中间苍白杆菌SCUEC4菌株中尼古丁降解相关ocnC基因的克隆与表达

发布时间：2021-11-25 10:18

　　对中间苍白杆菌SCUEC4菌株中与尼古丁降解相关的ocnC基因进行克隆和表达,并对OcnC蛋白的表达条件进行优化,通过PCR扩增获得ocnC基因,构建重组质粒pET28a（+）-ocnC,转化大肠杆菌BL21（DE3）菌株进行异源表达,采用不同的IPTG浓度、诱导温度和诱导时间对OcnC蛋白进行诱导表达.结果表明:ocnC基因大小为1344 bp,编码蛋白分子量为48.0 kDa,重组表达菌株在IPTG浓度为1.0 mmol·L^-1、诱导温度在37℃及诱导表达时间在20 h的优化表达条件时,OcnC蛋白的表达量较高. 

【文章来源】：中南民族大学学报(自然科学版). 2020,39(01)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

重组质粒pET28a(+)-ocnC的构建

根据以上理化性质的数值分析,由于OcnC蛋白的不稳定指数值小于阈值40,可知OcnC蛋白为稳定蛋白.由于其带负电荷氨基酸数大于带正电荷氨基酸数,可推断OcnC蛋白为酸性蛋白质.根据OcnC蛋白的平均亲水系数值(GRVAY)推测可知,OcnC蛋白属于疏水性蛋白.利用SignalP 4.1 Server在线软件,预测OcnC蛋白中无信号肽序列,推测OcnC蛋白属于非分泌性蛋白.2.3 ocnC基因在大肠杆菌中异源表达

在16 ℃,0.2 mmol·L-1 IPTG的诱导表达条件下, 将pET28a(+)-ocnC重组质粒转化菌株培养20 h.分别吸取菌液、沉淀和上清进行SDS-PAGE电泳,结果如图4所示.与对照含pET28a(+)质粒E. coli BL21(DE3)菌株对比,在40.0～55.0 kDa之间有OcnC蛋白的表达. 沉淀中OcnC蛋白浓度较高,上清中OcnC蛋白浓度较少.2.4 不同浓度IPTG对OcnC蛋白表达量的影响

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3517938