．４?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测Ｊ７７４Ａ．１细胞ｐ３８磷酸化水平??Ｆｉｇｕｒｅ?１．４?Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｐ３８?ｏｆ?Ｊ７７４Ａ．?１?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ａｎａｌｙｚｅｄ?ｂｙ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??（＊＊＊＊Ｐ＜?０．０００１，?＊Ｐ＜?０．０５）??２．２．２沙门菌质粒毒力基因孕ｖＣ对炎性小体ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＣ４的影响??课题组前期用沙门菌感染的巨噬细胞发现５ｐｖＣ可在感染后期抑制与细胞焦??亡密切相关的炎性小体ＮＬＲＰ３和ＮＬＲＣ４的表达，为进一步探究＃ｖＣ在沙门菌??感染巨噬细胞早期的生物学效应，将三株受试菌分别与过夜培养至对数生长期的??Ｊ７７４Ａ．１细胞共作用，于不同时间点提取各感染组全细胞裂解液总蛋白，Ｗｅｓｔｅｒｎ??ｂｌｏｔ检测炎性小体ＮＬＲＰ３和ＮＬＲＣ４的蛋白水平。??２．２．２．１?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?检测?ＮＬＲＰ３?的蛋白水平??三株受试菌与Ｊ７７４Ａ．１共培养２ｈ、４ｈ和８ｈ，?Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ结果显不感染后??８?ｈ携带５ｐｖＣ沙门菌感染的巨噬细胞Ｊ７７４Ａ．１细胞中焦亡相关蛋白Ｎ
Ｃ抑制巨噬细胞焦亡的机制研宂?第一部分??２?５－ｉ?Ｉ—————Ｉ??＊?以；＾國?Ｃｏｎｔｒｏｌ??Ａ?■??☆?３：?２．０－?Ｅ?丨?Ｅ３?ＳＴＭ－ＷＴ??＊｜?ｓ?ｆ＂！?＝?ｊ?Ｂ?ＳＴＭ－ＪｓｐｉＣ??ｆ?ｆ?ａ?＝?ｉｆｉ?ＩＥ３Ｉ?ＳＴＭ?ｃ?ｓ／ｎＣ??Ｚ?Ｓ?＝?ｆｔ?＝??—ｆｉＬ?ｉｂｉ?－??Ｅ?Ｅ??２?０．５－?：?５?＝??－。。＿丨丨■曜１．??Ｃｏｎｔｒｏｌ?２?ｈ?４?ｈ?＿?—??Ｔｉｍｅ??图１．５?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测Ｊ７７４Ａ．１细胞ＮＬＲＰ３蛋白水平??Ｆｉｇｕｒｅ?１．５?ＮＬＲＰ３?ｏｆ?Ｊ７７４Ａ．?１?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ａｎａｌｙｚｅｄ?ｂｙ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??（＊＊＊＊Ｐ＜?０．０００１）??２．２．２．２?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?检测?ＮＬＲＣ４?的蛋白水平??三株受试菌与〗７７４八．１共培养２１１、４１１和８１１，＇＾５１６〇１５１〇１结果显示感染后??８?ｈ携带沙门菌感染的巨噬细胞Ｊ７７４Ａ．１细胞中焦亡相关蛋白ＮＬＲＣ４低于??敲除株感染组。??ＳＴＭ－ＷＴ?－?＋?－?－?＋?－?－?＋?－?－??ＳＴＭ－／ｄ５／＞ｖＣ?－??ＳＴＭ－ｃ－ｓｐｖＣ?－?－?－?＋?－?－?＋?－?－?＋??ＮＬＲＣ４?？?．為－一丨一辦．?ｍｏｍｒｎ．ｍ?？?１１０?ｋＤａ??Ｈｉｓｔｏｎｅ?Ｈ３?１７?ｋＤａ??２ｈ?４ｈ?Ｌ?版―—Ｊ??二了?Ｃｏｎｔｒｏｌ??＾?ｒ－？?—??＞－Ｘ?．?．?Ａ?＾?ＳＴＭＷＴ??＊－
本文编号：3455874
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3455874.html
教材专著
