高效肽混合物预分离系统的建立及定量蛋白质组学应用研究

发布时间：2021-12-30 02:44

　　基于质谱的Bottom-up鉴定方法是目前应用最为广泛的蛋白质组学研究策略,它的主要流程是将复杂的蛋白质样品用酶消化成肽段,然后运用液相色谱分离,后续接串联质谱检测,对结果进行检索,根据获得的肽段谱图,与数据库进行匹配,检索蛋白质。这种研究方法面临着样本中蛋白质种类多、丰度分布动态范围极宽的挑战。目前为止,仍然没有一种分离方法能够在一个维度上分辨所有肽段组分。因此,在质谱分析前端,运用二维液相系统进行预分离,降低质谱进样前样本复杂程度,成为当前降低蛋白质组复杂性的重要策略。高pH反相分馏作为第一维离线色谱分离,与低pH反相液相联合成二维液相色谱分离,再与质谱相联用的方法,在复杂生物样本蛋白质组深度覆盖和差异分析研究中获得广泛应用。常规高效液相色谱采用线性连续梯度洗脱模式,具有较高分离效率,而且能灵活改变级联收集方案,但常规液相仍存在各种限制,如对初始样本的大量需求和复杂的合并过程,以及由此带来的肽段的吸附损失。针对以上问题,本文尝试建立基于超高效液（UPLC）和八端口转子阀的微升级预分离系统,在微量样本的情况下,实现对其蛋白质组的深度覆盖。本论文前言部分介绍了常见的二维液相分离方法,蛋... 

【文章来源】：广东药科大学广东省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【图文】：

八端口转子阀分馏原理及分馏实验流程

pH10条件，BSA酶切肽段紫外谱图

胞蛋白提取液酶切肽段预分离前，使用 BSA 酶切肽段作为标品上样，得到的紫外谱图，如图 2-2。在低 pH 条件，细胞蛋白提取液酶切肽段预分离前，也使用 BSA酶切肽段作为标品上样，得到紫外谱图，如图 2-3。图 2-2 pH 10 条件，BSA 酶切肽段紫外谱图Fig.2-2 UV (214 nm) chromatogram of BSA for pH 10


本文编号：3557320