糖基转移酶GT BM 的克
发布时间：2022-01-02 08:27
以耐有机溶剂菌库中的巨大芽孢杆菌（Bacillus megatherium）YZ08为模板,设计相关引物克隆出糖基转移酶基因bmgt,构建工程菌E.coli BL21（DE3）/pET28a-bmgt,诱导表达获得了糖基转移酶GTBM。His-tag标签法纯化得到电泳纯的糖基转移酶GTBM,考察pH、温度、金属离子对酶活的影响及GTBM对二甲基亚砜（DMSO）的耐受性。建立糖基转移酶GTBM蔗糖合成酶SuSy双酶耦联催化体系,优化pH、温度、DMSO浓度、蔗糖浓度、酶液添加量等参数对双酶耦联糖基化芹菜素的影响。结果发现:GTBM有着较好的DMSO耐受性,在pH 7.5、温度35℃、10%（体积分数）DMSO、20 mmol/L蔗糖、0.1 mmol/L尿苷二磷酸（UDP）、60 mU/mL GTBM和20 mU/mL蔗糖合成酶SuSy条件下,芹菜素糖基化反应的转化率在4 h达到95%,且产物单一。GTBM有着较好的DMSO耐受性、区域...
【文章来源】：生物加工过程. 2020,18(06)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
糖基转移酶和蔗糖合成酶的UDPG
由图4可知:当pH在7.5时,其酶活达到最大,最适pH为7.5,在偏碱性缓冲中具有较大的酶活;在pH为7.0～8.5时,该酶表现出最大酶活力的80%以上。在相同pH的不同缓冲液中,其酶活也有略微差别。pH为7.5～8.0时,相同pH下,在Na2HPO4-KH2PO4中的GTBM活性略高于在Tris-HCl中的酶活,这与文献[21]报道的结果基本一致。图4 pH、温度、金属离子和DMSO对GTBM酶活力的影响
pH、温度、金属离子和DMSO对GTBM酶活力的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]HPLC法测定青荚叶中的木犀草素和肉桂酸的含量[J]. 梁春辉,张寒,李雪宁. 应用化工. 2015(06)
[2]蔗糖合酶基因AtSUS3干涉后对拟南芥角果发育的影响[J]. 柴静,俞嘉宁,屈生宪,张会. 西北植物学报. 2013(04)
[3]高效液相色谱法测定芹菜中芹菜素含量[J]. 王克勤,罗军武,陈静萍,严志慧. 食品与机械. 2009(02)
[4]黄酮类化合物药理活性及其构效关系研究进展[J]. 李荣,李俊. 安徽医药. 2005(07)
[5]黄酮类化合物药理作用的研究进展[J]. 曹纬国,刘志勤,邵云,陶燕铎. 西北植物学报. 2003(12)
本文编号：3563845
【文章来源】：生物加工过程. 2020,18(06)
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
糖基转移酶和蔗糖合成酶的UDPG
由图4可知:当pH在7.5时,其酶活达到最大,最适pH为7.5,在偏碱性缓冲中具有较大的酶活;在pH为7.0～8.5时,该酶表现出最大酶活力的80%以上。在相同pH的不同缓冲液中,其酶活也有略微差别。pH为7.5～8.0时,相同pH下,在Na2HPO4-KH2PO4中的GTBM活性略高于在Tris-HCl中的酶活,这与文献[21]报道的结果基本一致。图4 pH、温度、金属离子和DMSO对GTBM酶活力的影响
pH、温度、金属离子和DMSO对GTBM酶活力的影响
【参考文献】：
期刊论文
[1]HPLC法测定青荚叶中的木犀草素和肉桂酸的含量[J]. 梁春辉,张寒,李雪宁. 应用化工. 2015(06)
[2]蔗糖合酶基因AtSUS3干涉后对拟南芥角果发育的影响[J]. 柴静,俞嘉宁,屈生宪,张会. 西北植物学报. 2013(04)
[3]高效液相色谱法测定芹菜中芹菜素含量[J]. 王克勤,罗军武,陈静萍,严志慧. 食品与机械. 2009(02)
[4]黄酮类化合物药理活性及其构效关系研究进展[J]. 李荣,李俊. 安徽医药. 2005(07)
[5]黄酮类化合物药理作用的研究进展[J]. 曹纬国,刘志勤,邵云,陶燕铎. 西北植物学报. 2003(12)
本文编号：3563845
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3563845.html
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