病毒样颗粒抗原及克里米亚刚果出血热病毒Gn/Gc宿主相互作用组的研究

发布时间：2021-11-23 03:51

　　病毒样颗粒（Virus-Like Particle,VLP）是由一个或多个病毒结构蛋白组装形成的颗粒状结构,与天然病毒粒子形态、抗原性相似。VLP缺失病毒的遗传物质,没有复制和感染能力。VLP的免疫原性良好,研制快速,制备成本较低并且安全,在应对新发、突发病毒疾病的疫苗研制中具有独特优势。杆状病毒表达系统是常用的真核表达系统之一,广泛应用于蛋白功能研究,抗原及疫苗制备。我们利用杆状病毒表达系统构建了几种危害人类健康的病毒VLPs,并初步探究了其作为候选疫苗的免疫原性。寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）是蚊传黄病毒,近年发现其感染与新生儿小头畸形有关,且能引起格林-巴利综合征等神经系统疾病。目前,对于ZIKV引起的疾病,尚无有效的疫苗和特异性治疗药物,ZIKV严重危害人类健康。我们利用杆状病毒表达系统,构建了表达ZIKV pr ME蛋白的重组病毒。经蔗糖密度梯度离心,从感染的昆虫细胞中纯化得到由ZIKV pr M蛋白和E蛋白自组装形成的ZIKV VLPs。以ZIKV pr ME VLPs免疫小鼠能够诱导小鼠产生中和抗体,及ZIKV特异的体液和细胞免疫反应,表现出良好的免疫原性,为... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所)湖北省

【文章页数】：206 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

膜蛋白Gn截短表达示意图

图6.5膜蛋白Gn截短表达示意图Gn单抗识别表位的第二轮鉴定,我们将GnⅠ(1-47)和GnⅡ(38-97)进一步分为Gn(1-17),Gn(8-27),Gn(18-37),Gn(28-47),Gn(38-57),Gn(48-67),Gn(58-77),Gn(68-87)和Gn(78-97)进行截短原核表达,其截短示意图如图6.5所示。29G7和30B7单克隆融合上清与Gn(18-37)和Gn(28-47)融合蛋白有特异性的反应,初步判断识别的表位在18-47 aa范围内,去掉重叠区域,识别表位在28-37 aa,氨基酸序列为GGPGEKITIC。27F2,27F8,27F10,27G3,28C4和28F3单克隆杂交瘤细胞上清与Gn(58-77)和Gn(68-87)融合蛋白有特异性的反应,初步判断识别的表位在58-87 aa范围内,去掉重叠区域,识别表位68-77 aa,氨基酸序列为SASGKSCEID。检测单克隆抗体的亚型分型,结果表明两株Gn mAb的亚型均为IgG1。

Gn单抗识别表位的第二轮鉴定,我们将GnⅠ(1-47)和GnⅡ(38-97)进一步分为Gn(1-17),Gn(8-27),Gn(18-37),Gn(28-47),Gn(38-57),Gn(48-67),Gn(58-77),Gn(68-87)和Gn(78-97)进行截短原核表达,其截短示意图如图6.5所示。29G7和30B7单克隆融合上清与Gn(18-37)和Gn(28-47)融合蛋白有特异性的反应,初步判断识别的表位在18-47 aa范围内,去掉重叠区域,识别表位在28-37 aa,氨基酸序列为GGPGEKITIC。27F2,27F8,27F10,27G3,28C4和28F3单克隆杂交瘤细胞上清与Gn(58-77)和Gn(68-87)融合蛋白有特异性的反应,初步判断识别的表位在58-87 aa范围内,去掉重叠区域,识别表位68-77 aa,氨基酸序列为SASGKSCEID。检测单克隆抗体的亚型分型,结果表明两株Gn mAb的亚型均为IgG1。图6.8 Gc单克隆抗体识别线性表位的鉴定


本文编号：3513067