桑树miR166f的表达分析及双元超表达载体的构建

发布时间：2021-11-06 11:29

　　MicroRNA（miRNA）在生物生理生化进程、信号传导、细胞调亡、响应生物和非生物胁迫等方面发挥重要功能,本试验克隆桑树miR166f及其前体序列,分析其时空表达特性,并构建用于瞬时表达的miR166f双元超表达载体,为桑树miR166f抗旱功能机制的进一步探究奠定基础。克隆获得了桑树miR166f及其前体序列,pre-miR166f长91 nt,miR166f长21 nt,miR166f在前体的3′臂上,pre-miR166f最小折叠自由能（MEF）为-217.14 kJ/mol,具有典型的植物miRNA前体二级结构特征;miR166f的5′端上游除了包含典型的具有转录起始功能的TATA-box和CAAT-box外,还含有多个胁迫响应顺式作用元件和一些激素响应元件;qRT-PCR分析表明miR166f在桑树不同组织中的相对表达量有较大差异,其中在茎中表达量最高,在木质部中表达量最低;miR166f在高盐和干旱胁迫处理条件下均上调表达,表明该基因参与了桑树的抗逆响应过程;成功构建了用于瞬时转化表达的miR166f的双元超表达载体pCAMBIA-35S-GUS-miR166f,为桑树... 

【文章来源】：蚕业科学. 2020,46(03)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【部分图文】：

桑树miR166f在不同组织中的表达模式

从桑树基因组中选取pre-miR166f(scaffold81)5′端上游3 000 bp的序列，利用PlantCARE在线生物信息学预测软件对其上游序列进行分析，结果如表2所示，miR166f上游启动子序列除了包含典型的具有转录起始功能的TATA-box和CAAT-box外，还含有多个与胁迫响应相关的顺式作用元件，如干旱响应（MBS）、高温应答（HSE）、抗氧化反应（ARE）、真菌诱导响应（Box-W1）和综合防御应答（TC-rich repeats）等；另外还包含一些激素响应元件，如生长素（AuxRR-core）、茉莉酸（CGTCA-motif/TGACG-motif）、赤霉素（P-box）和水杨酸（TCA-element）等。这些结果表明桑树miR166f可能在桑树响应生物和非生物胁迫、调控胁迫相关基因表达方面发挥重要作用。2.4 miR166f靶基因的鉴定验证

桑树miR166f在干旱和高盐等非生物胁迫处理下的表达变化情况见图5。由图5-A可知，桑树miR166f对干旱胁迫的反应很强烈，随着胁迫时间的延长，miR166f表达量逐渐增高，到第10天时达到最高值，为正常条件下的4.33倍，有极显著差异（P≤0.01），到第15天时，表达量骤减为正常条件下的2.05倍，可以看出干旱胁迫能促使桑树miR166f表达量的增加。在高盐胁迫诱导下（图5-B），桑树miR166f的表达量先是逐渐升高，到第4天时升高到最大值，为正常条件下的7.74倍，差异极显著（P≤0.01），之后缓慢降低，到第10天时miR166f表达量降到最低，为正常条件下的1.98倍，在整个高盐胁迫过程中，桑树miR166f的表达量都是高于正常条件下的，说明桑树可以通过增加miR166f的表达量来适应高盐胁迫。2.7 miR166f双元超表达载体的构建和鉴定

【参考文献】：
期刊论文
[1]龙眼miR166家族的分子进化特性及时空表达分析[J]. 林玉玲,张清林,曾友竞,陈晓慧,张梓浩,陈裕坤,赖钟雄.  园艺学报. 2017(12)
[2]桑树基因组计划与桑树产业[J]. 何宁佳,赵爱春,秦俭,曾其伟,向仲怀.  蚕业科学. 2012(01)

硕士论文
[1]桑树miRn51与靶基因研究及桑树瞬时表达体系的建立[D]. 张大燕.西南大学 2015



本文编号：3479754