永生化小鼠成纤维细胞的构建

发布时间：2021-11-22 15:28

　　背景:有研究结果表明,正常的细胞组织在体外培养时可以正常生长和分裂。但经过一段时间后,细胞就会失去生长和分裂的能力,最后走向衰老死亡,这样的现象便限制了对细胞的研究。但是永生化的细胞能够为细胞、肿瘤、组织工程等领域的研究奠定实验基础。因此,怎样才能使体外正常状态下目的细胞成为永生化的细胞成为研究者们研究的重点。研究发现,端粒酶的活性主要受TERT基因调控,当TERT活性增加时,将促进端粒酶利用自身作为模板合成端粒DNA,来弥补染色体复制造成的端粒长度的损失。使细胞获得无限增殖能力,从而实现细胞永生化的目的。因此也可以说明TERT的活性是使细胞永生化的关键。本实验我们发现,通过脂质转染法能将外源hTERT基因转染进目的细胞内来提高hTERT的表达量,也能通过CRISPR/dCas9与TERT的转录激活因子结合的方法来提高内源细胞TERT的表达。目的:通过病毒感染的方法将带有hTERT的慢病毒感染原代细胞,或者使用脂质体转染法将hTERT慢病毒载体转染进原代细胞,使原代细胞中外源hTERT表达量上升,来促进端粒酶的活性,进而维持染色体端粒的长度,使正常状态下快速死亡的原代细胞生长周期变长甚... 

【文章来源】：东华大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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pLenti-CMV-hTERT-3FLAG-P2A-EGFP构建流程

图 2-2：CRISPR-dCas9-SP1 工作原理图）双核酸酶切失活的 dCas9 载体的构建通过查文献，序列比对，我们发现双酶切失活的 dCas9 与本实验室保

图 3-1 带有同源臂的 hTERT 片段的获得带有同源臂的 hTERT M:DNAMakeri-CMV-mcs-3FLAG-P2A-EGFP 载体线性化处理及验证ti-CMV-hTERT-3FLAG-P2A-EGFP载体用ECORI和Ba

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]携带hTERT-P2A-EGFP基因的真核表达质粒的构建及鉴定[D]. 陈晓娜.吉林大学 2017



本文编号：3511976